制备包含内皮细胞的生物砖的方法以及由此制备的生物砖技术

本发明专利技术涉及生物学，再生医学，生物打印(例如3D生物打印)，组织工程学等技术领域。特别地，本发明专利技术涉及一种可用于生物打印(例如3D生物打印)和组织工程的生物砖，包含所述生物砖的组合物(例如生物墨汁)，所述生物砖的制备方法以及其用途，以及包含所述生物砖或者使用所述生物砖/生物墨汁构建的构建体(例如三维构建体)，其中所述生物砖包括：细胞，包裹细胞(例如内皮细胞)的核层，和，封装核层的壳层。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物学，再生医学，生物打印(例如3D生物打印)，组织工程学等
特别地，本专利技术涉及一种可用于生物打印(例如3D生物打印)和组织工程的包含内皮细胞的生物砖，包含所述生物砖的组合物(例如生物墨汁)，所述生物砖的制备方法以及其用途，以及包含所述生物砖或者使用所述生物砖/生物墨汁构建的包含微血管的构建体(例如三维构建体)。
技术介绍
在人体组织中，细胞按照一定的规则和顺序进行排列与分布。不同功能的组织，其细胞排布不同。例如，构成上皮组织的上皮细胞呈单层紧密排列以保证其保护功能；肌细胞成条索状排列以保证其收缩功能；神经细胞间平行排列或交织成网以增强其信息传递功能等。细胞排布的异常，表现为细胞形态、细胞间连接、细胞群整体功能的异常。各种组织器官的病理变化过程中均存在细胞排布异常，引起细胞功能异常并导致组织器官整体结构和功能的破坏。例如，肝脏肿瘤组织中肝细胞条索排布紊乱，无正常肝小叶结构；小肠上皮细胞排布紊乱引起细胞屏障作用受到破坏，肠道内毒素吸收增加并形成内毒素血症；血管平滑肌细胞排布紊乱，引起血管顺应性降低、弹性减弱、抗压力能力减弱等。因此，实现对细胞的精确排布是人工构建组织器官的关键。3D生物打印技术是近几年来兴起的一项技术，其已被尝试用于构建复杂的组织和器官。目前已报道了数种3D生物打印技术，其中最受关注的是，CYFUSE BIOMEDICAL KK公司提出的3D生物打印技术(下文简称为Cyfuse技术，参见例如美国专利申请US 14/126,681，以及Organovo公司提出的3D生物打印技术(下文简称为Organovo技术，参r>
见例如中国专利申请CN103946374A)。Cyfuse技术主要涉及以下步骤：构建细胞球，形成微型组织块；通过“剑山”将不同的微型组织块以特定的空间排布形式堆叠在一起，并进一步通过细胞自发融合的特性，将堆叠的微型组织块连接在一起形成所需结构的组织。Organovo技术的基本原理如下：首先制备生物打印所需的生物墨汁(即，细胞)和生物纸(通常是凝胶)；然后，根据准备打印的组织或器官的3D模型，通过下述步骤使用生物墨汁和生物纸进行3D打印：(1)打印一层生物墨，即，将一层细胞置于另一层细胞或凝胶之上；(2)打印一张生物纸，即，将一层凝胶置于细胞上；(3)不断重复步骤(1)和(2)，直至打印完成新组织或器官。然而，这些已知的生物打印技术也存在着显著的缺陷。特别地，目前已经知晓的生物打印方法均无法实现对细胞的精确排布，从而也不能制造出具有精细结构的微组织团块。与此同时，在目前已经知晓的生物打印方法中，所使用的细胞均缺乏力学保护。因此，当将细胞用于3D生物打印时，细胞易于因外界压力或剪切力的伤害而受损或死亡。这大大限制了生物打印技术的应用。此外，一些已知的生物打印技术在构建微型组织块时，需要使用大量细胞，这进一步严重限制了生物打印技术的应用。因此，目前已知的3D生物打印技术均无法实现以细胞数量可控、细胞精确排布的方式构建具有三维结构的复杂组织或器官，并且所制备三维构建体的细胞存活率较低，且尺寸受到了严重的限制。微血管是组织内部细胞获取营养物质及排出代谢物的唯一通道。使用生物砖构建的人工构建体(如人工组织)，需要能够形成微血管，以使其内部细胞能够存活。因此，内部具备微血管是组织块具备生物学功能的重要条件。专利技术概述为了解决上述技术问题，本申请专利技术人开发了一种可用于打印组织
