一种减少荧光衰减的封片剂制造技术

本发明专利技术“一种减少荧光衰减的封片剂”，其特征是所述的减少荧光衰减的封片剂中包括如下组分：聚乙烯醇、甘油、重氮双环辛烷、金属离子螯合剂、碳酸盐缓冲液、Tris‑HCl缓冲液、防腐剂、水，既能用于自身能发出荧光的样本或荧光染色后的样本的封片以延缓样本荧光的衰减程度，亦可用于常规染色后的封片。本发明专利技术还提供了所述的减少荧光衰减的封片剂的制备方法及封片方法，大大减缓各种荧光衰减或淬灭的程度，较普通抗荧光淬灭封片剂的抗淬灭效果大大增强。

【技术实现步骤摘要】

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本专利技术属于生物医药应用领域，具体涉及一种减缓荧光衰减或淬灭的封片剂及其制备、封片方法。

技术介绍
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封片是将组织切片(亦可是血液涂片、细胞爬片等)封固保存于载玻片与盖玻片之间，使之不与空气发生接触，防止其氧化、褪色，利于镜检观察及保存。对于组织切片，完成染色后经过脱水透明后，为了易于在显微镜下观察，并能长时间保存备查，需要用封片剂(又称封固剂、封片介质等)把染片封固起来，从而完成一张组织玻片标本的制作。一般情况下，较好的封片剂具有如下特点：1、牢固的黏性；2、较好的折光性；3、折光率与玻片差距不大；4、能与透明剂相混合；5、中性，对染料无影响等。
目前，市面上常用的封片剂有两大类：1、非水溶性胶：主要用于染色后经无水乙醇脱水，二甲苯透明的染色片的封片。常用的有中性树胶、加拿大树胶、DPX合成树脂等。2、水溶性胶：主要用于染色后不能经无水乙醇脱水，二甲苯透明的染色片的封固。常用的水溶性胶有甘油明胶、阿拉伯糖胶以及进口的专用水溶性胶等。
在生物学应用领域，经常需要用荧光染料对组织、细胞等样本进行荧光染色，在荧光显微镜下进行观察。荧光显微镜与普通光学显微镜不同，它不是通过普通光源的照明观察样本，而是利用一定波长的光(通常是紫外光、蓝紫光)激发显微镜下标本内的荧光物质，使之发射荧光，所以荧光显微镜的光源所起的作用不是直接照明，而是作为一种激发标本的内荧光物质的能源。科研工作者之所以能观察样本，不是由于光源的照明，而是标本内荧光物质吸收激发的光能后呈现的荧光现象。
由于荧光容易褪色，样本作荧光染色后最好立即在荧光显微镜下观察，当时的荧光强度是最强的。但由于种种原因，样本染色后不能及时观察，需要用特殊介质保存，以避免荧光减退。因此开发出一种减缓荧光衰减或淬灭的封片剂就显得尤其重要。

