一种脐带血富血小板血浆PRP的制备方法技术

一种从脐带血制备富血小板血浆PRP的方法，包括如下步骤：将新鲜脐带血低速离心，去除下层细胞层，将上层含血小板的血浆超高速离心，液体分为两层，上层为血浆层，下层沉淀物为血小板；去除上层血浆，留少量血浆在原离心管中，混匀震荡，进行血小板计数，以1ml血浆中存在12±1.25亿左右血小板量的比例混合均匀。本发明专利技术富血小板血浆在治疗软骨损伤、减轻疼痛、恢复功能时效果十分显著，特别是对老年性骨关节病的治疗方面，效果尤为显著。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物医学领域,具体涉及从脐带血中制备富血小板血浆的方法、制备的血浆制剂及其在医学领域中的应用。
技术介绍
随着中国步入老龄化社会，高发率的老年性骨关节病为人类带来了无尽的痛苦，且女性多于男性。本病可发于全身各关节，但好发于负重较大的膝关节、髋关节，脊柱及手指关节等部位。尤以膝、髋关节病变居多。随着生物科学技术的快速发展，大量实验和研究发现富血小板血浆局部注射对老年性骨关节病的治疗效果尤为显著，且有多篇富血小板血浆治疗骨关节病的文章发表。现阶段的富血小板血浆(Platelet-rich plasma,PRP)大多是通过离心的方法从自体血中取出的血小板浓缩物。富血小板血浆(PRP)是1993年Hood等首先提出的。在以后的研究上发现，PRP含有丰富的血小板，其数目比全血中数目高3倍以上，1984年Okuda等首先发现PRP中含有多种生长因子。近些年，在欧美国家中，PRP已经应用到了骨科，临床结果表明PRP可以加快骨折愈合，促进创面修复，减少术中麻醉药的使用剂量，减少术中出血和术后伤口渗出，减轻疼痛，减少术后并发症，缩短住院天数，促进术后功能恢复等功效。PRP在老年性骨关节病的临床上效果更佳，有研究表明，PRP在治疗软骨损伤、减轻疼痛和恢复功能等方面有着显著疗效。河北医科大学窦砚在2013年3月发表的文章《兔自体富血小板血浆对膝关节软骨损伤修复作用的生物力学研究》中，通过研究兔自体PRP修复损伤的内侧胫股关节软骨后膝关节接触面积、压强的变化，来比较实验组与对照组之间术后不同时间段内膝关节生物力学特性的改变。通过此次实验得到结论：第一、兔胫股关节内侧软骨损伤后膝关节处于高负荷下其压力分布改变，未采取有效措施进行修复，其接触面积及压强增加，接触压力增加，5周后出现轻度内翻畸形；第二、兔膝关节软骨损伤后使用PRP可以修复受损软骨，新生软骨组织于5周时恢复正常膝关节软骨组织的接触面积及接触压力。苏州大学陈绩在2009年4月发表的文章《自体富血小板膝关节内移植修复兔损伤半月板的初步研究》中，通过观察兔自体富血小板血浆(Platelet-Rich Plasma PRP)对其半月板损伤模型修复的影响，得到结论：第一、自体PRP可以修复半月板无血供区损伤；第二、自体PRP对修复半月板无血供区损伤，愈合处瘢痕极小对胫股关节面无明显的机械摩擦作用，试验观察发现，PRP对关节面软骨也同样具有保护和修复功能；第三、自体PRP修复半月板损伤的愈合机制是:PRP中的纤维蛋白成分充填裂口构成连接支架。自体PRP含有的符合生理比例的高于生理浓度的各种细胞因子刺激半月板自身纤维软骨细胞增殖并合成细胞外基质随血管长入机化组织连接受损伤裂口，也有机化组织中成纤维细胞母转化为纤维样软骨细胞直接填充损伤裂口等；第四、自体PRP修复半月板创伤小，方法简单易行，并为半月板愈合创造条件。侯靖钊等人在交通医学发表的2016年第30卷第1期的文章《骨髓PRP关节腔内注射治疗膝骨性关节炎效果观察》中，研究骨髓间充质干细胞(BMSCs)及富血小板血浆(PRP)成分对骨性关节炎的作用，选取膝关节骨性关节炎患者180例(206膝)随机分为观察组92例(112膝)，对照组88例(94膝)。观察组在关节腔内注射2mL富集干细胞及PRP悬液，6周后再注射1次，对照组采用关节腔内注射透明质酸钠2mL，每周1次，共5次。治疗3个月、6个月后对患者进行随访，并通过WOMAC评分评估两组患者的临床疗效，研究得到以下的结果和结论。结果：WOMAC评分观察组治疗前45.88±9.54分，治疗后3个月25.26±6.67分，治疗后6个月22.44±5.19分；对照组治疗前46.76±8.06分，治疗后3个月32.12±5.35分，治疗后6个月33.34±6.32分。