或器官的基础单元，生物砖。本专利技术的生物砖所包裹的细胞类型和细胞数目是可控的，并且生物砖本身的尺寸也是可控的，从而其可用于制备标准化、可控化的生物墨汁，并且由此所制备的生物墨汁可在生物打印过程中实现细胞的精确排布，实现组织或器官的精确生物打印。此外，本专利技术的生物砖还给细胞提供了有效的力学保护，从而确保了细胞在打印过程中存活率(达到90％以上)。本专利技术的生物砖可用作生物打印的基础单元，并且还可用作研究工具。本专利技术的生物砖还可形成包含微血管的人工构建体(如人工组织)。因此，在一个方面，本专利技术提供了一种生物砖，其包括：细胞，包裹所述细胞的核层，和，封装所述细胞和核层的壳层，其中所述核层包裹的细胞包括内皮细胞和任选地未分化的细胞(例如干细胞、祖细胞或其组合)，并且所述核层和壳层各自独立地由生物可降解材料制成。在本专利技术的某些优选实施方案中，所述核层和壳层中的生物可降解材料能够减少或避免生物砖内的细胞在操作(例如生物打印)过程中遭受机械损伤，并且能够提供物质(例如营养物质，细胞外基质，细胞因子，药物活性成分等)的可控释放，以促进细胞活性和功能(增殖、分化、迁移、分泌或新陈代谢)。在另一个方面，本专利技术提供了一种组合物(例如生物墨汁)，其包含本专利技术的生物砖，并且任选地，还包含载体(所述载体优选包含生物粘合剂)。在另一个方面，本专利技术提供了用于制备本专利技术的生物砖的方法，其包括下述步骤：(1)提供一种或多种核层材料，所述核层材料各自独立地由生物可降解材料制成，并且各自独立地包裹相同或不同的细胞或细胞组合；其中所述细胞包括内皮细胞，优选地，还包括未分化的细胞，例如干细胞、祖细胞或其组合；(2)提供一种或多种壳层材料，所述壳层材料各自独立地由生物可降解材料制成；(3)从步骤(1)所述的一种或多种核层材料中选择一种核层材料，并
将其颗粒化，从而获得第一核层；(4)任选地，使用来自步骤(1)的一种核层材料或使用来自步骤(2)的一种壳层材料对前一步骤获得的产物进行包被；(5)任选地，重复步骤(4)一次或数次；(6)使用来自步骤(2)的一种壳层材料对前一步骤的产物进行包被，从而产生所述生物砖。在另一个方面，本专利技术提供了用于制备本专利技术的生物砖的方法，其包括下述步骤：(1)将细胞与用于形成核层的生物可降解材料混合，以提供包裹细胞的核层材料，其中所述细胞包括内皮细胞，优选地，还包括未分化的细胞，例如干细胞、祖细胞或其组合；和(2)将核层材料颗粒化，并使用用于形成壳层的生物可降解材料进行包被，从而制备所述生物砖。在另一个方面，本专利技术提供了用于制备本专利技术的组合物(其例如为生物墨汁)的方法，其包括下述步骤：将本专利技术的生物砖与载体(所述载体优选包含生物粘合剂)混合。在另一个方面，本专利技术提供了一种包含微血管的构建体(例如三维构建体，组织前体，组织或器官)，其包含本专利技术的生物砖，或者使用本专利技术的生物砖或组合物(例如生物墨汁)制备。在另一个方面，本专利技术提供了一种制备包含微血管的构建体(例如三维构建体、组织前体、组织或器官)的方法，其包括，使用本专利技术的生物砖或组合物(例如生物墨汁)进行生物打印(例如3D生物打印)的步骤。在另一个方面，还提供了本专利技术的生物砖的用途。例如，本专利技术的生物砖可用于培养细胞(例如用于细胞的三维培养)；或用于使细胞生长、增殖、分化、分泌或迁移；或用于生物打印(例如3D生物打印)；或用于形成包含微血管的构建体(例如三维构建体)，例如组织前体、组织或器官。本专利技术的生物砖或构建体还可用于各种应用，例如用于研究领域或医药领域的应用。例如，本专利技术的生物砖或构建体可用于研究干细胞
