【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及微生物领域中鉴定或辅助鉴定啤酒生产过程污染微生物的系统及其应用。
技术介绍
啤酒生产是一个纯种酵母酿造的过程，任何细菌以及外来野生酵母的污染均有可能带来啤酒品质上的恶化，每个啤酒厂在长期的生产过程中，由于所处的地理位置、气候环境以及微生物管理的不同，已经形成了自己的“小型生态系统”，并在某种程度上形成了“生态平衡”。受到有害菌污染的啤酒大部分会腐败变质，其主要污染菌有乳酸菌、醋酸菌、肠道细菌、厌氧发酵单胞菌和一些野生酵母等，啤酒受到微生物污染后会产生多种代谢物，其代谢产物和细胞内容物留在啤酒中，使得啤酒出现异杂味。啤酒厂微生物控制对啤酒的质量关系重大。微生物控制不好，不仅影响酵母活性，降糖能力下降，酵母凝聚性变差，pH值变化，使双乙酰还原速度减慢，而且能产生许多副产物，引起啤酒口味变化，即使一些污染菌没有进入成品酒中，但其代谢产物仍会留在啤酒中并产生有害影响，因此微生物控制应贯穿生产全过程。对于啤酒厂微生物的控制应建立在对微生物污染种类及分布情况充分把握的基础上的，在确定污染菌的种类的前提下，了解其生活特征，分析可能带来的危害，有利于对啤酒微生物污染源头进行追溯，并采取有效防治措施。不仅如此，由于中国国内不同区域的气候环境与其他国家地区具有差异，中国啤酒生产企业在啤酒生产过程中污染微生物的种群分布也是与其他国家地区有差异的，因此，建立符合中国国内啤酒生产过程污染特征的污染微生物数据库是极具有指导意义的，一方面，可使国内啤酒生产企业的工艺及质量管理人员全面了解本企业主要微生物的种类及其在各工序的分布情况，提高微生物管理的针对性和自信心；另一方...
【技术保护点】
鉴定或辅助鉴定啤酒污染菌的方法，包括如下步骤：(1)分离纯化样品中的微生物，得到菌株；(2)检测所述菌株的形态特征和生理生化特征；(3)提取所述菌株的基因组DNA，获取保守DNA序列；(4)将所述菌株的形态特征、生理生化特征以及所述保守DNA序列与权利要求4‑9中任一所述系统中所述数据库记载的微生物信息进行比对，确定所述菌株是否为啤酒污染菌，如果所述菌株是污染菌，确定所述菌株的种名；所述样品取自啤酒生产过程的任意环节。
【技术特征摘要】
1.鉴定或辅助鉴定啤酒污染菌的方法，包括如下步骤：(1)分离纯化样品中的微生物，得到菌株；(2)检测所述菌株的形态特征和生理生化特征；(3)提取所述菌株的基因组DNA，获取保守DNA序列；(4)将所述菌株的形态特征、生理生化特征以及所述保守DNA序列与权利要求4-9中任一所述系统中所述数据库记载的微生物信息进行比对，确定所述菌株是否为啤酒污染菌，如果所述菌株是污染菌，确定所述菌株的种名；所述样品取自啤酒生产过程的任意环节。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(4)还包括将步骤(3)中得到的所述菌株的基因组DNA与权利要求4-9中任一所述系统中所述的啤酒生产过程中污染微生物的DNA样品进行杂交。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述步骤(4)还包括根据比对结果确定所述菌株的出现概率。4.一种鉴定或辅助鉴定啤酒微生物的系统，包括啤酒生产过程中污染微生物的DNA样品和记载所述污染微生物信息的数据库；所述污染微生物信息包括1)-4)中至少一种：1)所述污染微生物的保守DNA序列；2)所述污染微生物的形态学特征；3)所述污染微生物的生理生化特征；4)所述污染微生物的分别特点。5.根据权利要求4所述的系统，其特征在于：所述数据库中所述污染微生物包括71株好氧细菌、15株厌氧细菌和3株真菌。6.