一种有效测定野葛花粉活力的方法技术

本发明专利技术公开了一种有效测定野葛花粉活力的方法，包括以下步骤：制备培养液；所述的培养液由以下质量百分比的原料制备而成：蔗糖15％‑20％、硼酸0.05％‑0.1％、氯化钙0.05％‑0.1％，水余量；花粉采集：于上午10点采集花粉，并将采集到的花粉装入无菌离心管中，避光保存；花粉培养：将滴有培养液的载玻片置于放有湿滤纸的培养皿中，将采集的花粉均匀的撒在培养液上，在黑暗或自然光中培养30‑60分钟；镜检，计算萌发率。本发明专利技术只需培养30‑60分钟即可得到野葛花粉的活力，一定程度上缩短了实验时间，该方法操作简单成本低，更适用于实际的生产应用。

An effective method for determination of pollen viability of Pueraria lobata

The invention discloses a method for effective determination of kudzu pollen viability, which comprises the following steps: preparing culture medium; the culture medium consists of the following weight percentage is prepared with sucrose 15% 20%, 0.05%, 0.1% boric acid and 0.05% calcium chloride 0.1%, water margin; pollen collection: in the morning 10 collecting pollen, and collected pollen into a sterile centrifuge tube, avoid light preservation; Pollen Culture: the culture dish drops slide liquid in a wet filter paper, the collected pollen spread evenly over the medium, in the dark or natural light in the culture of 30 60 min; microscopic examination, calculation of germination rate. The invention only needs 60 minutes to get 30 training kudzu pollen viability, to a certain extent shortened the time of the experiment, this method has simple operation and low cost, more suitable for the actual production application.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及农业领域，具体涉及一种有效测定野葛花粉活力的方法。
技术介绍
野葛为豆科葛属植物，别名葛藤，甘葛等。我国葛根的栽培历史悠久，迄今已有6千多年。我国现有十多种葛属品种，且种质资源极为丰富，产量质量均居全球之首。野葛是我国传统的大宗中药材，富含淀粉及异黄酮类物质，其中淀粉具有可食用性，异黄酮类物质具有降血压血脂，扩张冠状动脉，抗氧化，提高大脑记忆能力，保护肝功能等作用，具有良好的食用价值和药用价值，属于国家卫生部公布的药食两用资源，是重要的地区经济作物之一。在植物体中，成熟的花粉包含着植物体的全部遗传信息，花粉贮藏是有效利用珍稀种质的简捷、高效途径。在进行野葛杂交授粉和人工辅助授粉工作中，通常需要进行花粉贮藏和花粉活力的测定。如何鉴定、采集高纯度和高生活力的花粉对后期的杂交育种工作至关重要。花粉活力是花粉细胞存活能力的指标，是花粉生物学特性研究中的一项重要内容，花粉活力的大小可以估测花粉授精和遗传后代的能力。花粉活力受自身遗传特性和外界因素的影响。现有技术对花粉活力的测定中，染色法测定时染色时间不易把握，且有时候颜色重叠，在显微镜下不易观察；形态学观察法虽然简单，但有些花粉形态正常，其实已经失去活力，统计起来也会有误差；花粉离体培养测定法是相对有效，接近实际结果的测定方法，但不同植物有着不同的离体萌发培养测定条件，还需要进一步摸索。目前，关于有效测定野葛花粉活力的方法还未见报道。
技术实现思路
为解决上述问题，本专利技术提供了一种有效测定野葛花粉活力的方法，高效、快速、简便、成本低。为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：一种有效测定野葛花粉活力的方法，包括以下步骤：S1、制备培养液；所述的培养液由以下质量百分比的原料制备而成：蔗糖15％-20％、硼酸0.05％-0.1％、氯化钙0.05％-0.1％，水余量；S2、花粉采集：于上午10点采集花粉，并将采集到的花粉装入无菌离心管中，避光保存；S3、花粉培养：将滴有培养液的载玻片置于放有湿滤纸的培养皿中，将采集的花粉均匀的撒在培养液上，在黑暗或自然光中培养30-60分钟；S4、镜检，以花粉管长度达到花粉粒直径的2倍及以上视为萌发，计算萌发率。所述萌发率通过以下公式进行计算：萌发率＝[(B1+B2+B3+B4+B5+B6+B7+B8)/A]×100％＝(B/A)×100％；式中，A为圆形培养皿的面积，B1-B8为镜检时圆形培养皿均分成8个区域内的每个区域内花粉萌发的面积；B为8个区域中花粉萌发的面积之和。其中，每个小区域中萌发的花粉的面积统计方法为(以B1区域为例)：萌发的花粉区域具有不确定性，但是萌发区域总会有类似三角形，圆形，四边形等形状的区域，此时计算面积则以三角形，圆形或者四边形的面积计算公式去计算，然后将所得的面积进行求和，得到B1区域的面积。