分化，用于药物发现，用于药物筛选，用于体内或体外测定，用于植入宿主体内，用于组织工程或用于组织再生。在另一个方面本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备生物砖的方法，其包括下述步骤：(1)提供一种或多种核层材料，所述核层材料各自独立地由生物可降解材料制成，并且各自独立地包裹相同或不同的细胞或细胞组合；其中所述细胞包括内皮细胞，优选地，还包括未分化的细胞，例如干细胞、祖细胞或其组合；(2)提供一种或多种壳层材料，所述壳层材料各自独立地由生物可降解材料制成；(3)从步骤(1)所述的一种或多种核层材料中选择一种核层材料，并将其颗粒化，从而获得第一核层；(4)任选地，使用来自步骤(1)的一种核层材料或使用来自步骤(2)的一种壳层材料对前一步骤获得的产物进行包被；(5)任选地，重复步骤(4)一次或数次；(6)使用来自步骤(2)的一种壳层材料对前一步骤的产物进行包被，从而产生所述生物砖；优选地，在步骤(1)中，将细胞、用于形成核层的生物可降解材料和任选的期望的额外试剂(例如，营养物质、细胞外基质、细胞因子和/或药物活性成分)均匀混合，从而获得核层材料；优选地，步骤(2)所述的壳层材料不包含细胞；优选地，在步骤(3)‑(6)中，使用制备微球体的仪器，例如造粒仪来进行颗粒化和包被；优选地，在每一次进行步骤(4)之后，如果所获得的产物的最外层包被为壳层材料，则任选地进行下述步骤：对最外层包被进行处理(例如使用壳层固定液进行处理，例如，以改善壳层的力学性能)；优选地，在步骤(6)之后，对所获得的生物砖的最外侧壳层进行处理(例如使用壳层固定液进行处理，例如，以改善壳层的力学性能)；优选地，所述方法在无菌条件下进行；优选地，所述方法在GMP工作间里进行；优选地，所述方法在步骤(6)之后，将获得的生物砖贮存于4℃，例如贮存3小时、6小时、12小时、1天、2天、或3天。...

【技术特征摘要】
2015.04.07 CN 2015101609420;2015.10.22 CN 201510691.一种制备生物砖的方法，其包括下述步骤：(1)提供一种或多种核层材料，所述核层材料各自独立地由生物可降解材料制成，并且各自独立地包裹相同或不同的细胞或细胞组合；其中所述细胞包括内皮细胞，优选地，还包括未分化的细胞，例如干细胞、祖细胞或其组合；(2)提供一种或多种壳层材料，所述壳层材料各自独立地由生物可降解材料制成；(3)从步骤(1)所述的一种或多种核层材料中选择一种核层材料，并将其颗粒化，从而获得第一核层；(4)任选地，使用来自步骤(1)的一种核层材料或使用来自步骤(2)的一种壳层材料对前一步骤获得的产物进行包被；(5)任选地，重复步骤(4)一次或数次；(6)使用来自步骤(2)的一种壳层材料对前一步骤的产物进行包被，从而产生所述生物砖；优选地，在步骤(1)中，将细胞、用于形成核层的生物可降解材料和任选的期望的额外试剂(例如，营养物质、细胞外基质、细胞因子和/或药物活性成分)均匀混合，从而获得核层材料；优选地，步骤(2)所述的壳层材料不包含细胞；优选地，在步骤(3)-(6)中，使用制备微球体的仪器，例如造粒仪来进行颗粒化和包被；优选地，在每一次进行步骤(4)之后，如果所获得的产物的最外层包被为壳层材料，则任选地进行下述步骤：对最外层包被进行处理(例如使用壳层固定液进行处理，例如，以改善壳层的力学性能)；优选地，在步骤(6)之后，对所获得的生物砖的最外侧壳层进行处理(例如使用壳层固定液进行处理，例如，以改善壳层的力学性能)；优选地，所述方法在无菌条件下进行；优选地，所述方法在GMP工作间里进行；优选地，所述方法在步骤(6)之后，将获得的生物砖贮存于4℃，例如贮存3小时、6小时、12小时、1天、2天、或3天。2.