根据权利要求5所述的系统，其特征在于：所述71株好氧细菌包括：肺炎克雷伯氏菌臭鼻亚种(Klebsiella pneumoniae subsp.ozaenae)、Serratia marcescens subsp.Sakuensis、Aquitalea magnusonii、Chryseobacterium arthrosphaerae、Enterobacter xiangfangensis、Macrococcus equipercicus、Ralstonia insidiosa、阿氏肠杆菌(Enterobacter asburiae)、鲍氏不动杆菌(Acinetobacter baumannii)、Acinetobacter nosocomialis、产吲哚金黄杆菌(Chryseobacterium indologenes)、Xanthomonas sacchari、赫氏埃希氏菌(Escherichia hermannii)、解淀粉芽孢杆菌解淀粉亚种(Bacillus amyloliquefaciens subsp.Amyloliquefaciens)、解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefaciens subsp.plantarum)、巨胞氮单胞菌(Azomonas macrocytogenes)、抗辐射不动杆菌(Acinetobacter radioresistens)、Bacillus subtilis subsp.inaquosorum、蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)、Klebsiella quasipneumoniae subsp.quasipneumoniae、路德维希肠杆菌(Enterobacter ludwigii)、木糖葡萄球菌(Staphylococcus xylosus)、皮特不动杆菌(Acinetobacter pittii)、栖木槿假单胞菌(Pseudomonas hibiscicola)、乳微球菌(Micrococcus lactis)、沙福芽孢杆菌(Bacillus safensis)、嗜碱微小杆菌(Exiguobacterium alkaliphilum)、嗜气芽孢杆菌(Bacillus aerophilus)、Burkholderia arboris、炭疽杆菌(Bacillus anthracis)、Bacillus tequilensis、土壤短芽孢杆菌(Brevibacillus agri)、Exiguobacterium indicum、Deinococcus ficus、Bacillus siamensis、辛氏不动杆菌(Acinetobacter schindleri)、杨氏柠檬酸杆菌(Citrobacter youngae)、Deinococcus radioduran、Bacillus infantis、越南伯克霍尔德氏菌(Burkholderia
\tvietnamiensis)、Bacillus aryabhattai、Enterobacter mori、Cronobacter dublinensis subsp.Lausannensis、Pantoea calida、粪短波单胞菌(Brevundimonas faecalis)、腐生葡萄球菌(Staphylococcus saprophyticus subsp.Saprophyticus)、华癸库特氏菌(Kurthia huakuii)、吉氏库特氏菌(Kurthia gibsonii)、食甲醇芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)、Pseudomonas graminis、简单芽孢杆菌(Bacillus simplex)、Lysinibacillus xylanilyticus、Chryseobacterium hispalense、Kocuria marina、Pseudomonas kunmingensis、Paenibacillus humicus、美棒杆菌(Corynebacterium callunae)、奈氏西地西菌(Cedecea neteri)、耐寒短杆菌(Brevibacterium frigoritolerans)、柠檬色短小杆菌(Curtobacterium