技术实现思路
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为了解决自身能发出荧光的样本或荧光染色后的样本的荧光易衰减或淬灭的问题，本专利技术“一种减少荧光衰减的封片剂”旨在提供一种减少荧光衰退的水溶性封片剂，能够保存自身能发出荧光的样本或荧光染色后的样本，大大延缓样本荧光的衰减程度，可以用于减缓各种常见荧光染料的荧光淬灭，较普通抗荧光淬灭封片剂的抗淬灭效果大大增强，一般3周后特异性荧光的强度才会有所减弱。
一种减少荧光衰减的封片剂，其特征是所述的每100ml封片剂中包括如下组分：聚乙烯醇0.1～6g；甘油8～30ml；重氮双环辛烷1.5～5g；金属离子螯合剂0.05～1g；碳酸盐缓冲液15～40ml；Tris-HCl缓冲液15～30ml；防腐剂0.02g～1g；其余为水。
进一步地，所述的聚乙烯醇与所述的重氮双环辛烷的质量比小于1.5。
进一步地，所述的碳酸盐缓冲液与所述的Tris-HCl缓冲液的体积比大于1。
一种减少荧光衰减的封片剂，所述的聚乙烯醇其CAS号为9002-89-5，可选择不同聚合度的聚乙烯醇作为封片剂的原料，采用的聚乙烯醇可以为超高聚合度(分子量25～30万)、高聚合度(分子量17～22万)、中聚合度(分子量12～15万)和低聚合度(2.5～3.5万)以及其他聚合度聚乙烯醇的一种或多种的混合物。聚乙烯醇的物理性质受化学结构、醇解度、聚合度的影响，在聚乙烯醇分子中存在着两种化学结构，即1，3和1，2乙二醇结构，但主要的结构是1，3乙二醇结构，即“头·尾”结构。聚乙烯醇的聚合度主要分为超高聚合度(分子量25～30万)、高聚合度(分子量17～22万)、中聚合度(分子量12～15万)、低聚合度(2.5～3.5万)以及其他聚合度的聚乙烯醇。醇解度一般有78％、88％、98％三种，部分醇解的醇解度通常为87％～89％，完全醇解的醇解度为98％～100％。常取平均聚合度的千、百位数放在前面，将醇解度的百分数放在后面，如17-88即表聚合度为1700，醇解度为88％。对于超高聚合度(分子量25～30万)聚乙烯醇，每100ml封片剂中加入0.1～0.5g；对于高聚合度(分子量17～22万)聚乙烯醇，每100ml封片剂中加入0.3～1.5g；对于中聚合度(分子量12～15万)聚乙烯醇，每100ml封片剂中加入0.5～2g；对于低聚合度(2.5～3.5万)聚乙烯醇，每100ml封片剂中加入3～6g。一种减少荧光衰减的封片剂，优选平均分子量为85,000～124,000的聚乙烯醇2.5～5g，最优选平均分子量为85,000～124,000的聚乙烯醇3g。
一种减少荧光衰减的封片剂，所述的甘油是指无荧光的分析纯及以上级别的甘油。所述的甘油又称丙三醇，是甘油三酯分子的骨架成分。当人体摄入食用脂肪时，其中的甘油三酯经过体内代谢分解，形成甘油并储存在脂肪细胞中。因此，甘油三酯代谢的最终产物便是甘油和脂肪酸。甘油可用作溶剂、润滑剂、药剂和甜味剂。每100ml减少荧光衰减的封片剂优选甘油12～24ml。进一步地，每100ml减少荧光衰减的封片剂最优选甘油18ml。
一种减少荧光衰减的封片剂，所述的重氮双环辛烷是指1，4-重氮双环-[2，2，2]辛烷，每100ml优选1，4-重氮双环-[2，2，2]辛烷2～4g。进一步地，每100ml减少荧光衰减的封片剂最优选1，4-重氮双环-[2，2，2]辛烷3g。
一种减少荧光衰减的封片剂，所述的金属离子螯合剂是指可以通过螯合剂分子与金属离子的强结合作用将金属离子包合到螯合剂内部变成稳定的分子量更大化合物的物质，从而阻止金属离子起作用，可以用于解毒、印染、阻垢等方面。螯合剂一般由一个简单正离子(称为中心离子)和几个中性分子或离子(称为配位体)结合而成的复杂离子叫配离子(又称络离子)，含有配离子的化合物叫配位化合物。配合物中心离子与配位体通过配位键结合，配位键是一种特殊的共价键，通常的共价键是由两个成键·原子分别贡献出一个电子形成共同电子对的，而在配位键中是只由一个原子提供电子对，另一原手提供空轨道形成的。如果配位体中只有一个配位原子，则中心离子与配位体之间只能形成一个配位键。而有些配位体分子中含有两个以上的配位原子，当两个原子间相隔着两至三个其他非配位原子时，这个配体就可以与中心离子(或原子)同时形成两个以上的配位键，并形成一个包括两个配位五元或六元环的特殊结构，把这种配合物称为螯合物，螯合物比一般配合物更稳定。常用的金属离子螯合剂有EDTA、EDTA.2Na、EDTA.2K、EGTA等，其中EDTA是指乙二胺四乙酸；其中EDTA.2Na是指乙二胺四乙酸二钠盐；其中EDTA.2K是指乙二胺四乙酸二钾盐；其中EGTA直指乙二醇双(2-氨基乙基醚)四乙酸。一种减少荧光衰减的封片剂中所述的金属离子螯合剂主要为EDTA、EDTA.2Na、EDTA.2K、EGTA的一种或多种的混合物，每100ml减少荧光衰减的封片剂优选EDTA.2Na或EDTA.2K0.05～0.2g，最优选EDTA.2Na0.1g。
一种减少荧光衰减的封片剂，所述的碳酸盐缓冲液是指主要由碳酸氢盐、碳酸盐、水组成的缓冲液，其碳酸盐总浓度为0.05～0.2mol/L，其pH值在8.0～9.5。所述的碳酸氢盐可以是碳酸氢钠、碳酸氢钾的一种或二种的混合物，所述的碳酸盐可以是碳酸钠、碳酸钾的一种或二种的混合物，所述的水为蒸馏水或去离子水中的一种。由于碳酸本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种减少荧光衰减的封片剂，其特征在于，所述的每100ml减少荧光衰减的封片剂中包括如下组分：聚乙烯醇0.1～6g；甘油8～30ml；重氮双环辛烷1.5～5g；金属离子螯合剂0.05～1g；碳酸盐缓冲液15～40ml；Tris‑HCl缓冲液15～30ml；防腐剂0.02g～1g；其余为水。