权利要求1的方法，其中，所述核层包裹的内皮细胞获自动物，例如哺乳动物，例如人、猿、大猩猩、牛、猪、犬、绵羊和山羊；所述内皮细胞包括静脉内皮细胞、动脉内皮细胞，优选脐静脉内皮细胞，更优选人脐静脉内皮细胞；优选地，所述核层包裹的干细胞为多能干细胞，例如诱导的多能干细胞；优选地，所述核层包裹的干细胞包括间充质干细胞；优选地，所述间充质干细胞是骨髓、脂肪、脐带、脐带血、和/或胎盘来源的间充质干细胞，更优选地，所述间充质干细胞是骨髓来源的间充质干细胞；优选地，所述间充质干细胞获自动物，例如哺乳动物，例如人、猿、大猩猩、牛、猪、犬、绵羊和山羊；优选地，所述核层包裹的细胞包括额外细胞，所述额外细胞来源于选自下述的组织：结缔组织(例如，疏松结缔组织、致密结缔组织、弹性组织、网状结缔组织和脂肪组织)、肌肉组织(例如，骨骼肌、平滑肌和心肌)、泌尿生殖组织、胃肠组织、肺组织、骨组织、神经组织和上皮组织(例如，单层上皮和复层上皮)、内胚层来源的组织、中胚层来源的组织和外胚层来源的组织；优选地，所述额外细胞选自肌肉细胞(例如，骨骼肌细胞、心肌细胞、平滑肌细胞和成肌细胞)、结缔组织细胞(例如，骨细胞、软骨细胞、成纤维细胞以及分化为成骨细胞、软骨细胞或淋巴组织的细胞)、骨髓细胞、皮肤细胞、上皮细胞、乳腺细胞、血管细胞、血细胞、淋巴细胞、神经细胞、许旺细胞、胃肠细胞、肝细胞、胰细胞、肺细胞、气管细胞、角膜细胞、泌尿生殖细胞、肾细胞、脂肪细胞、实质细胞、周细胞、间皮细胞、基质细胞、内胚层来源的细胞、中胚层来源的细胞、外胚层来源的细胞、癌来源的细胞，细胞系、或其任何组合；更优选地，所述额外细胞为肝细胞；优选地，所述内皮细胞和所述未分化的细胞包裹于同一核层或不同核层，例如所述内皮细胞位于第一核层且所述未分化的细胞位于第二核
\t层，或者相反；优选地，所述内皮细胞、所述未分化的细胞和所述额外细胞包裹于同一核层或不同核层，例如其中两种细胞位于同一核层(例如第一核层)而第三种位于另一核层(例如第二核层)。3.权利要求1或2的方法，其中，所述内皮细胞占细胞总数量的1％-100％，例如，2％-90％、3％-80％、4％-70％、5％-60％、5.5％-50％、6％-40％、6.5％-30％、7％-20％、7.5％-19％、8％-18％、8.5％-17％、9％-16％、9.1％-15％、9.2％-14％、9.3％-13％、9.4％-12％、9.5％-11.5％、9.6％-11％、9.7％-10.9％、9.8％-10.8％、9.9％-10.7％、9.9％-10.6％、9.9％-10.5％、9.9％-10.4％、9.9％-10.3％、9.9％-10.2％、9.9％-10.1％、或10.0％；优选地，所述未分化的细胞占细胞总数量的0％-99％，例如，1％-90％、5％-80％、10％-70％、15％-65％、20％-60％、25％-55％、30％-50％、35％-45％、36％-44％、37％-43％、38％-42％、39％-41％、39.1％、39.2％、39.3％、39.4％、39.5％、39.6％、39.7％、39.8％、39.9％、40.0％、40.1％、40.2％、40.3％、40.4％、40.5％、40.6％、40.7％、40.8％或40.9％；优选地，所述生物砖包含一个或多个细胞，例如1-106个细胞，例如10-900、20-800、30-700、40-600、50-500、60-400、70-300、80-200、10-100、10-103、10-104、10-105、10-106个细胞；优选地，所述生物砖的尺寸为20-2000μm，例如30-1900μm，40-1800μm，50-1700μm，60-1600μm，70-1500μm，80-1400μm，90-1300μm，100-1200μm，200-1000μm，300-800μm，400-600μm，100-500μm；优选地，所述生物砖为球形，或者任何期望的形状(例如立方体，矩形棱柱，六棱柱，圆柱，或不规则的形状)；优选地，所述生物砖为固体或半固体，例如凝胶态；优选地，所述生物砖以混合物的形式存在；优选地，所述生物砖是分离的生物砖；优选地，所述生物砖提供于容器中。