citreum)、Bacillus panaciterrae、Chryseobacterium hominis、少动鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas paucimobilis)、Erwinia tasmaniensis、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、伪血鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas pseudosanguinis)、烟酸芽孢杆菌(Bacillus niacini)、乙酰微小杆菌(Exiguobacterium acetylicum)、Deinococcus caeni、Deinococcus grandis、植物短小杆菌(Curtobacterium plantarum)；所述15株厌氧细菌包括：肠膜明串珠菌右旋葡聚糖亚种(Leuconostoc mesenteroides subsp.dextranicun)、短乳杆菌(Lactobacillus brevis)、格氏乳球菌(Lactococcus garvieae)、Lactobacillus paracasei subsp.tolerans、食窦魏斯氏菌(Weissella cibaria)、Pediococcus claussenii、Pediococcus lolii、乳明串珠菌(Leuconostoc holzapfelii)、Lactococcus lactis subsp.tructae、乳酸乳球菌乳脂亚种(Lactococcus lactis subsp.cremoris)、戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum subsp.plantarum)、假肠膜明串珠菌(Leuconostoc pseudomesenteroides)、拜氏梭菌(Clostridium beijerinckii)、解鸟氨酸拉乌尔菌(Raoultella ornithinolytica)；所述3株真菌包括：Aureobasidium、胶红酵母(Rhodotorula mucilaginosa)、Cryptococcus rajasthanensis。7.根据权利要求5或6所述的系统，其特征在于：所述好氧细菌和所述厌氧细菌的保守DNA序列为16s rDNA序列；所述真菌的保守DNA序列为ITS序列。8.根据权利要求4-7任一所述的系统，其特征在于：所述数据库中所记载的所述污染微生物信息如A1-A71、B1-B15和C1-C3所示；A1-A71为所述71种好氧细菌的信息；B1-B15为所述15种厌氧细菌的信息；C1-C3为所述3种真菌的信息；A1为肺炎克雷伯氏菌臭鼻亚种(Klebsiella pneumoniae subsp.ozaenae)；菌种类别：好氧细菌；培养条件：平板计数培养基，37℃培养24小时；菌落特征：乳白色，圆形，边缘整齐，表面有光泽，湿润，易挑起，易溶于水；细胞特征：短杆，大小0.5～0.8μm×1～2μm，单独、成双或短链状排列；无芽胞无鞭毛，不运动，有较厚的荚膜，多数有菌毛；生理生化特征：革兰氏阴性，KOH拉丝阳性，产生2，3-丁二醇作为葡萄糖发酵的主要末端产物，VP试验阳性；与混合酸发酵形成少的乳酸、乙酸和甲酸，形成多的乙醇；发酵肌醇，水解尿素，不产生鸟氨酸脱羧酶或H2S；DNA序列如序列表序列1所示；分布特点：夏季，华东地区，高泡期发酵液；A2为Serratia marcescens subsp.Sakuensis；菌种类别：好氧细菌；培养条件：平板计数琼脂培养基，37℃培养24小时；菌落特征：乳白色，圆形，表面光滑，有光泽，边缘整齐，易挑取，易溶于水；细胞特征：短杆，单独或成对存在，不运动；DNA序列如序列表中序列2所示；分布特点：夏季，华北地区，过滤水；A3为Aquitalea