snoRNA、组合物以及应用制造技术

本发明专利技术涉及特定的RNA序列作为药物的应用。本发明专利技术特别涉及本发明专利技术人已经表明参与老化机制的核仁小RNA(snoRNA)的应用。本发明专利技术的snoRNA尤其可用于增加患者的抗应激性，控制老化的有害效应，通常用于预防或治疗退行性疾病、核纤层蛋白病、糖尿病、肥胖症或癌症，以及通常用于延长患者的寿命。本发明专利技术的snoRNA还可以用于生育力治疗。本发明专利技术还涉及能够表达本发明专利技术的snoRNA的载体、细胞、遗传修饰的动物、和组合物，以及利用本发明专利技术的前述产物之一作为工具来鉴定在预防或治疗与老化机制有关的疾病、异常或失调中有活性的分子的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】专利
本专利技术涉及特定RNA序列作为药物的应用。更确切地说，它涉及专利技术人已经说明参与老化机制的核仁小RNA(snoRNA)的应用。本专利技术的snoRNA尤其可用于增加受试者的应激抗性，对抗老化的有害效应，通常用于预防或治疗退行性疾病尤其是神经退行性疾病、核纤层蛋白病尤其是郝-吉二氏综合征(Hutchinson–Gilford，HGPS)(亦称早老症)、糖尿病、肥胖症或癌症，以及更通常地，延长受试者的寿命。本专利技术的snoRNA还可以用于治疗不育症。本专利技术还涉及能够表达本专利技术的snoRNA的载体、细胞、转基因动物和组合物，以及利用任何上述本专利技术产物作为鉴定在预防或治疗与老化机制有关的病理、异常、失调或者表观或功能退化中有活性的分子的工具的方法。
技术介绍
老化机制(即，生存和复制能力随着年龄逐渐减退)已经困扰了社会和科学界几个世纪之久。有两种当前流行的理论，一种是老化由遗传预编程的进化途径引起，另一种是老化是生存期间细胞和分子损伤积累的生存的正常后果。这种损伤将包括由自由基、线粒体缺陷、体细胞突变、端粒的逐渐缩短、细胞程序性死亡和损伤细胞的增殖等引起的氧化性损伤(Semsei I.(2000)关于老化的性质(On the nature of aging.).Mech Aging Dev 117:93–108)。已经显示，在生物体如酵母和小鼠中，减少热量对延长寿命发挥着决定性的正面影响(Sohal，R S，Weindruch，R(1998)氧化应激，热量限制，和老化(Oxidative stress，caloric restriction，and aging).Science273:59–63；Finch，C E，Revkun，G.(2001)老化遗传学(The genetics of aging).Annu.Rev.Genom.Hum.Genet.2:435–462)。最近的研究已经显示，热量限制在灵长类动物、包括人类中也将是有效的(Roth，G S，Lasnikov，V，Lesnikov，M，Ingram，D K，Land，M A(2001)饮食热量限制防止了猕猴的血浆褪黑素水平的年龄相关的减退(Dietary caloric restriction prevents the age–related decline in plasma melatonin levels of rhesus monkeys).J Clin Endocrinol Metab.86：3292–5；Roth G S，Lane M A，Ingramn D K，Mattison J A，Elahi D，Tobin J D，Muller D，Metter E J(2002)热量限制的生物标志物可以预测人类寿命(Biomarkers of caloric restriction may predict longevity in humans).Science.297：811–813；Walford R L，Mock D，Verdery R，MacCallum T.(2002)生物圈中热量限制2：在受到2年期限制的人类中生理、血液、激素和生化参数的改变(Calorie restriction in biosphere 2：alterations in physiologic，hematologic，hormonal，and biochemical parameters in humane restricted for a 2–year period).J Gerontol A Biol Sci Med Sci 57：211–24)。不幸的是，也许大部分人类不能够遵循从这种发现中受益所要求的严格饮食。若干年来，很多科研团队已经致力于鉴定参与老化过程的基因和信号传导途径。在此报告的研究在许多生物体包括酵母酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、蠕虫秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)和蝇黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)(Fontana等，2010)中进行，并使得鉴定了日益增长的基因名单。它们中的许多参与激素信号传导并在多种多样的真核生物中是保守的。已经很清楚，至少对于低级物种而言，在生命开始时负责发育和生长的途径保持终身的影响并且甚至部分决定着生命的期限。这些研究还间接显示了代谢能力和应激抗性对于评价受试者寿命的重要性。例如，秀丽隐杆线虫的clk–1基因的突变体参与减少活性氧物质的线粒体外产生(Hekimi，S，Guarente，L.(2003)老化过程的遗传学和特殊性(Genetics and the specificity of the aging process).Science 299:1351–1354)。专利WO 98/17823描述了clk–1基因在发育和寿期过程中的功能。它具体要求了通过调控clk–1基因表达来增加个体寿命的方法。还已经描述了玛士撒拉(Methuselah)基因(其编码G–蛋白偶联受体)的突变能够将果蝇的寿命增加大约35％(US 6,303,768)。端粒缩短也已知是造成细胞老化的机制。在脊椎动物中，端粒酶是核糖核蛋白(RNP)逆转录酶，其作用是通过向正在分裂的真核细胞中的染色体末端添加端粒DNA来保持端粒的长度(Kiss，2002)。在人类中，端粒酶snoRNA的H/ACA框中的突变引起多效遗传疾病，先天性角化不良，其患者存在较短的端粒(Mitchell等，1999；Vulliamy等，2001)。尽管科学界的努力破解了老化的机制并鉴定了新的治疗靶来延迟这种过程和/或抗争它的有害效应，但可利用的工具仍然不足。由于医学进步与生活条件的全面改善相结合已经在仅仅数十年间就让人口以非常显著的方式增加了预期寿命，所以愈发感到需要容许没有通常与老年有关的疾病和不适的“幸福老年”的工具。
技术实现思路
本专利技术涉及专利技术人已经证明了特别参与老化机制的目标RNA序列的预防性或治疗性应用。他们特别说明了这些序列通过停止老化机制并对抗与之相关的有害效应而引人瞩目地增加了受试者的寿命的能力。本专利技术的序列还对抗与老化有关的疾病例如退行性疾病、核纤层蛋白病和癌症、以及糖尿病和肥胖症。他们已经证实了在不孕症或不育症治疗(即，受孕困难或不能受孕)以及增加受试者、尤其是已经达到性成熟的受试者、优选年长受试者对应激的抗性上特别有效。本专利技术的第一个目的涉及一种分离或合成的RNA序列，其包含序列SEQ ID NO:1、同源序列，优选直系同源序列、或功能类似的序列，所述RNA序列用作药物。本专利技术人已经证明了在果蝇中发现的RNA序列SEQ ID NO:1与哺乳动物例如灵长类动物和人类以及啮齿动物例如小鼠和大鼠中的直系同源序列对应。本专利技术还涵盖了在本文本中描述的一种或另一种应用中使用优选选自人类来源的序列SEQ ID NO:2以及小鼠来源的序列SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4的分离或合成RNA序列。在本文本的表1中鉴定的序列SEQ ID NO:2、3、4、9、11、13、15、17、19、21、22、24、26和28是与SEQ ID NO:1直系同源的序列的实例。本文档来自技高网...