本专利技术具有以下有益效果：1、只需培养30-60分钟即可得到野葛花粉的活力，一定程度上缩短了实验时间，该方法操作简单，更适用于实际的生产应用。2、培养基质的配制简单易操作，相比其它人工、贵重微量元素等费用、成本低。3、可以实时观察，提前检测花粉活力，避免直接人工授粉后由于野葛花粉活性的缺失而造成的经济损失。具体实施方式为了使本专利技术的目的及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。以下实施例中，所述萌发率通过以下公式进行计算：萌发率＝[(B1+B2+B3+B4+B5+B6+B7+B8)/A]×100％＝(B/A)×100％；式中，A为圆形培养皿的面积，B1-B8为镜检时圆形培养皿均分成8个区域内的每个区域内花粉萌发的面积；B为8个区域中花粉萌发的面积之和。每个小区域中萌发的花粉的面积统计方法为(以B1区域为例)：萌发的花粉区域具有不确定性，但是萌发区域总会有类似三角形，圆形，四边形等形状的区域，此时计算面积则以三角形，圆形或者四边形的面积计算公式去计算，然后将所得的面积进行求和，得到B1区域的面积。实施例1一种有效测定野葛花粉活力的方法，包括以下步骤：S1、制备培养液：称取150g蔗糖，0.1g硼酸，0.1g氯化钙加水定容至1L，溶解，即制得培养液；S2、花粉采集：于上午10点采集花粉，将所述花粉装入无菌离心管中，避光保存；S3、花粉培养：将滴有培养液的载玻片置于放有湿滤纸的培养皿中，将采集的花粉均匀的撒在培养液上，在自然光中培养45分钟；S4、镜检，计算萌发率为76％，花粉管生长的一致性高，适于萌发率的观察和计算。实施例2一种有效测定野葛花粉活力的方法，包括以下步骤：S1、制备培养液：称取200g蔗糖，0.05g硼酸，0.1g氯化钙加水定容至1L，溶解，即制得培养液；S2、花粉采集：于上午10点采集花粉，将所述花粉装入无菌离心管中，避光保存；S3、花粉培养：将滴有培养液的载玻片置于放有湿滤纸的培养皿中，将采集的花粉均匀的撒在培养液上，在黑暗中培养60分钟；S4、镜检，计算萌发率为82％，花粉管生长的一致性高，适于萌发率的观察和计算。实施例3一种有效测定野葛花粉活力的方法，包括以下步骤：S1、制备培养液：称取175g蔗糖，0.1g硼酸，0.05g氯化钙加水定容至1L，溶解，即制得培养液；S2、花粉采集：于上午10点采集花粉，将所述花粉装入无菌离心管中，避光保存；S3、花粉培养：将滴有培养液的载玻片置于放有湿滤纸的培养皿中，将采集的花粉均匀的撒在培养液上，在自然光中培养30分钟；S4、镜检，计算萌发率为78％，花粉管生长的一致性高，适于萌发率的观察和计算。实施例4一种有效测定野葛花粉活力的方法，包括以下步骤：S1、制备培养液：称取150g蔗糖，0.1g硼酸，0.05g氯化钙加水定容至1L，溶解，即制得培养液；S2、花粉采集：于上午10点采集花粉，将所述花粉装入无菌离心管中，避光保存；S3、花粉培养：将滴有培养液的载玻片置于放有湿滤纸的培养皿中，将采集的花粉均匀的撒在培养液上，在黑暗中培养45分钟；S4、镜检，计算萌发率为75％，花粉管生长的一致性高，适于萌发率的观察和计算。实施例5一种有效测定野葛花粉活力的方法，包括以下步骤：S1、制备培养液：称取175g蔗糖，0.05g硼酸，0.1g氯化钙加水定容至1L，溶解，即制得培养液；S2、花粉采集：于上午10点采集花粉，将所述花粉装入无菌离心管中，避光保存；S3、花粉培养：将滴有培养液的载玻片置于放有湿滤纸的培养皿中，将采集的花粉均匀的撒在培养液上，在自然光中培养45分钟；S4、镜检，计算萌发率为76％，花粉管生长的一致性高，适于萌发率的观察和计算。验证试验为了验证本专利技术有效测定野葛花粉活力的方法的效果，设计以下试验进行验证。不同培养液配方对野葛花粉活力测定的影响1、设计22组含蔗糖，硼酸和氯化钙的不同浓度梯度的培养培养液，编号1-21，其中编号19-21用于检测氯化钙浓度对花粉萌发率和花粉管生长一致性的影响情况；另选用花粉基本培养基作为对照，编号22：质量浓度为5％的蔗糖，质量浓度为0.1％的硼酸，质量浓度为0.1％的氯化钙。具体参数如表1所示。表1对比试验中各成分的配比2、将滴有培养液的载玻片置于放有湿滤纸的培养皿中，将采集的花粉均匀的撒在培养液上，黑暗室温本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种有效测定野葛花粉活力的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、制备培养液；所述的培养液由以下质量百分比的原料制备而成：蔗糖15％‑20％、硼酸0.05％‑0.1％、氯化钙0.05％‑0.1％，水余量；S2、花粉采集：于上午10点采集花粉，并将采集到的花粉装入无菌离心管中，避光保存；S3、花粉培养：将滴有培养液的载玻片置于放有湿滤纸的圆形培养皿中，将采集的花粉均匀的撒在培养液上，在黑暗或自然光中培养30‑60分钟；S4、镜检，以花粉管长度达到花粉粒直径的2倍及以上视为萌发，计算萌发率。

【技术特征摘要】
1.一种有效测定野葛花粉活力的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、制备培养液；所述的培养液由以下质量百分比的原料制备而成：蔗糖15％-20％、硼酸0.05％-0.1％、氯化钙0.05％-0.1％，水余量；S2、花粉采集：于上午10点采集花粉，并将采集到的花粉装入无菌离心管中，避光保存；S3、花粉培养：将滴有培养液的载玻片置于放有湿滤纸的圆形培养皿中，将采集的花粉均匀的撒在培养液上，在黑暗或自然光中培养30-6...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭坤元，何美军，林先明，王华，张宇，穆森，
申请(专利权)人：湖北省农业科学院中药材研究所，
类型：发明
国别省市：湖北;42