magnusonii；菌种类别：好氧细菌；培养条件：平板计数琼脂培养基，37℃培养24小时；菌落特征：黄色半透明，圆形，边缘整齐，表面光滑，有光泽，易挑取，易溶于水；细胞特征：短杆，单独或成对存在，运动；生理生化特征：革兰氏阴性，KOH拉丝试验阳性，过氧化氢酶阳性，氧化酶阳性，对氯化钠敏感，属于奈瑟氏菌科；DNA序列如序列表序列3所示；分布特点：夏季，华北地区，稀释出口脱氧水；A4为Chryseobacterium arthrosphaerae；菌种类别：好氧细菌；培养条件：平板计数琼脂培养基，37℃培养24小时；菌落特征：黄色，小菌落，圆形，边缘整齐，表面光滑，有光泽，易挑取，易溶于水；细胞特征：短杆，单独存在，不运动，无芽孢，1μm×2μm；生理生化特征：革兰氏阴性，KOH拉丝实验阳性，氧化酶阳性，过氧化氢酶阳性，不能在4℃和45℃下生长，发酵葡萄糖，麦芽糖，甘露糖少量产酸，发酵乳糖，蔗糖，山梨醇等不产酸；DNA序列如序列表序列4所示；分布特点：夏季，东南地区，未杀菌清酒；A5为Enterobacter xiangfangensis；菌种类别：好氧细菌：培养条件：平板计数琼脂培养基，37℃培养24小时：菌落特征：黄色(后面橙红色)，扁平片状，中间带白色，边缘不齐，表面光滑，湿润，易挑起，易溶于水；细胞特征：短杆，不运动；生理生化特征：肠杆菌属xiangfangensis是一株发现于黑龙江省，在酸面包中分离的革兰氏阴性菌；DNA序列如序列表序列5所示；分布特点：夏季，华北地区，清酒液；A6为Macrococcus equipercicus；菌种类别：好氧细菌；培养条件：平板计数琼脂培养基，37℃培养24小时；菌落特征：橘黄色，圆形，边缘整齐，表面光滑，有光泽，易挑取，易溶于水；细胞特征：细胞球状，直径1.0～2.0μm，单独或成对存在，偶见四联，不运动；生理生化特征：革兰氏阳性到革兰氏可变；以极少鞭毛运动；不生芽孢；好氧；呼吸代谢的化能异养菌；接触酶阳性；最适30～37℃；中等嗜盐，培养基需加0.5％～20％NaCl；发现于海和含盐的土壤中；DNA序列如序列表序列6所示；分布特点：夏季，华北地区，包装车间环境空气；A7为Ralstonia insidiosa；菌种类别：好氧细菌；培养条件：平板计数琼脂培养基，37℃培养24小时；菌落特征：半透明白色，圆形，小菌落，边缘整齐，表面光滑，易挑取，易溶于水；细胞特征：中杆，单独或成对存在，运动；DNA序列如序列表序列7所示；分布特点：夏季，华北地区，脱氧水；A8为阿氏肠杆菌(Enterobacter asburiae)；菌种类别：好氧细菌；培养条件：平板计数琼脂培养基，37℃培养24小时；菌落特征：白色，圆形，边缘整齐，表面光滑，水润，有光泽，易挑取，易溶于水；细胞特征：短杆，单独存在，运动，无芽孢；DNA序列如序列表序列8所示；分布特点：夏季，华北地区，灌酒机管路清酒；A9为鲍氏不动杆菌(Acinetobacter baumannii)；菌种类别：好氧细菌；培养条件：平板计数琼脂培养基，37℃培养24小时；菌落特征：圆形，乳白色，菌落略大，边缘整齐，表面光滑，有光泽，水润，粘稠，易挑取，易溶于水；细胞特征：球型，单独存在，不运动；生理生化特征：革兰氏阴性，KOH阳性，过氧化氢酶阳性DNA序列如序列表序列9所示；分布特点：夏季，东南地区，过滤机空气沉降；A10为Acinetobacter nosocomialis；菌种类别：好氧细菌；培养条件：平板计数琼脂培养基，37℃培养24小时；菌落特征：乳白色，圆形，边缘整齐，表面光滑，有光泽，易挑取，易溶于水；细胞特征：球菌，单独或成对存在，不运动；生理生化特征：革兰阴性球杆菌，氧化酶阴性，动力阴性，硝酸盐试验阴性；DNA序列如序列表序列10所示；分布特点：夏季，华北地区，环境空气；A11为产吲哚金黄杆菌(Chryseobacterium