【技术保护点】
分离或合成的RNA序列，其包含序列SEQ ID NO:1、直系同源序列或功能类似的序列，所述RNA序列用作药物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.11.07 FR 13608891.分离或合成的RNA序列，其包含序列SEQ ID NO:1、直系同源序列或功能类似的序列，所述RNA序列用作药物。2.权利要求1所述的RNA序列，其特征在于所述直系同源序列是人类来源的并包括序列SEQ ID NO:2或者是小鼠来源的并包括选自SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4的序列。3.权利要求1或2所述的RNA序列，其特征在于所述序列是核仁小RNA(snoRNA)。4.权利要求1所述的RNA序列，其特征在于所述功能类似的序列容许剪接选自Ir56d、buttonhead、klarsicht、CG3262、CG30502(fa2h)、CG11125、CG9339和CG40006的黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)基因。5.权利要求1至4任一项所述的RNA序列，其用于延长受试者的寿命、增加抗应激性、或对抗受试者中老化的有害效应。6.权利要求1至5任一项所述的RNA序列，其用于在受试者中预防或治疗退行性疾病、特别是神经退行性疾病、核纤层蛋白病、糖尿病、肥胖症或癌症。7.权利要求6所述的RNA序列，其特征在于所述癌症是由自由基引起的癌症。8.权利要求1至3任一项所述的RNA序列，其用于在受试者中治疗不育症或刺激生育力。9.权利要求5至8任一项所述的RNA序列，其特征在于所述受试者是动物或昆虫，典型地是哺乳动物，优选人类，甚至更加优选是不表达权利要求1至3任一项所述的RNA序列或表达所述RNA序列的异常版本的受试者，经历应激状态例如禁食、热冲击或氧化应激的受试者，和/或患有退行性疾病、核纤层蛋白病、糖尿病、肥胖症、癌症或生育力问题的受试者。10.权利要求9所述的RNA序列，其特征在于不表达权利要求1至3任一项所述的RNA或表达所述RNA序列的异常版本的受试者的基因组含有包含突变的DNA序列，所述序列是选自SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8的野生状态；并且所述突变优选选自一个或多个碱基对的缺失、取代或添加。11.编码权利要求1至10任一项所述的RNA序列的DNA序列。12.允许表达权利要求1至4任一项所述的RNA序列的载体，所述载体选自例如质粒、粘粒、病毒载体和噬菌体，优选包含促进所述RNA序列在肠细胞或卵巢细胞中表达的启动子和/或调控子元件。13.包含权利要求1至4任一项所述的RNA序列或利用权利要求12所述的载体转化...

【专利技术属性】
技术研发人员：简雷纳·马丁，
申请(专利权)人：法国国家科学研究中心，
类型：发明
国别省市：法国;FR