4.权利要求1-3任一项的方法，其中，所述内皮细胞与未分化的细胞的比例为约1:20-约1:1,例如约1:19、约1:18、约1:17、约1:16、约1:15、约1:14、约1:13、约1:12、约1:11、约1:10、约1:9、约1:8、约1:7、约1:6、约1:5、约1:4、约1:3、约1:2、或约1:1.5；优选地，所述内皮细胞与未分化的细胞的比例为约1:15、约1:14、约1:13、约1:12、约1:11.5、约1:11、约1:10.5、约1:10、约1:9.5、约1:9、约1:8.5、约1:8、约1:7、约1:6；更优选地，所述内皮细胞与未分化的细胞的比例为约1:10；最优选地，所述内皮细胞为人脐静脉内皮细胞，所述未分化的细胞为骨髓来源的间充质干细胞，所述人脐静脉内皮细胞与所述骨髓来源的间充质干细胞的比例为约1:10；任选地，所述生物砖还包括额外细胞，其中所述额外细胞的数量与内皮细胞的数量比例为约1:1；更优选地，所述额外细胞为肝细胞；最优选地，所述人脐静脉内皮细胞、肝细胞和骨髓来源的间充质干细胞的比例为约1:1:10。5.权利要求1-4任一项的方法，其中，所述核层材料能够为细胞的生命活动提供微环境(例如，促进细胞的生命活动的物理、生物或化学因素)；优选地，所述核层材料各自独立地由生物可降解材料制成，并且所述生物可降解材料是生物相容性的；优选地，用于制备核层材料的生物可降解材料是天然存在的(例如来源于动植物的天然存在的生物可降解材料)，人工合成的，重组产生的，经过改性的，或者其任何组合；优选地，用于制备核层材料的所述生物可降解材料包含：天然存在的可降解聚合物，例如胶原蛋白，纤维蛋白，壳聚糖，海藻酸盐(例如海藻酸钠)，淀粉，透明质酸，层粘连蛋白，琼脂糖，明胶，葡聚糖，以及其任意组合；和/或，经过改性的可降解聚合物，例如经过改性的海藻酸盐，例如氧
\t化海藻酸盐(例如氧化海藻酸钠)；和/或，合成的可降解聚合物，例如聚磷腈，聚丙烯酸及其衍生物(例如聚甲基丙烯酸，丙烯酸和甲基丙烯酸的共聚物)，聚乳酸(PLA)，聚羟基乙酸(PGA)，聚乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)，聚原酸酯(POE)，聚己内酯(PCL)，聚羟基丁酸酯(PHB)，聚氨基酸(例如聚赖氨酸)，可降解性聚氨酯，以及其任何组合；优选地，用于制备核层材料的所述生物可降解材料能够被酶(例如细胞分泌的酶)所降解；优选地，所述核层材料的降解能够提供维持或促进所述细胞的生命活动的营养物质；优选地，用于制备核层材料的所述生物可降解材料选自胶原蛋白(例如I型，II型，III型胶原蛋白)、纤维蛋白、壳聚糖、海藻酸盐(例如海藻酸钠)、氧化海藻酸盐(例如氧化海藻酸钠)、淀粉、透明质酸、层粘连蛋白、弹性蛋白、明胶、葡聚糖、聚氨基酸(例如聚赖氨酸)、琼脂糖、可降解性聚氨酯，或其任何组合；优选地，所述核层材料包含I型胶原蛋白和/或海藻酸盐，例如包含I型胶原蛋白和/或海藻酸钠；或者，包含层粘连蛋白；或者，包含淀粉；或者，包含可降解性聚氨酯；或者，包含海藻酸盐(例如海藻酸钠)和氧化海藻酸盐(例如氧化海藻酸钠)；优选地，所述核层材料为凝胶状。6.