本发明专利技术公开了用于鉴定普通狗牙根和弯穗狗牙根的SRAP分子标记引物，选自下述引物组合之一：E1M4、E1M5、E1M6、E1M7、E1M8、E2M3、E2M4、E2M5、E2M6、E2M7、E3M1、E3M3、E3M4、E3M6、E3M9、E4M1、E4M3、E4M4、E4M5、E4M6、E5M9、E6M1、E6M2、E6M3、E6M4、E6M7、E6M8、E6M9、E7M2、E7M3、E7M4、E7M5、E7M7、E10M9，各引物如序列所示。本发明专利技术所公开的SRAP分子标记引物用于狗牙根鉴定，所得到的条带清晰、多态性好、重复性高，且操作简单，应用前景广阔。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分子生物学DNA标记检测
，具体涉及一种用于鉴定普通狗牙 根和弯穗狗牙根的SRAP分子标记引物及其方法和应用。
技术介绍
狗牙根(CynodonRichard)又名百慕大草、铺地草、咸沙草、铁线草及泮根草，属禾 本科(Poaceae/Gramineae)画眉草亚科(〇11〇1^(1〇丨(16&6)虎尾草族(〇711〇(1〇1^6&6)狗牙根属 (CynodonRichard)C4型多年生草本植物。它是世界暖季型草坪草中得到评用价值最好，在 应用上也是最使用广泛的草坪草之一，当然也是家畜的优质饲料。狗牙根属植物现当前全 球共有9种和10变种，而在我国有2种和1变种，分别是普通狗牙根(Cynodondactylon)、弯 糖狗牙根（Cynodonarcuatus)，变种是双花狗牙根（Cynodondactylonvar.biflorus Merino)。在我国主要分布于黄河流域以南，近些年来北京等地区也有种植。狗牙根是比较 优秀草坪草，具有成坪快、耐修剪、耐践踏、恢复力强、有很好色泽和密度等诸多优点，可以 用于高尔球场等运动草坪、城市绿植、公路护坡、公园观赏等地方，具有很大的实用、经济、 生态价值。 随着科学技术的蓬勃发展，生物技术也发生了翻天覆地的变化，这种变化为人们 研究狗牙根遗传多样性、分子育种、种质资源鉴定等带来了便捷，促使人们对于研究狗牙根 遗传基因的多态性到了一个新的领域。分子标记技术的应用和推广为人们研究狗牙根遗传 多样性提供了方法和科学依据，通过分子标记特异性基因可以直接筛选出不同品种狗牙根 的优良性状，从而提高了狗牙根品种鉴别的真实性。可以预测，DNA分子标记技术可以为狗 牙根种质资源鉴定和选育优良品种做出杰出贡献。凌瑶等通过采用SRAP分子标记技术，对 来自于我国的44份狗牙根和8份非洲狗牙根材料进行遗传多样性分析，表明选用的材料之 间具有较大的遗传差异。但是目前对于分布在我国的普通狗牙根和弯穗狗牙根尚无这方面 的研究报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于解决现有技术中在狗牙根种质资源鉴定和选育优良品种的不 足，提供一种用于鉴定普通狗牙根和弯穗狗牙根的SRAP分子标记引物及其方法和应用。 本专利技术的第一个方面是提供一种SRAP分子标记引物，选自下述引物组合之一： E1M4、E1M5、E1M6、E1M7、E1M8、E2M3、E2M4、E2M5、E2M6、E2M7、E3M1、E3M3、E3M4、E3M6、E3M9、 E4M1、E4M3、E4M4、E4M5、E4M6、E5M9、E6M1、E6M2、E6M3、E6M4、E6M7、E6M8、E6M9、E7M2、E7M3、 E7M4、E7M5、E7M7、E10M9，其中， E1为反向引物，序列如SEQIDN0:1所示;E2为反向引物，序列如SEQIDN0:2所示;E3 为反向引物，序列如SEQIDN0:3所示;E4为反向引物，序列如SEQIDN0:4所示;E5为反向引物， 序列如SEQIDN0:5所示；E6为反向引物，序列如SEQIDN0:6所示；E7为反向引物，序列如 SEQIDNO: 7所示;E10为反向引物，序列如SEQIDNO: 10所示;Ml为正向引物，序列如SEQIDNO: 11所示;M2为正向引物，序列如SEQIDN0:12所示;M3为正向引物，序列如SEQIDN0:13所示;M4 为正向引物，序列如SEQIDNO: 14所示;M5为正向引物，序列如SEQIDNO: 15所示;M6为正向引 物，序列如SEQIDNO: 16所示;M7为正向引物，序列如SEQIDNO: 17所示;M8为正向引物，序列如 SEQIDNO: 18所示;M9为正向引物，序列如SEQIDNO: 19所示。 