indologenes)；菌种类别：好氧细菌；培养条件：平板计数琼脂培养基，37℃培养24小时；菌落特征：黄色，圆形，边缘整齐，表面光滑，有光泽，易挑取，易溶于水；细胞特征：中杆，不运动，无芽孢；生理生化特征：革兰氏阴性，直杆状，端圆，通常为0.5μm×1.0～3.0μm，不运动，无滑动或泳动，严格好氧，外环境分离物可在37℃生长；在固体培养基上生长，菌落圆形(直径1～2nm)，隆起，光滑且有光泽，全缘，接触酶、氧化酶、磷酸酶均阳性，不消化琼脂，有机化能营养，在低浓度蛋白胨培养基中由碳水化合物产酸不产气；DNA序列如序列表序列11所示；分布特点：夏季，东南地区，过滤机沉降；A12为Xanthomonas sacchari；菌种类别：好氧细菌；培养条件：平板计数琼脂培养基，37℃培养24小时；菌落特征：柠檬黄，圆形，边缘整齐，表面光滑，有光泽，易挑取，易溶于水；细胞特征：短杆，成对存在，大小0.4～1.0μm×1.2～3.0μm，单端极生鞭毛，运动；生理生化特征：革兰氏阴性菌,KOH拉丝阳性，氧化酶反应弱或阴性,过氧化氢酶阳性,专性好氧，对营养要求不高，但生长较缓慢,不能利用明胶、淀粉等大分子物质，生长需提供谷氨酸和甲硫氨酸,不进行硝酸盐呼吸；DNA序列如序列表序列12所示；分布特点：夏季，华北地区，脱氧水罐脱氧水；A13为赫氏埃希氏菌(Escherichia hermannii)；菌种类别：好氧细菌；培养条件：平板计数琼脂培养基，37℃培养24小时；菌落特征：白色半透明，圆形，边缘整齐，表面光滑，有光泽，易挑取，易溶于水；细胞特征：短杆，单独存在，不运动，无芽孢；DNA序列如序列表序列13所示；分布特点：夏季，华北地区，环境空气；A14为解淀粉芽孢杆菌解淀粉亚种(Bacillus amyloliquefaciens subsp.Amyloliquefaciens)；菌种类别：好氧细菌；培养条件：平板计数琼脂培养基，37℃培养24小时；菌落特征：白色，菌落呈片状，中央鼓泡有光泽，边缘不齐，扁平，无光泽，粘稠，易挑取，易溶于水；细胞特征：短杆，成对；DNA序列如序列表序列14所示；分布特点：夏季，华东地区，洗瓶机出口；A15为解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefaciens subsp.plantarum)；菌种类别：好氧细菌；培养条件：平板计数琼脂培养基，37℃培养24小时；菌落特征：白色，圆形，边缘整齐，表面粗糙，中央有年轮状褶皱并凸起；细胞特征：中杆，呈链状，产芽孢，不运动；生理生化特征：革兰氏阳性，KOH阴性；DNA序列如序列表序列15所示；分布特点：夏季，东南地区，过滤机沉降；A16为巨胞氮单胞菌(Azomonas macrocytogenes)；菌种类别：好氧细菌；培养条件：平板计数琼脂培养基，37℃培养24小时；菌落特征：白色偏淡黄色，圆形，边缘整齐，表面光滑，有光泽，易挑取，易溶于水；细胞特征：菌落外层有膜，膜部分细胞形态为球状至粗杆状，密集排列；内有液体，液体部分细胞形态为短杆，单独或成对或成堆存在，皆不运动，不形成芽孢和胞囊；生理生化特征：革兰氏染色通常为阴性，有时可变；好氧，但能在低氧压下生长；几乎所有菌株产生水溶性或荧光色素；化能异养菌；能利用糖、醇和有机酸和盐类生长；固氮，通常非共生固氮，不解酪素，但能利用氨盐和一些氨基酸作为氮源；接触酶阳性；DNA序列如序列表序列16所示；分布特点：夏季，华北地区，灌酒机备压二氧化碳；A17为抗辐射不动杆菌(Acinetobacter radioresistens)；菌种类别：好氧细菌；培养条件：平板计数琼脂培养基，37℃培养24小时；菌落特征：圆形，乳白色，边缘整齐，湿润，易挑取，较易溶于水；细胞特征：球状菌，成对生长，不运动(易被认为是球菌)，无芽孢；生理生化特征：革兰氏阴性，无芽胞及鞭毛，无动力，有荚膜；专性需氧，硝酸盐反应及氧化酶试验阴性；DNA序列如序列表序列17所示；分布特点：夏季，华北地区，麦芽；A18为Bacillus subtilis