鱼肉中阿维菌素和伊维菌素残留检测的前处理方法技术

本发明专利技术属于淡水养殖鱼类寄生虫性疾病防治的渔药快速筛选检测的前处理方法技术领域，特别是涉及鱼肉中阿维菌素和伊维菌素残留酶联免疫快速筛选检测的前处理方法，该前处理方法基于分散固相萃取去除杂质原理，以NaCl—H2O—AL‑N—乙腈饱和正己烷d‑SPE净化体系与鱼肉的乙腈提取液混匀，同时净化除脂，取乙腈溶液层用于后续酶免测定，与现有技术相比，该方法采用更适宜高容量、低成本、净化一步完成的d‑SPE净化技术，实现对水产品中残留AVM和IVM的提取净化，该前处理过程简单快速、易操作、低成本、高容量特点，适合酶联免疫快速筛选检测。

【技术实现步骤摘要】
鱼肉中阿维菌素和伊维菌素残留检测的前处理方法
本专利技术属于淡水养殖鱼类寄生虫性疾病防治的渔药快速筛选检测的前处理方法
，特别是涉及一种用于淡水养殖鱼肉中阿维菌素和伊维菌素残留酶联免疫快速筛选检测的前处理方法。
技术介绍
阿维菌素(AVM)和伊维菌素(IVM)是一种广谱高效的大环内酯类抗生素杀虫剂，在淡水养殖方面应用较广。该类药物脂溶性好，在动物体内残效时间长，对鱼类具有神经和发育毒性，长期频繁使用，对养殖环境安全、水产品质量安全和人类健康安全会带来潜在风险，因此，加强阿维菌素和伊维菌素在水产养殖应用的安全风险监控是势在必行，水产品中该类药物残留检测技术特别是快速筛选检测技术研究，是实现水产品质量安全有效监管的重要技术支撑，对保障消费者身体健康具有及其重要意义。目前，应用于淡水养殖鱼类的AVM和IVM残留检测方法主要有液-质法、液相色谱-荧光法和酶联免疫法，前两种方法仪器昂贵、使用要求高，相比于前两种方法，酶联免疫法特异性好、灵敏度高、分析容量大、更加适于快速筛选检测，易于推广应用。由于样品前处理方法是仪器分析方法的重要组成部分，是否灵敏适用、简单快速直接决定分析检测结果的准确高效。因此除传统上应用较多的液液分配、固相萃取等污染重、消耗高、步骤复杂的前处理技术外，应研究运用新的前处理技术作为分析方法研究的重点，如基质固相分散萃取(MSPD)、分散固相萃取(d-SPE)、多功能杂质吸附逆向固相萃取(MAS)、分子印迹固相萃取等等。其中，分散固相萃取(d-SPE)是近年来刚刚发展起来的前处理技术，是将固相萃取吸附剂颗粒分散在样品的萃取液中，通过剧烈震荡、离心，以去除萃取液中脂类等杂质，净化一步完成，具有“快速、简易、廉价、有效、稳定、安全”特性，是一个快速、低成本、适于大量样品检测的多残留样品前处理方法。我国现有水产品中AVM和IVM多残留检测的样品前处理方法均为较为传统的固相萃取(SPE)方法，操作复杂，成本高，对实验装置要求较高，掌握难度大，因此研发灵敏、稳定、简单快速、成本低廉、易于掌握的适用于酶联免疫快速筛选检测前处理方法尤为重要。综上所述，在现有技术当中亟需要以酶联免疫吸附法为检测手段，重点研究将分散固相萃取技术应用于水产品中阿维菌素和伊维菌素残留检测的样品前处理方法。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题：针对现有技术的不足和缺陷，本专利技术提供一种鱼肉中阿维菌素和伊维菌素残留检测的前处理方法，该方法采用更适宜高容量、低成本、净化一步完成的d-SPE净化技术，实现对水产品中残留AVM和IVM的提取净化，该前处理过程具有简单快速、易操作、低成本、高容量等特点，适合酶联免疫快速筛选检测。鱼肉中阿维菌素和伊维菌素残留检测的前处理方法，其特征是：该前处理方法包括如下步骤：步骤一、称取鱼糜样品2g置于50mL离心管中；步骤二、向所述离心管中加入6mL乙腈，在漩涡混合振荡仪上以2000r/min涡旋混合振荡2min，在离心机上以4000r/min离心5min，取上清液待用；步骤三、分别称取1g氯化钠、2mL水、1.5g中性氧化铝，置于离心管中，混匀，获得混合液；步骤四、将步骤二获得的上清液加入经步骤三获得的混合液中，再加入2mL乙腈饱和正己烷，旋涡混匀后，在离心机上以大于或等于4000r/min离心5min或静置至完全分出液面层，其中，中间层为乙腈溶液层；步骤五、通过步骤一到步骤四，取400μL乙腈层溶液氮吹至干，用于酶联免疫测定；步骤六、鱼肉中阿维菌素和伊维菌素残留检测的前处理方法完毕。所述步骤一中的称取鱼糜样品2g准确至0.01g。所述步骤三中1.5g中性氧化铝，以中性氧化铝为分散固相萃取吸附剂，采用标准添加实验酶联免疫测定法，利用酶联免疫测定仪测定鱼肉中残留的阿维菌素和伊维菌素的空白值和回收率。通过上述设计方案，本专利技术可以带来如下有益效果：基于分散固相萃取去除杂质原理，以NaCl—H2O—AL-N—乙腈饱和正己烷d-SPE净化体系与乙腈的鱼肉提取液混匀，同时净化除脂，取乙腈溶液层用于后续酶免测定。1、首次将d-SPE净化技术应用于水产品中AVM和IVM残留的酶联免疫检测，该前处理过程具有简单快速、易操作、低成本、高容量特点，适合酶联免疫快速筛选检测。2、首次提出并优化NaCl—H2O—AL-N—乙腈饱和正己烷—乙腈提取液的d-SPE净化体系。3、本专利技术提供的前处理方法，简化了样品前处理过程，实现净化、去脂过程一步完成。4、采用中性氧化铝为分散固相萃取吸附剂去除杂质，实现水产品中AVM和IVM的多残留检测。5、本方法的d-SPE混合溶液中，仅乙腈溶液层用于后续试验，如何保持乙腈溶液与其他溶液彻底分开，是影响方法准确度和灵敏度的关键因素。本方法加样顺序合理，首先将上清液加入由氯化钠、水、中性氧化铝制得的混合溶液中，再加入2mL乙腈饱和正己烷，旋涡混匀后，在离心机上以大于或等于4000r/min离心5min或静置至分层完全，清晰透明，取乙腈溶液层用于后续操作，来保证d-SPE操作准确可靠。6、基于d-SPE的水产品中AVM和IVM残留的酶联免疫检测法与现有酶联免疫检测法相比，操作简单，成本低，多残留检测，灵敏度高，前处理方法不同，检测时间缩短。附图说明下面结合附图说明和具体实施方式对本专利技术作进一步说明：图1为本专利技术鱼肉中阿维菌素和伊维菌素残留检测的前处理方法的操作流程图。具体实施方式如图1所示，本方法主要原理：基于分散固相萃取去除杂质原理，以NaCl—H2O—AL-N—乙腈饱和正己烷d-SPE净化体系与乙腈的鱼肉提取液混匀，同时净化除脂，取乙腈溶液层用于后续酶免测定。鱼肉中阿维菌素和伊维菌素残留检测的前处理方法，其特征是：该前处理方法包括如下步骤：步骤一、称取鱼糜样品2g置于50mL离心管中；步骤二、向所述离心管中加入6mL乙腈，在漩涡混合振荡仪上以2000r/min涡旋混合振荡2min，在离心机上以4000r/min离心5min，取上清液待用；步骤三、分别称取1g氯化钠、2mL水、1.5g中性氧化铝，置于离心管中，混匀，获得混合液；步骤四、将步骤二获得的上清液加入经步骤三获得的混合液中，再加入2mL乙腈饱和正己烷，旋涡混匀后，在离心机上以大于或等于4000r/min离心5min或静置至完全分出液面层，其中，中间层为乙腈溶液层；步骤五、通过步骤一到步骤四，取400μL乙腈层溶液氮吹至干，用于酶联免疫测定；步骤六、鱼肉中阿维菌素和伊维菌素残留检测的前处理方法完毕。所述步骤一中的称取鱼糜样品2g准确至0.01g。所述步骤三中1.5g中性氧化铝，以中性氧化铝为分散固相萃取吸附剂，采用标准添加实验酶联免疫测定法，利用酶联免疫测定仪测定鱼肉中残留的阿维菌素和伊维菌素的空白值和回收率。下面结合现有技术对本专利技术提供的前处理方法的先进性作详细说明：一、现有国家标准和文献报道有关水产品中阿维菌素和伊维菌素残留检测方法和前处理技术对比见表1。表1现有水产品中AVM、IVM残留检测方法和前处理技术对比上表看出，无论是检测仪器采用液-质联用仪、液相色谱还是酶联免疫测定仪，水产品中阿维菌素和伊维菌素残留检测的样品前处理均采用乙腈提取，固相萃取(SPE)法净化，杂质吸附模式，收集全部流出液，且乙腈为SPE唯一操作溶剂，其中本文档来自技高网...

