一种古代羊毛的特异性免疫检测方法技术

本发明专利技术涉及文物检测技术领域，公开了一种古代羊毛的特异性免疫检测方法，采用以下步骤：a.荧光标记特异性羊毛抗体的制备；b.试纸的组装；c.试纸的灵敏性检测；d.古代羊毛的特异性免疫检测。利用本发明专利技术方法制备的检测试纸对古代羊毛微痕迹进行检测时，具有快速、准确、高灵敏性的特点。

【技术实现步骤摘要】
201610102038

【技术保护点】
一种古代羊毛的特异性免疫检测方法，其特征在于采用以下步骤：a.荧光标记特异性羊毛抗体的制备：采用1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺介导法偶联铕标记聚苯乙烯纳米球和特异性羊毛抗体，制得荧光标记特异性羊毛抗体；b.试纸的组装：将上述制备的荧光标记特异性羊毛抗体喷涂在玻璃纤维素膜上，然后置于36‑38℃下干燥；将羊毛角蛋白抗原和山羊抗兔抗体分别划在硝酸纤维素膜的检测线和质控线上，并置于36‑38℃下干燥；分别将样品垫、荧光标记结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫组装在PVC底板上，将组装好的板条切成条状，制得检测试纸，备用；c.试纸的灵敏性检测：配制梯度浓度的羊毛角蛋白抗原溶液，分别取等量滴加到样品...

【技术特征摘要】
1.一种古代羊毛的特异性免疫检测方法，其特征在于采用以下步骤：
a.荧光标记特异性羊毛抗体的制备：采用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺介导法偶联铕标记聚苯乙烯纳米球和特异性羊毛抗体，制得荧光标记特异性羊毛抗体；
b.试纸的组装：将上述制备的荧光标记特异性羊毛抗体喷涂在玻璃纤维素膜上，然后置于36-38℃下干燥；将羊毛角蛋白抗原和山羊抗兔抗体分别划在硝酸纤维素膜的检测线和质控线上，并置于36-38℃下干燥；分别将样品垫、荧光标记结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫组装在PVC底板上，将组装好的板条切成条状，制得检测试纸，备用；
c.试纸的灵敏性检测：配制梯度浓度的羊毛角蛋白抗原溶液，分别取等量滴加到样品垫上，进行荧光检测，得到试纸的检测线荧光强度和羊毛角蛋白抗原溶液浓度之间的标准曲线和回归方程；分别测定15-25组空白样品的荧光强度，其平均值作为阳性样品荧光强度的最高阈值；根据回归方程计算该阈值对应的最低羊毛角蛋白抗原检测浓度，即检测下限，作为试纸灵敏性的标准；
d.古代羊毛的特异性免疫检测：取古代羊毛微痕迹样品，研磨均匀，溶于pH7.4的PBS缓冲液中使古代羊毛微痕迹样品浓度为1mg/mL，搅拌均匀，0.5-1.5h后取一滴上清液滴在检测试纸的样品垫上；20-30min后，进行荧光检测，得到检测线荧光强度与步骤c中的阳性样品荧光强度的最高阈值进行比较，如果荧光强度低于阈值，说明样品中含有羊毛角蛋白，该微痕迹样品为羊毛微痕迹；如果荧光强度高于阈值，说明样品中不含羊毛角蛋白，该微痕迹样品不是羊毛微痕迹。
2.如权利要求1所述的一种古代羊毛的特异性免疫检测方法，其特征在于，所述荧光标记特异性羊毛抗体的制备方法具体为：分别将铕标记聚苯乙烯纳米球、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和特异性羊毛抗体加入到20mmol/L的PBS缓冲液中；在室温条件下搅拌反应1.5-2.5h后，将得到的产物用10mmol/L的PBS缓冲液洗涤...

【专利技术属性】
技术研发人员：王秉，游秋实，刘意，刘杨，
申请(专利权)人：浙江理工大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33