subsp.inaquosorum；菌种类别：好氧细菌；培养条件：平板计数琼脂培养基，37℃培养24小时；菌落特征：乳白色，圆形，菌落大，外层有膜，内有粘稠液体，边缘不齐或略微不齐，表面无光泽，易挑取，不易溶于水；细胞特征：中杆，成对或链状排列，运动，产芽孢；DNA序列如序列表序列18所示；分布特点：夏季，华北地区，环境链道环境发酵管板环境发酵罐区；A19为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)；菌种类别：好氧细菌；培养条件：平板计数琼脂培养基，37℃培养24小时；菌落特征：白色，圆形，边缘不齐，表面粗糙无光泽，易挑取，易溶于水；细胞特征：中粗杆，成对或单独或链状，运动，产芽孢；生理生化特征：革兰氏阳性，KOH阴性；DNA序列如序列表序列19所示；分布特点：夏季，东南地区，清酒罐空气、过滤机空气、清酒沉降、清酒罐沉降；A20为Klebsiella quasipneumoniae subsp.quasipneumoniae；菌种类别：好氧细菌；培养条件：平板计数琼脂培养基，37℃培养24小时；菌落特征：乳白色，圆形，边缘整齐，不易挑取，有光泽，表面湿润，粘稠水感，不易溶于水；细胞特征：短粗杆，运动，大小0.5～0.8μm×1～2μm,单独、成双或短链状排列；无芽胞，无鞭毛，有较厚的荚膜，多数有菌毛；生理生化特征：革兰氏阴性杆菌，过氧化氢酶阳性，较在肠道杆菌选择性培养基上能发酵乳糖，呈现有色菌落；DNA序列如序列表序列20所示；分布特点：夏季，华东地区，包装压盖清酒；A21为路德维希肠杆菌(Enterobacter ludwigii)；菌种类别：好氧细菌；培养条件：平板计数琼脂培养基，37℃培养24小时；菌落特征：白色，圆形，边缘整齐，表面光滑，有光泽，易挑取，易溶于水；细胞特征：短杆，单独或成对存在，运动；生理生化特征：革兰氏阴性，KOH拉丝实验阳性；DNA序列如序列表序列21所示；分布特点：夏季，华北地区，满罐发酵液；A22为木糖葡萄球菌(Staphylococcus xylosus)；菌种类别：好氧细菌；培养条件：平板计数琼脂培养基，37℃培养24小时；菌落特征：圆形，乳黄色，边缘整齐，中央凸起，表面光滑，湿润，易挑取，易溶于水，质地密实；细胞特征：球形，不运动，单个生长，0.8-1.0μm；生理生化特征：革兰氏阳性菌，KOH拉丝实验阴性，在厌氧环境能生长；过氧化氢酶阳性，氧化酶阴性，发酵产酸于葡萄糖，产酸于木糖、阿拉伯糖、果糖、甘露糖、甘露醇、半乳糖、山梨醇、水杨素、麦芽糖、乳糖、海藻糖和甘油，V-P阳性，7％氯化钠肉汤生长，45℃生长，明胶酶阳性，碱性磷酸酶阳性，精氨酸水解阳性；葡萄球菌凝固酶阴性，团块因子阴性，不可发酵松三糖、蔗糖、棉子糖、木糖醇、纤维二糖，硝酸盐还原阴性，不可在10％氛化钠肉汤生长，脲酶阴性，DNase阴性，酩肮消化阴性，卵磷脂酶阴性，吐温80水解阴性；DNA序列如序列表序列22所示；分布特点：夏季，华北地区，包装车间洗瓶机；A23为皮特不动杆菌(Acinetobacter pittii)；菌种类别：好氧细菌；培养条件：平板计数琼脂培养基，37℃培养24小时；菌落特征：乳白色，圆形，边缘整齐，表面光滑，有光泽，粘稠，易挑取，易溶于水；细胞特征：球杆状，成对，不运动；生理生化特征：革兰阴性球杆菌，氧化酶阴性，动力阴性，硝酸盐试验阴性；分布特点：夏季，东南地区，膜前清酒；A24为栖木槿假单胞菌(Pseudomonas hibiscicola)；菌种类别：好氧细菌；培养条件：平板计数琼脂培养基，37℃培养24小时；菌落特征：白色略微发黄，半透明，圆形，边缘整齐，表面光滑，有光泽，易挑取，易溶于水；细胞特征：短杆，0.5-1μm×1.5-4μm，单独或成对存在，运动；生理生化特征：革兰氏阴性，KOH拉丝实验阳性，接触酶阳性，氧化酶阳性；需氧，化能异养；明胶不能液化；硝酸盐可以还原成亚硝酸盐；甲基红、V-P阴性，不产生吲哚，不产硫化氢，不能淀粉水解；不需要生长因子；能够利用葡萄糖、乳酸盐、琥珀酸盐等碳源；DNA序列如序列表序列23所示；分布特点：夏季，东南地区，麦芽酿造车间空气沉降、洗瓶机；A25为乳微球菌(Micrococcus