本文涉及UPLC-MS/MS法测定人血浆中他菲替尼和活性代谢产物SCR868的浓度。本文提供通过超高效液相色谱串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定人血浆中他菲替尼和活性代谢产物SCR868的浓度的方法，其中所述方法采用含甲酸的甲酸铵水-乙腈作为流动相进行。本发明专利技术的方法的特异性好、灵敏度高，他菲替尼和SCR868在血浆0.2～50ng/mL范围内线性关系良好，已经成功应用于临床药代动力学样本的检测。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及检测人血浆中药物的浓度的方法。具体而言，本专利技术涉及通过超高效 液相色谱串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定人血浆中他菲替尼和活性代谢产物SCR868的浓度 的方法。
技术介绍
引言 酪氨酸激酶受体(TKRs)在肿瘤的发生、发展和转移中起着重要的作用，这使其成 为肿瘤治疗的关键靶点。随着第一个表皮生长因子受体抑制剂--易瑞沙在EGFR突变 的非小细胞肺癌患者的治疗中取得了令人瞩目的成绩，几年来涌现了更多的酪氨酸受 体抑制剂(Tyrosine Kinase Inhibitors，TKIs)。然而越来越多的TKIs药物仍然不能从根 本性改善目前肿瘤的生存期和死亡率，以及TKIs耐药的问题，因此临床需要更多药物来改 变这一现状。 他菲替尼（tafetinib)是一个新型、口服TKI类药物，其化学结构在舒尼替尼的构 效的基础上添加了不饱和六元环以增加药物的脂溶性。经临床前实验发现他菲替尼对于 Kit、VEGR、PDGFR、RET、FLT等多个靶点具有较好的抑制作用，并且与同等剂量的舒尼替尼的 毒性相当_。良好的耐受性和抗肿瘤活性使他菲替尼成为一个有前景的抗肿瘤新药， 现已获得了临床试验批准，在实体瘤患者进行I期临床试验。 检测血液或其他生物样本中的药物浓度是药动学、药效学研究和临床治疗的基 础。用于检测血浆药物浓度的方法应当具备高灵敏度、能够快速获得结果和能够使用少量 样品进行。然而，由于血液中存在包括磷脂、蛋白等多种组份，检测易受基质效应等各种因 素的影响。如何最大可能减少基质效应，尽可能获得血液中药物的准确浓度，是本领域必须 进行深入研究的课题。 HPLC法是目前检测血药浓度常用的方法，应用范围广泛。但是，由于使用色谱柱进 行分离耗费时间较长、灵敏度较低，并不适用于高通量的生物样品分析。超高效液相色谱质谱联用（Ultra Performance Liquid Chromatography，UPLC_ MS/MS)法提高了分析通量，节省了样品和溶剂分析时间。然而，UPLC-MS/MS对流动相，色谱 柱，样品前处理，质谱接口，数据采集系统都提出了特别的要求。尽管对转换方法进行了一 些研究，传统的高效液相色谱HPLC的条件不能直接应用于UPLC-MS/MS，需要对包括样品前 处理、内标、流动相、色谱柱选择、质谱条件设置等各项条件进行大量试验，才能实现UPLC-MS/MS快速检测分析。例如，周新等人的研究(HPLC与UPLC色谱条件转换方法研究，分析试验 室，第27卷第4期，2008年4月）表明直接将HPLC条件应用于UPLC，不能达到对待测物质分离 分析的目的；而且质谱检测与色谱检测不同，对于流动相组成、流速等多种方面需要额外的 注意，因此对实验条件包括例如流动相选择等进行具体深入研究才能获得分离状况良好的 UPLC-MS/MS 方法。 目前尚未见有用于测定人血浆中他菲替尼和活性代谢产物SCR868的浓度的方法 的报道。已经报道的检测狗血浆中他菲替尼和SCR868的血药浓度的方法采用液液萃取且灵 敏度较低，不适用于临床药代动力学研究的大批量的样本检测。 本领域急需能够用于检测人血浆中他菲替尼和SCR868的浓度的快速、灵敏的方 法。
技术实现思路