权利要求1-5任一项的方法，其中，所述壳层材料能够为核层材料包裹的细胞提供力学保护；优选地，所述壳层材料各自独立地具有0.01-0.4GPa的硬度，例如0.01-0.02、0.02-0.03、0.03-0.04、0.04-0.05、0.05-0.06、0.06-0.07、0.07-0.08、0.08-0.09、0.09-0.1、0.1-0.15、0.15-0.2、0.2-0.3、0.3-0.4、0.01-0.4、0.01-0.05、0.05-0.1、0.1-0.2、0.2-0.4、0.05-0.15、或0.06-0.1GPa的硬度；和/或，具有0.01-100MPa的弹性模量，例如0.01-0.05、0.05-0.1、0.1-0.5、0.5-0.8、0.8-1、1-1.2、1.2-1.4、1.4-1.6、1.6-1.8、1.8-2、2-2.4、2.4-2.8、2.8-3.2、3.2-4、4-10、10-20、20-30、30-40、40-50、50-80、80-100、0.5-4、
\t0.5-1、1-1.5、1.5-2、2-3、0.8-1.6、1.4-2.4、0.8-3.2、0.01-100、1-100、10-100、或0.5-50MPa的弹性模量；优选地，所述壳层材料能够为细胞的生命活动提供微环境，例如，促进细胞的生命活动的物理、生物或化学因素；优选地，所述壳层材料各自独立地由生物可降解材料制成，并且所述生物可降解材料是生物相容性的；优选地，不同的壳层材料的组成成分不同；优选地，用于制备壳层材料的生物可降解材料是天然存在的(例如来源于动植物的天然存在的生物可降解材料)，人工合成的，重组产生的，经过改性的，或者其任何组合；优选地，用于制备壳层材料的所述生物可降解材料包含：天然存在的可降解聚合物，例如胶原蛋白，纤维蛋白，壳聚糖，海藻酸盐(例如海藻酸钠或海藻酸钙)，淀粉，透明质酸，层粘连蛋白，琼脂糖，明胶，葡聚糖，以及其任意组合；和/或，经过改性的可降解聚合物，例如经过改性的海藻酸盐，例如氧化海藻酸盐(例如氧化海藻酸钠)；和/或，合成的可降解聚合物，例如聚磷腈，聚丙烯酸及其衍生物(例如聚甲基丙烯酸，丙烯酸和甲基丙烯酸的共聚物)，聚乳酸(PLA)，聚羟基乙酸(PGA)，聚乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)，聚原酸酯(POE)，聚己内酯(PCL)，聚羟基丁酸酯(PHB)，聚氨基酸(例如聚赖氨酸)，可降解性聚氨酯，以及其任何组合；优选地，用于制备壳层材料的所述生物可降解材料能够被酶(例如细胞分泌的酶)所降解；优选地，所述壳层材料的降解能够提供维持或促进所述细胞的生命活动的营养物质；优选地，用于制备壳层材料的所述生物可降解材料选自胶原蛋白(例如I型，II型，III型胶原蛋白)、纤维蛋白、壳聚糖、海藻酸盐(例如海藻酸钠或海藻酸钙)、氧化海藻酸盐(例如氧化海藻酸钠)、淀粉、透明质酸、层粘连蛋白、弹性蛋白、明胶、葡聚糖、聚氨基酸(例如聚赖氨酸)、琼脂糖，或其任何组合；优选地，所述壳层材料包含海藻酸盐(例如海藻酸钠或海藻酸钙)，例
\t如包含海藻酸钙和明胶，任选地还包含弹性蛋白；或者，包含氧化海藻酸盐(例如氧化海藻酸钠)；或者，包含海藻酸盐(例如海藻酸钠或海藻酸钙)和氧化海藻酸盐(例如氧化海藻酸钠)；或者，包含海藻酸盐(例如海藻酸钠或海藻酸钙)和琼脂糖。7.权利要求1-6任一项的方法，其中，所述壳层材料各自独立地为通透性的；例如，所述壳层材料对于水，氧气，和营养物质(糖类例如葡萄糖、脂肪、蛋白质、氨基酸、短肽、矿物质、维生素、细胞因子、核苷酸)是通透性的。8.权利要求1-7任一项的方法，其中，所获得的生物砖包括：细胞，包裹细胞的核层，和，封装核层的壳层；优选地，所述生物砖包括至少一个核层，例如1个、2个、3个、4个、5个或更多个核层；优选地，所述生物砖包括至少2个核层；优选地，所述生物砖包括至少一个壳层，例如1个、2个、3个、4个、5个或更多个壳层；优选地，所述生物砖包括至少2个壳层；优选地，所述生物砖包括：一个核层和一...

【专利技术属性】
技术研发人员：康裕建，左潇，
申请(专利权)人：四川蓝光英诺生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51