lactis)；菌种类别：好氧细菌；培养条件：平板计数琼脂培养基，37℃培养24小时；菌落特征：柠檬黄色，圆形，边缘整齐，表面光滑、易挑取、易溶于水；细胞特征：球菌，直径约1.0μm，不运动；生理生化特征：革兰氏阳性，不运动，专性好氧，在10℃至40℃，超过42℃则不能生长，在pH4.5-9.5范围内可生长，最适pH为7.5，耐0％至4％的氯化钠，在麦康凯琼脂不生长，过氧化氢酶阳性，氧化酶阴性，分泌脲酶，不能分解淀粉、七叶苷和吐温20、40、60或80；不能利用乳糖、蔗糖、棉籽糖、山梨糖醇、水杨苷、d-甘露糖、海藻糖、d-半乳糖、n-乙酰-d-氨基葡萄糖、甲基β-d-喃葡萄糖或支链淀粉；DNA序列如序列表序列24所示；分布特点：夏季，华东地区，灌装机周围空气；A26为沙福芽孢杆菌(Bacillus safensis)；菌种类别：好氧细菌；培养条件：平板计数琼脂培养基，37℃培养24小时；菌落特征：乳白色，不规则，边缘整齐，中央凹陷无光泽，边缘隆起有光泽，易挑取，较易溶于水；细胞特征：短杆，0.5-0.7μm×1.0-1.2μm单独或成对存在，运动；生理生化特征：革兰氏阳性，KOH拉丝阴性，过氧化氢酶阳性，氧化酶阳性，耐pH5.6的0％-10％的氯化钠，生长温度10-50℃，最适生长温度30-37℃，不能生长于4℃或50℃；DNA序列如序列表序列25所示；分布特点：夏季，华北地区，二次残酒、脱氧水罐脱氧水、环境清酒管板；A27为嗜碱微小杆菌(Exiguobacterium alkaliphilum)；菌种类别：好氧细菌；培养条件：平板计数琼脂培养基，37℃培养24小时；菌落特征：乳白色，边缘整齐，表面光滑，粘稠，易挑取，易溶于水；细胞特征：革兰氏阳性菌，兼性厌氧，幼龄培养物为短杆菌，老培养物为球状，1.1～1.2μm×1.4～3.2μm，不生孢，不抗酸，以周生鞭毛运动；生理生化特征：嗜碱，能在pH6.5～11.5生长；化能异养菌，发酵代谢；从葡萄糖、蔗糖、半乳糖和一些其他糖产酸；嗜碱，主要产物是乳酸、乙酸和甲酸；接触酶阳性，氧化酶阴性；还原硝酸盐；水解明胶、淀粉和酪素；最适生长温度37℃；DNA序列如序列表序列26所示；分布特点：夏季，华东地区，灌装机周围空气；A28为嗜气芽孢杆菌(Bacillus aerophilus)；菌种类别：好氧细菌；培养条件：平板计数琼脂培养基，37℃培养24小时；菌落特征：乳黄色，圆形，中央褶皱，菌落小，干燥，易挑取，较难溶于水；细胞特征：中杆，运动，有鞭毛；生理生化特征：革兰氏阳性菌，KOH阴性，接触酶阳性，最适生长温度为30℃；DNA序列如序列表序列27所示；分布特点：夏季，华北地区，发酵环境空气；A29为Burkholderia arboris；菌种类别：好氧细菌；培养条件：平板计数琼脂培养基，37℃培养24小时；菌落特征：黄绿色，圆形，边缘整齐，表面光滑，有光泽，易挑取，易溶于水；细胞特征：中杆，单独存在，运动，无芽孢；生理生化特征：革兰氏阴性，KOH拉丝实验阳性，氧化酶阳性，过氧化氢酶阳性，硝酸盐还原阳性；可在30℃与37℃温度下生长，少数可在42℃下生长；发酵葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖和核糖醇产酸；DNA序列如序列表序列28所示；分布特点：夏季，东南地区，膜后清酒；A30为炭疽杆菌(Bacillus anthracis)；菌种类别：好氧细菌；培养条件：平板计数琼脂培养基，37℃培养24小时；菌落特征(图30中A)：白色，圆形，边缘略微不齐，中央微凸起，表面无光泽，易挑取，易溶于水；细胞特征(图30中B)：粗杆，不运动，产芽孢，链状排列；DNA序列如序列表序列29所示；分布特点：夏季、冬季，华北地区，粗滤出口最后冲洗水、清酒罐清酒、洗瓶机、未杀菌酒脱氧水罐脱氧水、制酒空气；A31为Bacillus