【技术保护点】
鱼肉中阿维菌素和伊维菌素残留检测的前处理方法，其特征是：该前处理方法包括如下步骤：步骤一、称取鱼糜样品2g置于50mL离心管中；步骤二、向所述离心管中加入6mL乙腈，在漩涡混合振荡仪上以2000r/min涡旋混合振荡2min，在离心机上以4000r/min离心5min，取上清液待用；步骤三、分别称取1g氯化钠、2mL水、1.5g中性氧化铝，置于离心管中，混匀，获得混合液；步骤四、将步骤二获得的上清液加入经步骤三获得的混合液中，再加入2mL乙腈饱和正己烷，旋涡混匀后，在离心机上以大于或等于4000r/min离心5min或静置至完全分出液面层，其中，中间层为乙腈溶液层；步骤五、通过步骤一到步骤四，取400μL乙腈层溶液氮吹至干，用于酶联免疫测定；步骤六、鱼肉中阿维菌素和伊维菌素残留检测的前处理方法完毕。

【技术特征摘要】
1.鱼肉中阿维菌素和伊维菌素残留检测的前处理方法，其特征是：该前处理方法包括如下步骤：步骤一、称取鱼糜样品2g置于50mL离心管中；步骤二、向所述离心管中加入6mL乙腈，在漩涡混合振荡仪上以2000r/min涡旋混合振荡2min，在离心机上以4000r/min离心5min，取上清液待用；步骤三、分别称取1g氯化钠、2mL水、1.5g中性氧化铝，置于离心管中，混匀，获得混合液；步骤四、将步骤二获得的上清液加入经步骤三获得的混合液中，再加入2mL乙腈饱和正己烷，旋涡混匀后，在离心机上以大于或等于4000r/min离心5min或静置至完全分出液...

【专利技术属性】
技术研发人员：王文兰，郭军，尚庆坤，鞠松柏，杜晓燕，于艳波，郑伟，刘慧吉，赵全东，熊占山，韩铭明，范立和，刘长有，闫春梅，
申请(专利权)人：吉林省水产科学研究院，
类型：发明
国别省市：吉林;22