一种合成卡贝缩宫素的方法技术

本发明专利技术涉及医药合成领域，公开了一种合成卡贝缩宫素的方法。本发明专利技术所述方法选择保护基tBu替换现有工艺中使用的Alloc以及HOCH2CH2CN来保护(CH2)3COOH，并采用全新的氨基树脂、脱保护剂、酸解剂等完成整个合成过程，在保证总收率的前提下，提高了卡贝缩宫素的纯度，显著降低了单一杂质的含量。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医药合成领域，具体涉及一种合成卡贝缩宫素的方法。
技术介绍
卡贝缩宫素(Carbetocin)是丹麦辉凌制药有限公司研发的一种合成的具有激动剂性质的长效催产素8肽类似物，其临床和药理特性与天然产生的催产素类似。像催产素一样，卡贝缩宫素与子宫平滑肌的催产素受体结合，引起子宫的节律性收缩，在原有的收缩基础上，增加其频率和增加子宫张力。在非妊娠状态下，子宫的催产素受体含量很低，在妊娠期间增加，分娩时达高峰。因此卡贝缩宫素对非妊娠的子宫没有作用，但是对妊娠的子宫和刚生产的子宫具有有效的子宫收缩作用。不论是静脉注射还是肌肉注射卡贝缩宫素后，子宫迅速收缩，可在2分钟内达到一个明确强度。单剂量静脉注射卡贝缩宫素对子宫的活性作用可持续大约1个小时，因此足以预防刚生产后的产后出血。产后给予卡贝缩宫素后，在收缩的频率与幅度方面都比催产素为长。研究表明，当硬膜外或腰麻下剖腹产术后立即单剂量静脉给予卡贝缩宫素100μg，在预防子宫张力不足和减少产后出血方面，卡贝缩宫素明显优于安慰剂。在产后的早期给予卡贝缩宫素也可以促进子宫的恢复。卡贝缩宫素具有以下的结构：[Tyr(Me)1-Ile2-Gln3-Asn4-Cys((CH2)3COO)]5-Pro6-Leu7-GIy8-NH2国内外已有关于卡贝缩宫素制备报道，欧洲专利ES2115543，采用固液结合合成法，其原理为：先通过常规固相多肽合成法，得到4-Cl-Butyl-Tyr(Me)-Ile-Gln-Asn-Cys(Trt)-Pro-Leu-GIy-Rink氨基树脂，酸解后得到线形4-Cl-Butyl-Tyr(Me)-Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly-NH2，线性肽经环化得到卡贝缩宫素。捷克专利CS8605461，同样是采用固液结合合成法，先用固相多肽合成方法合成Z-Ile-Gln-Asn-Cys(Bzl)-Pro-Leu-Gly-O-羟基树脂，然后裂解得到Z-Ile-GIn-Asn-Cys(Bzl)-Pro-Leu-GIy-NH2，氢化后再跟4-溴丁酸反应，得到Ile-Gln-Asn-Cys((CH2)3COOH)-Pro-Leu-Gly-NH2再跟X-Tyr(Me)-OH反应，脱保护，环化得到卡贝缩宫素。但是，在上述两个专利方法中，均以液相进行环化环合，制备过程繁琐，环化收率低，制备成本高，产生大量废液，不适合商业化制备。中国专利CN101555272A，采用固相合成法，先通过常规固相多肽合成法，得到4-Br-Butyl-Tyr(Me)-Ile-Gln-Asn-Cys(Alloc)-Pro-Leu-Gly-Rink氨基树脂，在四三苯基膦钯催化下去Alloc保护，得到4-Br-Butyl-Tyr(Me)-Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly-Rink氨基树脂，在氯化锂催化下进行固相环化，酸解后得到卡贝缩宫素。但该方法Cys(Alloc)在去Alloc保护后SH裸露，易使四三苯基膦钯催化剂中毒而失效，从而严重影响去保护反应的效率，同时在去All保护过程中引入了大量的重金属盐，增加了纯化难度。针对此问题，中国专利CN102260326A，同样采用固相合成法，先通过常规固相多肽合成法，得到Tyr(Me)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys((CH2)3COOAll)-Pro-Leu-Gly-Rink氨基树脂，在四三苯基膦钯催化下去Alloc保护，得到Tyr(Me)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys((CH2)3COOH)-Pro-Leu-Gly-Rink氨基树脂，用常偶联试剂进行固相环化，酸解后得到卡贝缩宫素。该方法虽然克服了四三苯基膦钯催化剂因中毒而失效的问题，但Fmoc-Cys((CH2)3COOAll)制备过程复杂，生产成本高，其次同样会在去All保护过程中引入了大量的重金属盐，增加了纯化难度，导致最大单一杂质偏高，为0.2％，纯度也仅有99.4％，同时去All保护时间长以及去All保护不完全等不利的因素都会影响产品的质量和收率。中国专利CN102796178A公开了一种卡贝宫缩素的固相合成方法，其改变了CN102260326A中保护(CH2)3COOH羧基的保护基Alloc为HOCH2CH2CN，虽然脱保护剂成本降低，利于大规模生产，但是保护基选择不当造成该专利方法中卡贝缩宫素最终的总收率只有51％，而单杂也偏高，纯度为99.3％。目前卡贝缩宫素的纯度最高水平也未超过99.5％，而单一杂质的含量最低也仅是0.2％，工艺水平的原因限制我国卡贝缩宫素产品品质难以有一个较明显的提升，目前急需要对现有工艺进行改进，以期提高产品的整体品质。