tequilensis；菌种类别：好氧细菌；培养条件：平板计数琼脂培养基，37℃培养24小时；菌落特征：白色，呈片状，扁平，中央白色微凸起且无光泽，边缘不齐且较光泽，而中心与边缘之间的部分有光泽，表面光滑，易挑取，易溶于水，产孢区域集中，无膨胀的芽孢囊；细胞特征：中杆，0.9μm×4.0μm，单独或成对，产芽孢，不运动；生理生化特征：革兰氏阳性，KOH拉丝阴性，过氧化氢酶阳性，氧化酶阳性，可于pH5.5-8.0、25-50℃范围内生长，发酵甘油、木糖、葡萄糖等产酸；DNA序列如序列表序列30所示；分布特点：夏季，华北地区，空瓶、酵培风；A32为土壤短芽孢杆菌(Brevibacillus agri)；菌种类别：好氧细菌；培养条件：平板计数琼脂培养基，37℃培养24小时；菌落特征：圆形，乳白色，小菌落，边缘整齐，有光泽，湿润，易溶于水，易挑取；细胞特征：短杆，运动，成对生长，芽孢中生，不膨大，孢子椭圆形；生理生化特征：kOH阴性，革兰氏阳性，V-P阴性；不水解淀粉但液化明胶；能在营养肉汤中生长；葡萄糖产酸不产气；DNA序列如序列表序列31所示；分布特点：夏季，华北地区，二包管路清酒；A33为Exiguobacterium indicum；菌种类别：好氧细菌；培养条件：平板计数琼脂培养基，37℃培养24小时；菌落特征：半透明，淡黄色，扁平，不规则，边缘不齐，表面光滑，易挑取，易溶于水；细胞特征：杆状，呈链状或节状，不运动，幼龄培养物为杆菌，老培养物为球状；生理生化特征：革兰氏阳性，KOH拉丝实验阴性，过氧化氢酶阳性，氧化酶阳性，生长在5-30℃和pH值6-10；最适温度是25℃和最适pH值为7.0；耐5.8％的生理盐水，也可在无盐的环境生长；DNA序列如序列表序列32所示；分布特点：夏季、冬季，东南地区，过滤机出口清酒、清酒罐周围环境空气、洗瓶机沉降、洗瓶水；A34为Deinococcus ficus；菌种类别：好氧细菌；培养条件：平板计数琼脂培养基，37℃培养24小时；菌落特征：圆形，微红色，表面光滑，边缘整齐，易挑取，不粘稠，易溶于水；细胞特征：中杆，单独或成对，不运动，无芽孢；生理生化特征：革兰氏阳性菌，KOH实验阴性，氧化酶阳性；耐紫外线辐照(254nm，8-10厘米10分钟)，可利用以下化合物作为唯一碳源:糊精、吐温40、吐温80、果糖、麦芽糖、麦芽三糖、山梨糖醇、水苏糖、蔗糖、醋酸、乳酸、丙酮酸甲酯,琥珀酸单甲酯、丙酸、丙酮酸、琥珀酸、丙氨酸等；DNA序列如序列表序列33所示；分布特点：夏季，华北地区，包装环境空气；A35为Bacillus siamensis；菌种类别：好氧细菌；培养条件：平板计数琼脂培养基，37℃培养24小时；菌落特征：乳白色，边缘不齐并呈发散状，圆形，中间白色比边缘明亮，易挑取，不干燥，易溶于水；细胞特征：中长杆，运动，单独、成对或成串生长，周生鞭毛，0.3-0.6μm×1.5-3.5μm，椭圆形孢子于菌体中间或末端膨胀；生理生化特征：革兰氏阳性，KOH阴性，兼性厌氧，周生鞭毛，可生长于MacConkey琼脂但不能生长于胆盐介质，过氧化氢酶阳性，氧化酶阴性，水解酪蛋白、七叶苷、明胶、DNA
\t和淀粉；DNA序列如序列表序列34所示；分布特点：夏季，华东地区，包装车间压缩CO2；A36为辛氏不动杆菌(Acinetobacter schindleri)；菌种类别：好氧细菌；培养条件：平板计数琼脂培养基，37℃培养24小时；菌落特征：白色半透明，圆形，边缘略不齐，表面光滑，易挑取，易溶于水；细胞特征：球状，单独或成对存在，不运动；生理生化特征：革兰阴性球杆菌，氧化酶阴性，动力阴性，硝酸盐试验阴性革兰阴性球杆菌，氧化酶阴性，动力阴性，硝酸盐试验阴性，发酵葡萄糖不产酸；DNA序列如序列表序列35所示；分布特点：夏季，华北地区，发酵管板；A37为杨氏柠檬酸杆菌(Citrobacter youngae)；菌种类别：好氧细菌；培养条件：平板计数琼脂培养基，37℃培养24小时；菌落特征：圆形，乳白色，菌体较小，边缘整齐，水润，有光泽，易溶于水...
【专利技术属性】
技术研发人员：郭立芸，谢鑫，梁云，王梅，林智平，贾凤超，
申请(专利权)人：北京燕京啤酒股份有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11
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