包含在口香糖上或口香糖内的细菌的检测和定量方法技术

本发明专利技术提供了提取包含在口香糖上或口香糖内的微生物并对所述微生物数目进行定量的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术提供了提取包含在口香糖上或口香糖内的微生物并对所述微生物的数目进行定量的方法。
技术介绍
首次使用口香糖的描述可以追溯到古希腊，在那里人们使用来自于乳香木黄连的树胶解渴或清新口气。直至19世纪晚期，第一块口香糖才成功上市，当时人心果树(Sapodilla)的橡胶状树汁形成了口香糖的基础。在20世纪晚期，口香糖不仅被视为生活方式的象征，而且已报道了对认知表现、心情、警觉和食欲控制的影响。此外，口香糖已更多地向口腔护理和功能性食品(“营养品”)发展，因为它提供了可容易地应用的药物递送介质，对口腔健康具有潜在益处。高达每人每年2.5kg的高消费率使它成为十亿美元的工业。一般来说，口香糖由合成的弹性体如聚乙酸乙烯酯或聚异丁烯的水不溶性混合物构成，所述混合物通常被称为胶基。对胶基材料的重要要求是它们在口腔中不溶解，并且可以被长时间咀嚼而不经历组成变化。在所有可商购的口香糖中，胶基被增补有建构剂、软化剂和调味剂，同时目前糖经常用人造甜味剂例如山梨糖醇、木糖醇或甘露糖醇代替。已描述，木糖醇和其他人造甜味剂的包含减少了牙齿上口腔生物膜的形式。口腔生物膜是全世界最广泛传播的传染病、即龋齿和牙周疾病的病因。龋齿由牙釉质的天然存在的去矿化和再矿化之间的失衡引起。当由于糖被牙齿上口腔生物膜的选定成员发酵而造成口腔生物膜的pH下降到低于5.5时，发生去矿化。大多数人造糖不被或几乎不
被口腔细菌发酵，因此不降低pH。此外，口香糖引起增加的咀嚼，其刺激唾液产生，因此提高了口腔中再矿化所需的钙和磷酸盐的浓度。已向商品化口香糖添加氟化物，以防止釉质去矿化并刺激再矿化。把咀嚼口香糖视为每日口腔卫生程序的补充是非常有吸引力的，特别是因为大多数人多年来不能维持预防疾病所需的口腔生物膜控制水平。这导致了向口香糖掺入抗微生物剂如氯己定和草药提取物，并且口香糖事实上已被证实成功地阻止口腔生物膜的重新生长。尽管已知咀嚼口香糖帮助移除齿间碎屑(Kakodkar等，Dental Research Journal 7:64–69,2011)并且已向口香糖添加去污剂如多磷酸盐以提高它们的清洁能力，但不清楚咀嚼口香糖是否实际上从口腔移除细菌。特别是，通过口香糖偏好性移除引起疾病的生物体如产酸的变形链球菌(Streptococcus mutans)或被视为牙釉质的最初定植者的物种，将使口香糖成为每日口腔卫生程序的有价值的补充。人类口腔含有可变且大量的菌群，胃肠系统和呼吸系统的许多疾病可以表现在口腔中。还存在许多特异性针对口腔的疾病。除了细菌生物体之外，口腔微生物可以包括真菌、原生动物和病毒物种，并且许多这些微生物附着到牙齿、龈沟、舌和颊粘膜。每个位点具有允许细菌建立其驻留的独特方式。每个位点具有允许所述生物体建立其驻留的独特方式。许多这些微生物可以附着到它们在口腔中时接触到的聚合物并被捕获在所述聚合物中，这些聚合物除了如上所述的口香糖之外还包括牙齿和牙周装置和组合物。因此，对于检测、鉴定和定量附着到口腔中的聚合物的微生物、例如包含在使用后的口香糖上或口香糖内的细菌的新方法的开发，存在着需求。专利技术概述已知口香糖有助于维护口腔健康；然而，不清楚口香糖是否能够实际上从口腔移除细菌和其他微生物。本专利技术提供了一种用于对在使