观察组和对照组治疗后WOMAC评分均得到改善，与治疗前比较差异有统计学意义(P<0.05)；观察组与对照组WOMAC评分比较差异有统计学意义(P<0.05)。观察组临床控制21膝(18.75％)，显效38膝(33.93％)，有效46膝(41.07％)，无效7膝(6.25％)，总有效率93.75％，对照组临床控制5膝(5.32％)，显效28膝(29.79％)，有效39膝(41.49％)，无效22膝(23.40％)，总有效率76.60％。观察组治疗总有效率明显高于对照组，两组比较具有统计学意义(P<0.05)。结论：观察组在治疗膝关节骨性关节炎方面效果明确，值得在临床推广应用。朱毅在中国运动医学杂志发表的2013年4月第32卷第4期的《富血小板血浆疗法的生物机理及其在骨关节疾病中的临床应用》中发现，目前，PRP已在国外广泛应用于组织损伤，并可以根据不同组织类型、发病机理，制成不同剂型，或以某种生长因子为主要成分的血小板浓缩物进行某种疾病的靶向性治疗。PRP的有效性可以持续较长时间，直至血凝块被自身清除、代谢。中国医疗产品市场上的PRP在美国已经获得FDA认证，在应用上具有权威性。PRP作为产品具有以下优点：第一、PRP含有大量的纤维蛋白，可以粘合骨折块和人工骨颗粒，且为修复细胞提供良好的支架，还可以收缩创面；第二、PRP可用凝血酶凝固成胶状，敷于伤口，不仅提供了湿润的环境，有利于伤口愈合生长，还可以使生长因子长时间局限作用于伤口处，避免了目前广泛应用于临床的液态重组生长因子试剂在伤口易流失、易蒸发的缺点；第三、PRP中还含有大量高浓度的白细胞，可以防止感染；第四、PRP能增加自体骨和人工骨的界面效应，使之更好地结合；第五、PRP的应用可减轻术后出血、减轻疼痛、减少术后并发症；第六、PRP制作简单，对患者创伤小，约20～30min即可完成。杨渊发表在中国组织工程研究第19卷49期的文章《富血小板血浆治疗膝骨性关节炎》中，作者在富血小板血浆促进软骨修复的实验基础上，开展了富血小板血浆治疗膝骨性关节炎的临床研究，随访了接受治疗的36例患者，结果发现：第一、富血小板血浆在治疗软骨损伤，以及减轻疼痛和恢复功能方面有着显著的疗效；第二、对年轻和关节软骨损伤较轻的患者临床效果更为明显；第三、临床效果稳定，最长随访病例3年；第四、部分患者注射后出现轻微的关节肿胀和疼痛，大多持续数分钟至数小时，均可自行缓解，这可能与注射速度快、注射量多或者注入到邻近软组织中有关；第五、富血小板血浆治疗相对于其他生物学治疗，其自体源性是最大的优势，无需经过体外培养，有效的杜绝了在体外扩增、培养带来的细胞基因突变、感染等问题，无传播疾病及引起免疫反应的危险；第六、富血小板血浆内的生长因子仅结合于细胞跨膜受体，并不进入细胞或其胞核，因此不具有致突变或诱发肿瘤的效应，而只是加速了正常的愈合过程，安全可靠，应用前景良好。相关文献还有很多，通过这些文献我们发现，目前行业内所应用的大多是自体的PRP，且由于方法的不同、浓度不同、治疗方案不规范等，获取的PRP在治疗效果方面差异很大。然而自体外周血提取的PRP对于老年人骨关节病的使用却很不理想，人的身体到老年时原就很差，在患有骨关节疾病的同时身体常伴有多重其他的疾病，若取其自身的外周血用于治疗其自身的疾病，本身就是对他们的另一种伤害，且老年人的外周血中PRP的活性较差，释放的生长因本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种脐带血富血小板血浆PRP的制备方法，特征在于，包括如下步骤：将新鲜脐带血低速离心，去除下层细胞层，将上层含血小板的血浆超高速离心，液体分为两层，上层为血浆层，下层沉淀物为血小板；去除上层血浆，留少量血浆在原离心管中，混匀震荡，进行血小板计数，以1ml血浆中存在12±1.25亿左右血小板量的比例混合均匀。

【技术特征摘要】
1.一种脐带血富血小板血浆PRP的制备方法，特征在于，包括如下步骤：将新鲜脐带血低速离心，去除下层细胞层，将上层含血小板的血浆超高速离心，液体分为两层，上层为血浆层，下层沉淀物为血小板；去除上层血浆，留少量血浆在原离心管中，混匀震荡，进行血小板计数，以1ml血浆中存在12±1.25亿左右血小板量的比例混合均匀。2.根据权利要求1的从脐带血制备富血小板血浆的方法，特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：孔五一，
申请(专利权)人：孔五一，
类型：发明
国别省市：北京;11