伊血安颗粒中原儿茶酸和原儿茶醛的含量测定方法技术

本发明专利技术公开了一种伊血安颗粒中原儿茶酸和原儿茶醛的检测方法，包括以下步骤：(1)伊血安颗粒加入甲醇超声提取制得供试品溶液；(2)供试品溶液经高效液相色谱仪检测，色谱条件：梯度洗脱，紫外检测波长：0～20min为256nm，20～30min为279nm。本方法对测定条件中的色谱柱、检测波长、色谱流动相、柱温以及样品前处理方法均进行了优化，从而保证本方法的重现性和稳定性良好，可帮助实现伊血安颗粒成品质量的有效控制。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及药物检测领域，特别是一种伊血安颗粒中原儿茶酸和原儿茶醛的含量测定方法。
技术介绍
伊血安颗粒是一种治疗妇科血症的中成药，主要成份为滇桂艾纳香、益母草、延胡索、甘草等，具有活血止血、行气止痛等功效。临床上用于产后恶露不绝，人工流产后子宫出血不净，中医辩证属血瘀证者。其中君药滇桂艾纳香为瑶族民间草药，来源于菊科植物滇桂艾纳香[Blumea riparia(BL)DC.]的干燥全草，具有活血化瘀、敛血止血等功能；滇桂艾纳香是被现代人发掘利用的，所以在古籍文献中都未见有记载，其主要产于云南东南部、广西西南部及广东西南部。目前，国内对滇桂艾纳香化学成分的研究报道很少。有研究证实滇桂艾纳香中活性成分原儿茶酸能增大冠脉流量、抑制血小板聚集，具有止咳化痰、抗菌等作用；原儿茶醛具有扩张冠状动脉、降低心肌耗氧量、抗氧化、抗炎等作用。国家食品药品监督管理局标准YBZ00292008中，伊血安颗粒的含量测定方法采用恒速的流动相只测定原儿茶酸的含量，供试品溶液是采用水饱和正丁醇溶液提取制备；该法对主要有效成分原儿茶酸存在较大的阴性干扰，测定不准确，不能有效控制成品中原儿茶酸的含量。公布号为CN 104215708 A的专利申请公开了用于治疗妇科血症的中药复方颗粒的含量检测方法，采用同一色谱条件下同时测定原儿茶酸和原儿茶醛的含量，供试品溶液经甲醇回流提取，在酸性条件用乙醚萃取制得。如此有效消除了阴性干扰，又能提高原儿茶酸和原儿茶醛的提取率，但该法样品前处理过程较为复杂，且梯度洗脱的时间较长，原儿茶酸在恒定的紫外波长条件下也不能获得较大的吸收峰。
技术实现思路
本专利技术提供了一种伊血安颗粒中原儿茶酸和原儿茶醛的含量测定方法，本方法的重现性和稳定性良好，可帮助实现伊血安颗粒成品质量的有效控制，。为实现上述目的，本专利技术的技术方案为：一种伊血安颗粒中原儿茶酸和原儿茶醛的含量测定方法，其特征在于包括以下步骤：(1)供试品溶液的准备：取伊血安颗粒，加入体积分数为60～100％甲醇水溶液，超声提取30～60min，放冷，采用相同体积分数的甲醇水溶液补足减失的重量，过滤，取续滤液，离心，取上清液，得供试品溶液；(2)取供试品溶液经高效液相色谱仪检测，然后计算获得伊血安颗粒中原儿茶酸和原儿茶醛的含量。以上所述的步骤(2)中，在计算获得伊血安颗粒中原儿茶酸和原儿茶醛的含量之前还包括标准曲线的绘制：A.对照品溶液的准备：称取原儿茶酸对照品和原儿茶醛对照品，加甲醇溶解并定容，摇匀，制得原儿茶酸对照品溶液和原儿茶醛对照品溶液；B.取步骤A制得的对照品溶液，与甲醇混合配制成不同浓度的对照品溶液的标准工作溶液，取不同浓度的对照品溶液的标准工作溶液，按照与供试品溶液相同的检测条件在高效液相色谱仪中进行检测，得到原儿茶酸和原儿茶醛的标准曲线和线形回归方程。优选的，所述步骤(2)中，高效色相色谱仪的检测条件为：色谱柱以十八烷基键合硅胶为填料，采用梯度洗脱，流动相为甲醇与0.1％的色谱用冰乙酸组成的梯度洗脱液，柱温20～35℃，流速为0.8～1.2mL·min-1；所述梯度洗脱的程序设为时间梯度0min→9min→19min→20min→30min，对应的梯度洗脱液按以下体积比由流动相A甲醇和流动相B0.1％冰乙酸组成，流动相A的体积百分数梯度8％→9％→10％→14％→15％，流动相B的体积百分数梯度92％→91％→90％→86％→85％；紫外检测波长：0～20min为256nm，20～30min为279nm。优选的，所述步骤(1)中，称取5g伊血安颗粒，加入15mL体积分数为60～100％甲醇水溶液进行超声提取；更优选的，所述步骤(1)中，甲醇水溶液的体积分数为80％。优选的，所述步骤(1)中，超声提取的时间为45min。优选的，所述步骤(2)中，流速为1mL·min-1。优选的，所述步骤(2)中，柱温为25℃。优选的，所述步骤(2)中，色谱柱为Phenomenex Gemini C18柱，采用的保护柱为Phenomenex C18柱。优选的，所述步骤(2)中，色谱柱的理论塔板数按原儿茶酸和原儿茶醛峰计不低于5000。本专利技术中，所述甲醇水溶液的体积分数是指含甲醇的体积分数。以上所述的高效液相色谱测定伊血安颗粒中原儿茶酸和原儿茶醛含量的方法，具有以下优点：(1)采用甲醇为提取溶剂对伊血安颗粒进行超声提取，可使伊血安颗粒的有效物质完全溶解于提取溶剂，且在提取的过程简单快捷，易于操作；(2)以甲醇和0.1％冰乙酸组成的梯度洗脱液作为流动相，能对供试品中不同极性的物质进行有效地分离，且缩短了分析时间，减少了流动相的消耗；(3)根据原儿茶酸和原儿茶醛的最大吸收波长不同，在检测过程中转换紫外检测波长，可实现在同时测定原儿茶酸和原儿茶醛含量时，原儿茶酸和原儿茶醛均能获得较好的吸收峰；(4)本方法对测定条件中的色谱柱、检测波长、色谱流动相、柱温以及样品前处理方法均进行了优化，从而保证本方法的重现性和稳定性良好，可帮助实现伊血安颗粒成品质量的有效控制，确保临床使用疗效，为伊血安颗粒的疗效稳定确切提供了可靠保障。附图说明图1是实施例1中采用Welchrom C18柱(4.6mm×250mm，5μm)得到的色谱图；图2是实施例1中采用Hypersil C18柱(4.6mm×250mm，5μm)得到的色谱图；图3是实施例1中采用Phenomenex Gemini C18柱(4.6mm×250mm，5μm)得到的色谱图；图4是实施例1中采用乙腈-水为流动相得到的色谱图；图5是实施例1中采用乙腈-0.1％冰乙酸为流动相得到的色谱图；图6是实施例1中采用甲醇-水为流动相得到的色谱图；；图7是实施例1中采用甲醇-0.1％冰乙酸为流动相得到的色谱图；图8是实施例1中流速为0.8mL·min-1得到的色谱图；图9是实施例1中流速为1.0mL·min-1得到的色谱图；图10是实施例1中流速为1.2mL·min-1得到的色谱图；图11是实施例1中柱温为20℃得到的色谱图；图12是实施例1中柱温为25℃得到的色谱图；图13是实施例1中柱温为30℃得到的色谱图；图14是实施例1中柱温为35℃得到的色谱图；图15是实施例1中波长为256nm得到的色谱图；图16是实施例1中波长为279nm得到的色谱图；图17是实施例1中波长为256nm(0～20min)-279nm(20～30min)得到的色谱图；图18是实施例2中以甲醇为提取溶剂提取后检测得到的色谱图；图19是实施例2中以乙醇为提取溶剂提取后检测得到的色谱图；图20是实施例2中以水为提取溶剂提取后检测得到的色谱图；图21是实施例2中提取第一次时提取液检测得到的色谱图；图22是实施例2中提取第二次时提取液检测得到的色谱图；图23是实施例3中原儿茶酸的标准工作曲线；图24是实施例3中原儿茶醛的标准工作曲线；图25是实施例4中原儿茶酸和原儿茶醛对照品溶液的色谱图；图26是实施例4中供试品溶液的色谱图；图27是实施例4中阴性对照溶液的色谱图；1-原儿茶酸吸收峰，2-原儿茶醛吸收峰。具体实施方式以下结合具体实施例对本专利技术作进一步说明，但本专利技术的保护范围不限于以下实施例：实施例1：色谱仪条件的优化供试品溶液的准备方法：取伊血安颗粒5g，置具塞锥形瓶本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种伊血安颗粒中原儿茶酸和原儿茶醛的含量测定方法，其特征在于包括以下步骤：(1)供试品溶液的准备：取伊血安颗粒，加入体积分数为60～100％甲醇水溶液，超声提取30～60min，放冷，采用相同体积分数的甲醇水溶液补足减失的重量，过滤，取续滤液，离心，取上清液，得供试品溶液；(2)取供试品溶液经高效液相色谱仪检测，然后计算获得伊血安颗粒中原儿茶酸和原儿茶醛的含量。