用(例如体内咀嚼、手指揉捏(finger chewing)或机器人或人工模拟的咀嚼)后包含在口香糖上和口香糖内的微生物进行检测和定量的方法。本文中提供的研究描述了对咀嚼后包含在口香糖上和口香糖内的微生物的数目进行定量和定性的方法。本专利技术提供了检测和定量包含在口香糖上或口香糖内的微生物的数目的方法。术语“包含在……的”是指附着或粘附于所述口香糖的微生物，包括在咀嚼过或手指揉捏过的口香糖内或被捕获在其皱褶中的微生物。在本专利技术的一种情况下，本专利技术提供了检测包含在口香糖上或口香糖内的微生物的方法，所述方法包括：a)在从所述口香糖移除所述微生物并使所述微生物沉积在悬液中的条件下对所述口香糖进行超声处理，b)在促进集落形成的条件下将至少一部分所述悬液与固体支持物相接触，其中集落在所述固体支持物上的形成表明包含在所述口香糖上或口香糖内的微生物的存在。在这种方法中，可以在超声处理之前将所述口香糖与哺乳动物的口腔进行接触，例如所述哺乳动物咀嚼所述口香糖，或者将所述微生物附着到哺乳动物口腔外部的口香糖，例如通过如实施例1中所描述的手指揉捏或通过机械或机器人咀嚼模拟器。“固体支持物”是微生物例如细菌、真菌、原生动物或病毒可以在其中生长的基质，例如包含琼脂或另一种惰性固化剂例如明胶的培养基。超声处理是指施加声能例如超声以搅动样品中的粒子的行动，例如对口香糖进行超声处理以移除附着于它的微生物例如细菌。某些超声处理器利用直接接触样品的探头。基于水浴的超声处理器具有位于水槽下方间接地搅动样品的超声波发生元件。所述超声处理必须在标准化尺寸下进行，例如对使用模具成型成特定形状的口香糖进行超声处理。所述模具可以是具有标准化尺寸的任何形状，并且可以是仅仅略微粘附或不粘附口香糖的任何材料，例如聚四氟乙烯(TEFLON)。所述检测包含在口香糖上或口香糖内的微生物的方法还可以包括对包含在咀嚼过的口香糖上或口香糖内的微生物进行定量的步骤，其中集落的数目指示了包含在所述口香糖上和口香糖内的微生物的数量。所述定量可以包括产生标准曲线以确定包含在所述口香糖上或口香糖内的微生物的数量。对口香糖进行超声处理和产生标准曲线的组合，允许使用所述口香糖表面上的微生物数目来外推包含在所述口香糖上或口香糖内的微生物的总数。在本专利技术的另一种情况下，本专利技术提供了检测哺乳动物口腔中微生物的存在的方法，所述方法包括：a)在从与哺乳动物口腔发生接触的口香糖移除所述微生物并使微生物沉积在悬液中的条件下，对所述口香糖进行超声处理，b)在促进集落形成的条件下将至少一部分所述悬液与固体支持物相接触，其中集落在所述固体支持物上的形成表明在所述哺乳动物的口腔中存在微生物。所述超声处理可以在标准化尺寸下进行，例如对使用模具成型成特定形状的口香糖进行超声处理。所述检测哺乳动物口腔中微生物的存在的方法还可以包括对包含在所述哺乳动物口腔内的微生物进行定量的步骤，其中集落的数目指示了所述哺乳动物口腔内的微生物的数量。所述定量可以包括产生标准曲线以确定所述哺乳动物口腔内的微生物的数量。在本专利技术的另一种情况下，本专利技术提供了对包含在口香糖上或口香糖内的微生物进行定量的方法，所述方法包括：a)在从所述口香糖移除所述微生物并使所述微生物沉积在悬液中的条件下对所述口香糖进行超声处理，b)在促进集落形成的条件下将至少一部分所述悬液与固体支持物相接触，以及c)对在所述固体支持物上形成的集落进行定量，其中所述集落的数目指示了包含在所述口香糖上和口香糖内的微生物的数量。所述对附着到口香糖的微生物进行定量的方法还可以包括产生标准曲线以确定附着到所述口香糖的微生物的数量的步骤。所
述超声处理可以在标准化尺寸下进行，例如对使用模具成型成特定形状的口香糖进行超声处理。任何上述方法还可以包括鉴定所述微生物的步骤。这些微生物包括细菌、病毒、真菌和原生动物。例如，通过本专利技术的方法检测和定量的细菌包括口腔的病原性或共生性细菌，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测包含在口香糖上或口香糖内的微生物的方法，所述方法包括：a)在从所述口香糖移除所述微生物并使所述微生物沉积在悬液中的条件下对所述口香糖进行超声处理，b)在促进集落形成的条件下将至少一部分所述悬液与固体支持物相接触，其中集落在所述固体支持物上的形成表明在所述口香糖上或口香糖内存在微生物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.01.10 US 61/925,9411.