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种新的合成卡贝缩宫素的方法，使得本专利技术所述方法在保证卡贝缩宫素的总收率前提下显著降低最大单一杂质，提高其纯度。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：步骤1、保护的Gly在缩合试剂和活化试剂作用下和式1所示氨基树脂的氨基进行偶联反应，得到肽树脂1；步骤2、按照卡贝缩宫素氨基酸序列C端到N端的顺序，从肽树脂1出发，在缩合试剂和活化试剂作用下，将保护的Leu、保护的Pro、保护的Cys((CH2)3COOtBu)、保护的Asn、保护的Gln、保护的Ile和保护的Tyr进行逐一延伸偶联，得肽树脂2；步骤3、去除肽树脂2中Cys((CH2)3COOtBu)中的保护基tBu，得肽树脂3；步骤4、肽树脂3在缩合试剂和活化试剂作用下，进行分子内偶联反应环化，得卡贝缩宫素肽树脂；步骤5、卡贝缩宫素肽树脂经酸解剂酸解后得卡贝缩宫素粗品；步骤6、卡贝缩宫素粗品纯化转盐后得卡贝缩宫素纯品；其中，式1左侧圆球表示聚苯乙烯树脂。在传统合成过程中，一般都是采用常规的Rink Amide系列树脂，本专利技术在原有的MBHA树脂上进行改进，提供出一种全新的载体树脂MOBHA树脂，即式1所示树脂，所述式1氨基树脂可购自西安蓝晓科技新材料股份有限公司。本专利技术经过合成本品发现，该树脂不仅在成本上低于RinkAmide系列树脂，而且合成后的产品总收率可达到70％以上。MBHA树脂的结构式如下，左侧的圆球表示聚苯乙烯树脂：卡贝缩宫素主链氨基酸有8个，组成如下：[Tyr(Me)1-Ile2-Gln3-Asn4-Cys((CH2)3COO)]5-Pro6-Leu7-GIy8-NH2。其中，卡贝缩宫素C端的氨基为采用酸解剂从氨基树脂上裂解下来的氨基，其并不属于氨基酸上的氨基。本专利技术针对现有合成工艺中总收率和纯度较低、单一杂质含量较高的问题，本专利技术选择保护基tBu替换现有工艺中使用的Alloc以及HOCH2CH2CN来保护(CH2)3COOH，并采用适宜的氨基树脂、脱保护剂、酸解剂等完成整个合成过程，在保证总收率的前提下，提高了卡贝缩宫素的纯度，显著降低了单一杂质的含量。本专利技术所述保护基是在氨基酸合成领域需要保护氨基酸主链以及侧链上氨基、羧基等干扰合成的基团的保护基团，防止氨基、羧基等在制备目标产物过程中发生反应，生成杂质，如本专利技术通过Ttr保护基保护Asn和Gln的侧链酰胺基，通过tBu保护基保护Cys((CH2)3COOH)的侧链羧基。此外，在本专利技术所述方法本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种合成卡贝缩宫素的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、保护的Gly在缩合试剂和活化试剂作用下和式1所示氨基树脂的氨基进行偶联反应，得到肽树脂1；步骤2、按照卡贝缩宫素氨基酸序列C端到N端的顺序，从肽树脂1出发，在缩合试剂和活化试剂作用下，将保护的Leu、保护的Pro、保护的Cys((CH2)3COOtBu)、保护的Asn、保护的Gln、保护的Ile和保护的Tyr进行逐一延伸偶联，得肽树脂2；步骤3、去除肽树脂2中Cys((CH2)3COOtBu)中的保护基tBu，得肽树脂3；步骤4、肽树脂3在缩合试剂和活化试剂作用下，进行分子内偶联反应环化，得卡贝缩宫素肽树脂；步骤5、卡贝缩宫素肽树脂经酸解剂酸解后得卡贝缩宫素粗品；步骤6、卡贝缩宫素粗品纯化转盐后得卡贝缩宫素纯品；其中，式1左侧圆球表示聚苯乙烯树脂。

【技术特征摘要】
1.一种合成卡贝缩宫素的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、保护的Gly在缩合试剂和活化试剂作用下和式1所示氨基树脂的氨基进行偶联反应，得到肽树脂1；步骤2、按照卡贝缩宫素氨基酸序列C端到N端的顺序，从肽树脂1出发，在缩合试剂和活化试剂作用下，将保护的Leu、保护的Pro、保护的Cys((CH2)3COOtBu)、保护的Asn、保护的Gln、保护的Ile和保护的Tyr进行逐一延伸偶联，得肽树脂2；步骤3、去除肽树脂2中Cys((CH2)3COOtBu)中的保护基tBu，得肽树脂3；步骤4、肽树脂3在缩合试剂和活化试剂作用下，进行分子内偶联反应环化，得卡贝缩宫素肽树脂；步骤5、卡贝缩宫素肽树脂经酸解剂酸解后得卡贝缩宫素粗品；步骤6、卡贝缩宫素粗品纯化转盐后得卡贝缩宫素纯品；其中，式1左侧圆球表示聚苯乙烯树脂。2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述保护的Gly、保护的Leu、保护的Pro、保护的Cys((CH2)3COOtBu)、保护的Asn、保护的Gln、保护的Ile和保护的Tyr如下：Fomc-Gly或Boc-Gly；Fmoc-Leu或Boc-Leu；Fmoc-Pro或Boc-Pro；Fmoc-Cys((CH2)3COOtBu)；Fmoc-Asn(Trt)；F...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄璜，郭德文，曾德志，文永均，
申请(专利权)人：成都圣诺生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51