【技术特征摘要】
1.一种伊血安颗粒中原儿茶酸和原儿茶醛的含量测定方法，其特征在于包括以下步骤：(1)供试品溶液的准备：取伊血安颗粒，加入体积分数为60～100％甲醇水溶液，超声提取30～60min，放冷，采用相同体积分数的甲醇水溶液补足减失的重量，过滤，取续滤液，离心，取上清液，得供试品溶液；(2)取供试品溶液经高效液相色谱仪检测，然后计算获得伊血安颗粒中原儿茶酸和原儿茶醛的含量。2.根据权利要求1所述的伊血安颗粒中原儿茶酸和原儿茶醛的含量测定方法，其特征在于：所述步骤(2)中，高效色相色谱仪的检测条件为：色谱柱以十八烷基键合硅胶为填料，采用梯度洗脱，流动相为甲醇与0.1％的色谱用冰乙酸组成的梯度洗脱液，柱温20～35℃，流速为0.8～1.2mL·min-1；所述梯度洗脱的程序设为时间梯度0min→9min→19min→20min→30min，对应的梯度洗脱液按以下体积比由流动相A甲醇和流动相B0.1％冰乙酸组成，流动相A的体积百分数梯度8％→9％→10％→14％→15％，流动相B的体积百分数梯度92％→91％→90％→86％→85％；紫外检测波长：0～20min为256nm，20～30min为279nm。3.根据权利要求1所述的伊血安颗粒中原儿茶酸和原儿茶醛的含量测定方法，其特征在于：所述步骤(1)中，称取5g伊血安颗粒，加入15mL体积分数为60～100％甲醇水溶液进行超声提取。4.根据权利要求1所述的伊血安颗粒中原儿茶酸和原儿茶醛的含量测定方法，其特征在于：所述步骤(2)中...

【专利技术属性】
技术研发人员：李修善，慕丽群，毛金玲，农常东，
申请(专利权)人：广西万寿堂药业有限公司，
类型：发明
国别省市：广西;45