专利技术人已经建立了快速、灵敏的超高效液相色谱串联质谱（ultra high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry，UPLC_MS/MS)技术检 测人血浆中他菲替尼和活性代谢产物SCR868(N-去乙基他菲替尼）的浓度。本专利技术的方法具 有的优点包括例如样本处理简单、快捷、灵敏度高等。在一些实施方案中，本专利技术提供通过超高效液相色谱串联质谱法（UPLC-MS/MS) 测定人血浆中他菲替尼和活性代谢产物SCR868的浓度的方法，其中所述方法采用含甲酸的 甲酸铵水-乙腈作为流动相进行。专利技术人已经发现尽管使用甲醇作为流动相可获得更好的 响应，但是基线噪音也相应增高，而且目标化合物的信号较高，存在较为严重的残留。而采 用含甲酸的甲酸铵水-乙腈作为流动相进行分析时，洗脱能够快速、充分分离待测物质，获 得良好的峰形。在一些实施方案中，本专利技术的方法采用的含甲酸的甲酸铵水-乙腈流动相的体积 比选自以下范围：含甲酸的甲酸铵水：乙腈(80/20, v/v)-含甲酸的甲酸铵水：乙腈(20/80， v/v )，含甲酸的甲酸铵水：乙腈(70/30，v/v)-含甲酸的甲酸铵水：乙腈(30/70，v/v )，含甲酸 的甲酸铵水：乙腈(60/40，v/v)-含甲酸的甲酸铵水：乙腈(40/60，v/v)。在一些实施方案中， 本专利技术的方法采用含甲酸的甲酸铵水:乙腈(55/45，v/v)作为流动相进行。在一些实施方案中，本专利技术的方法中采用的流动相为0.1%甲酸1〇禮甲酸铵水-乙 腈。在一些实施方案中，所述流动相采用上述体积比进行。在一些实施方案中，本专利技术的方 法中采用流动相〇.1%甲酸1〇11^甲酸铵水-乙腈(55/45^八)进行。为了改善色谱分离选择 性，可以考虑调节流动相的极性，向流动相中加入改性剂等。已经观察到采用所述流动相进 行洗脱能够充分分离待测物质，获得良好的峰形和较快的分析时间。 在一些实施方案中，本专利技术的方法采用Z0RBAX SB-C18column(3.5ym，150mmX 2.1mm)作为分析柱进行。在色谱法中，色谱柱的选择十分重要，对色谱柱的要求是柱效高、 选择性好，分析速度快等。在本专利技术中，专利技术人发现Z0RBAX SB-C18column(3.5ym，150mmX 2. 1mm)能够实现他菲替尼和活性代谢产物SCR868良好分离和峰型，而其它色谱柱如 Acquity UPLC BEH C18(50_X2.1mm，1.7ym)对于目标化合物的保留较差，而且峰形的对 称性欠佳。还发现色谱柱Acquity BEH Shield RP 18(10〇111111\2.1臟，1.7以111)在等度洗脱时 仍难以获得对称的峰形，使用梯度洗脱，峰形可以得到改善，但是洗脱时间较长，而且存在 较为严重的拖尾。因此，已经观察到采用Z0RBAX SB-C18column(3.5ym，150mmX2.1mm)作为 分析柱能够充分分离待测物质，获得良好的峰形和较快的分析时间。在一些实施方案中，本专利技术的方法可以采用盐酸哌唑嗪为内标进行。在采用内标 法时，内标物的选择是一项十分重要的工作。理想的内标物应当能以准确、已知的量加到样 品中去，和被分析的样品有基本相同或尽可能一致的物理化学性质（如化学结构、极性、挥 发度及在溶剂中的溶解度等）、色谱行为和响应特征;在色谱分析条件下，内标物必须能与 样品中各组分充分分离。在一些实施方案中，专利技术人已经显示盐酸哌唑嗪能够提供线性关 系良好、精密度、基质效应、提取回收率以及稳定性符合要求的检测方法。 在一些实施方案中，本专利技术的方法采用蛋白沉淀法进行前处理。专利技术人已经发现 通过液液萃取进行样品前处理时，操作繁琐耗时，提取回收率低，并且检测的灵敏度也较 低，不能满足临床药代动力学中大样本检测人血浆中他菲替尼和活性代谢产物SCR868的浓 度的要求。本专利技术的研究结果显示在本专利技术本文档来自技高网...
【技术保护点】
通过超高效液相色谱串联质谱法(UPLC‑MS/MS)测定人血浆中他菲替尼和活性代谢产物SCR868的浓度的方法，其中所述方法采用含甲酸的甲酸铵水‑乙腈作为流动相进行。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：石远凯，韩晓红，张妍，
申请(专利权)人：中国医学科学院肿瘤医院，
类型：发明
国别省市：北京;11
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