不同亚型肉毒神经毒素蛋白的活性组合筛选方法技术

本发明专利技术适用于生物技术应用研究领域，提供了一种不同亚型肉毒神经毒素蛋白的活性组合筛选方法，包括以下步骤：纯化获得各亚型肉毒神经毒素轻链蛋白酶及LC/TeNT的重组蛋白；检测所述各亚型肉毒神经毒素轻链蛋白酶及LC/TeNT的重组蛋白对特异性重组型底物的水解活性，并获取特异性重组型底物水解活性数据；分别检测所述各亚型肉毒神经毒素轻链蛋白酶及LC/TeNT的重组蛋白、以及组合重组蛋白对特异性内源性天然底物的水解活性，获取特异性内源性天然底物水解活性数据；将所述特异性重组型底物水解活性数据和特异性内源性天然底物水解活性数据进行整理、比较分析，筛选所述各亚型肉毒神经毒素轻链蛋白酶的重组蛋白的活性组合。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物技术应用研究领域，尤其涉及一种不同亚型肉毒神经毒素蛋白的活性组合筛选方法。
技术介绍
梭状神经毒素(ClostridialNeurotoxins，CNTs)是导致人类中毒的最强蛋白质类毒素之一，其中肉毒神经毒素(BotulinumNeurotoxins，BoNTs)导致肌肉松弛性麻痹，破伤风神经毒素(TetanusNeurotoxin，TeNT)导致痉挛性麻痹。CNTs全长为150kDa,整体而言，可划分为N端的活性区域，即轻链(lightchain,LC)，约为50kDa，C端的受体识别和结合区域，即重链(heavychain,HC)，约为100kDa，而重链还可进一步划分为轻链输送区域(HCT)和受体结合区域(HCR)两个亚区域。对BoNTs而言，目前已有七种不同血清型(依次命名为BoNT-A至BoNT-G型)获得分离鉴定，它们能够专一性地靶向神经细胞，并特异性地水解位于神经突触细胞膜上或囊泡膜上的底物，从而抑制神经递质(比如乙酰胆碱)的释放，导致疾病。七种亚型肉毒神经毒素血清型中，BoNT-A、BoNT-B、BoNT-E和BoNT-F型能引起人肉毒中毒症状，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种不同亚型肉毒神经毒素蛋白的活性组合筛选方法，包括下述步骤：纯化获得各亚型肉毒神经毒素轻链蛋白酶及LC/TeNT的重组蛋白；检测所述各亚型肉毒神经毒素轻链蛋白酶及LC/TeNT的重组蛋白对特异性重组型底物的水解活性，并获取特异性重组型底物水解活性数据；将所述各亚型肉毒神经毒素轻链蛋白酶的重组蛋白以不同形式组合、或将所述各亚型肉毒神经毒素轻链蛋白酶与LC/TeNT的重组蛋白以不同形式组合，得到组合重组蛋白，分别检测所述各亚型肉毒神经毒素轻链蛋白酶及LC/TeNT的重组蛋白、以及所述组合重组蛋白对特异性内源性天然底物的水解活性，获取特异性内源性天然底物水解活性数据；将所述特异性重组型底物水解活性...

【技术特征摘要】
1.一种不同亚型肉毒神经毒素蛋白的活性组合筛选方法，包括下述步骤：纯化获得各亚型肉毒神经毒素轻链蛋白酶及LC/TeNT的重组蛋白；检测所述各亚型肉毒神经毒素轻链蛋白酶及LC/TeNT的重组蛋白对特异性重组型底物的水解活性，并获取特异性重组型底物水解活性数据；将所述各亚型肉毒神经毒素轻链蛋白酶的重组蛋白以不同形式组合、或将所述各亚型肉毒神经毒素轻链蛋白酶与LC/TeNT的重组蛋白以不同形式组合，得到组合重组蛋白，分别检测所述各亚型肉毒神经毒素轻链蛋白酶及LC/TeNT的重组蛋白、以及所述组合重组蛋白对特异性内源性天然底物的水解活性，获取特异性内源性天然底物水解活性数据；将所述特异性重组型底物水解活性数据和特异性内源性天然底物水解活性数据进行整理、比较分析，筛选所述各亚型肉毒神经毒素轻链蛋白酶的重组蛋白的活性组合。2.如权利要求1所述的一种不同亚型肉毒神经毒素蛋白的组合筛选方法，其特征在于，所述各亚型肉毒神经毒素轻链蛋白酶至少包括LC/BoNT-A、LC/BoNT-B、LC/BoNT-D、LC/BoNT-E、LC/BoNT-F。3.如权利要求1所述的一种不同亚型肉毒神经毒素蛋白的组合筛选方法，其特征在于，所述特异性内源性天然底物为来自神经元组织、神经元细胞。4.如权利要求3所述的一种不同亚型肉毒神经毒素蛋白的组合筛选方法，其特征在于，所述特异性内源性天然底物为Ne...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈声，郭九标，
申请(专利权)人：香港理工大学深圳研究院，
类型：发明
国别省市：广东;44