【技术特征摘要】
1.一种减少荧光衰减的封片剂，其特征在于，所述的每100ml减少荧光衰减的封片剂中包括如下组分：聚
乙烯醇0.1～6g；甘油8～30ml；重氮双环辛烷1.5～5g；金属离子螯合剂0.05～1g；碳酸盐缓冲液15～
40ml；Tris-HCl缓冲液15～30ml；防腐剂0.02g～1g；其余为水。
2.根据权利要求1所述的一种减少荧光衰减的封片剂，其特征在于，所述的聚乙烯醇与所述的重氮双环辛
烷的质量比小于1.5，所述的碳酸盐缓冲液与所述的Tris-HCl缓冲液的体积比大于1，所述的水为蒸馏水
或去离子水中的一种。
3.根据权利要求1-2所述的一种减少荧光衰减的封片剂，其特征在于，所述的聚乙烯醇可为超高聚合度(分
子量25～30万)、高聚合度(分子量17～22万)、中聚合度(分子量12～15万)、低聚合度(2.5～3.5万)
以及其他聚合度的聚乙烯醇的一种或多种的混合物，每100ml减少荧光衰减的封片剂优选平均分子量为
85,000～124,000的聚乙烯醇2.5～5g；所述的重氮双环辛烷是指1，4-重氮双环-[2，2，2]辛烷，每100ml
减少荧光衰减的封片剂优选1，4-重氮双环-[2，2，2]辛烷2～4g。
4.根据权利要求1所述的一种减少荧光衰减的封片剂，其特征在于，所述的甘油是指无荧光的分析纯及以
上级别的甘油，每100ml减少荧光衰减的封片剂优选甘油12～24ml；所述的金属离子螯合剂是指可以通过
螯合剂分子与金属离子的强结合作用将金属离子包合到螯合剂内部变成稳定的分子量更大化合物的物质，
可为EDTA、EDTA.2Na、EDTA.2K、EGTA的一种或多种的混合物，每100ml减少荧光衰减的封片剂优选EDTA.2Na
或EDTA.2K0.05～0.2g。
5.根据权利要求1-2所述的一种减少荧光衰减的封片剂，其特征在于，所述的碳酸盐缓冲液是指主要由碳
酸氢盐、碳酸盐、水组成的缓冲液，其碳酸盐总浓度为0.05～0.2mol/L，其pH值在8.0～9.5，所述的碳
酸氢盐可以是碳酸氢钠、碳酸氢钾的一种或二种的混合物，所述的碳酸盐可以是碳酸钠、碳酸钾的一种或
二种的混合物，所述的水为蒸馏水或去离子水中的一种，采用盐酸调节至所需pH值；所述的Tris-HCl缓
冲液是指由Tris、HCl、水组成的缓冲液，其Tris浓度为0.1～0.5mol/L，其pH值在7.5～9.5，所述的
Tris又称三羟甲基氨基甲烷，优选分析纯(AR)级别以上的Tris，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘涛，王红，郭喜，孙继红，陈恺，王国强，
申请(专利权)人：北京雷根生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11