一种检测包含在口香糖上或口香糖内的微生物的方法，所述方法包括：a)在从所述口香糖移除所述微生物并使所述微生物沉积在悬液中的条件下对所述口香糖进行超声处理，b)在促进集落形成的条件下将至少一部分所述悬液与固体支持物相接触，其中集落在所述固体支持物上的形成表明在所述口香糖上或口香糖内存在微生物。2.权利要求1的方法，其中所述超声处理在标准化尺寸下进行。3.权利要求1或2的方法，其还包括对包含在所述口香糖上和口香糖内的所述微生物进行定量的步骤，其中集落的数目指示包含在所述口香糖上和口香糖内的微生物的总量。4.权利要求3的方法，其中所述定量包括产生标准曲线以确定包含在所述口香糖上和口香糖内的微生物的数量。5.一种检测哺乳动物口腔中微生物的存在的方法，所述方法包括：a)在从与哺乳动物口腔发生接触的口香糖移除所述微生物并使所述微生物沉积在悬液中的条件下，对所述口香糖进行超声处理，b)在促进集落形成的条件下将至少一部分所述悬液与固体支持物相接触，其中集落在所述固体支持物上的形成表明在所述哺乳动物的口腔中存在微生物。6.权利要求5的方法，其中所述超声处理在标准化尺寸下进行。7.权利要求5或6的方法，其还包括对所述哺乳动物口腔内的所
\t述微生物进行定量的步骤，其中集落的数目指示所述哺乳动物口腔内的微生物的数量。8.权利要求5至7任一项的方法，其中所述定量包括产生标准曲线以确定所述哺乳动物口腔内的微生物的数量。9.一种对包含在口香糖上和口香糖内的微生物进行定量的方法，所述方法包括：a)在从所述口香糖移除所述微生物并使所述微生物沉积在悬液中的条件下对所述口香糖进行超声处理，b)在促进集落形成的条件下将至少一部分所述悬液与固体支持物相接触，以及c)对在所述固体支持物上形成的集落进行定量，其中所述集落的数目指示包含在所述口香糖上和口香糖内的微生物的总量。10.权利要求9的方法，其中所述超声处理在标准化尺寸下进行。11.权利要求9或10的方法，其还包括产生标准曲线以确定包含在所述口香糖上和口香糖内的微生物的数量的步骤。12.权利要求1-11任一项的方法，其还包括鉴定所述微生物的步骤。13.权利要求1-12任一项的方法，其中所述微生物是细菌、病毒、真菌或原生动物。14.权利要求13的方法，其中所述细菌是变形链球菌(Streptococcus mutans)、口腔链球菌(Streptococcus oralis)、内氏放线菌(Actinomyces naeslundii)、血链球菌(Streptococcus sanguinis)、牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis)、中间卟啉单胞菌
\t(Porphyromonas intermedia)、福赛斯拟杆菌(Bacteroides forsythus)、福赛斯坦纳菌(Tanneraella forsythia)、直肠弯曲杆菌(Campylobacterrectus)、缠结优杆菌(Eubacterium nodatum)、微小消化链球菌(Peptostreptococcus micros)、中间链球菌(Streptococcus intermedius)、伴放线放线杆菌(Aggregetibacter actinomycetemcomitans)、齿垢密螺旋体(Treponema denticola)、乳杆菌(Lactobacillus)、啮蚀艾肯菌(Eikenella corrodens)、牙龈二氧化碳嗜纤维菌(Capnocytophagagingivalis)、格氏链球菌(Streptococcus gordonii)、小韦荣球菌(Veillonel...

【专利技术属性】
技术研发人员：阿马兰特·梅特拉，斯特凡·韦塞尔，亨尼·C·范德密，亨克·J·比舍，
申请(专利权)人：WM雷格利JR公司，
类型：发明
国别省市：美国;US