优选地，所述SRAP分子标记引物选自下述引物组合之一:E2M3、E2M4、E2M5、E2M7、 E3M3、E3M6、E4M3、E4M4、E4M5、E4M6、E5M9、E6M1、E6M2、E6M4、E6M7、E6M8、E6M9、E7M3、E7M4、 E7M5、E7M7、E10M9。 本专利技术的第二个方面是提供本专利技术第一个方面所述的任意一种SRAP分子标记引 物在鉴定普通狗牙根和弯穗狗牙根中的应用。 本专利技术的第三个方面是提供一种利用SRAP分子标记引物组合鉴定普通狗牙根和 弯穗狗牙根的方法:采用本专利技术第一个方面所述的任意一种SRAP分子标记引物，对普通狗 牙根和弯穗狗牙根DNA进行扩增、检测和分析。 其中，普通狗牙根和弯穗狗牙根DNA可采用本领域常规技术手段获取。优选地，本专利技术中DNA提取步骤如下： 1)液氮保护下磨样成粉； 2)立刻加入预冷的CTAB-free缓冲液，冰浴5~15min; 3)离心，去掉上清液； 4)加入预热至50-80°C的3XCTAB提取缓冲液，50-80°C的水浴30-50min; 5)离心，取上清液，加入有机溶剂洗涤后，取水层，干燥。 优选地，每100ml的3XCTAB提取缓冲液中含有：3 %CTAB(W/V) 2~4g，NaC18~10g， EDTA2~3mm〇HPTris-HC18~12mmol，pHS7.5~8.5。 进一步优选地，每100ml的3XCTAB提取缓冲液中含有：3%CTAB(W/V)3g， NaC18·8g，EDTA2·5mmol和Tris-HC110mmol，pH为7·5~8·5。 优选地，每100ml的CTAB-free缓冲液中含有:NaCl1 ~2g，ddH2040 ~60ml，EDTA4 ~ 6mmol和Tris-HC118~22mmol，β-巯基乙醇0 · 8~1 · 2ml，PVP1 · 5~2 · 5g，pH为7 · 5~8 · 5。 进一步优选地，每100ml的CTAB-free缓冲液中含有：NaCl1.5g，ddH2050ml， EDTA5mmol和Tris-HC120mmol，β-巯基乙醇lml，PVP2g，pH为7 · 5~8 · 5。 应用本专利技术的引物组合和方法进行SRAP分子标记实验，所得到的条带清晰，多态 性好，重复性高，可以显著、清晰地显示普通狗牙根和弯穗狗牙根在基因水平上的差异，为 狗牙根遗传图谱构建、亲缘关系分析、品种鉴定等诸多研究领域奠定良好的基础。本专利技术采 用的SRAP分子标记，操作简单，正反引物可以自由组合，不仅可以节约成本，同时也大大提 高引物的使用率。本专利技术也表明SRAP分子标记可以在狗牙根种质资源鉴定、优良性状标记 等得到更广泛的应用。【附图说明】图1为部分狗牙根的DNA监测图； 图2为引物筛选图，其中，Marker(M)是lOObpDNALadder; 图 3-24 分别为引物组合E2M3、E2M4、E2M5、E2M7、E3M3、E3M6、E4M3、E4M4、E4M5、 E4M6、E5M9、E6M1、E6M2、E6M4、E6M7、E6M8、E6M9、E7M3、E7M4、E7M5、E7M7、E10M9以普通狗牙根 和弯穗狗牙根DNA为模板扩增效果图，其中，图中标号1-18为普通狗牙根，标号19-46为弯穗 狗牙根，Marker(M)是1OObpDNALadder〇【具体实施方式】下面参照附图，结合具体的实施例对本专利技术本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种SRAP分子标记引物，其特征在于，选自下述引物组合之一：E1M4、E1M5、E1M6、E1M7、E1M8、E2M3、E2M4、E2M5、E2M6、E2M7、E3M1、E3M3、E3M4、E3M6、E3M9、E4M1、E4M3、E4M4、E4M5、E4M6、E5M9、E6M1、E6M2、E6M3、E6M4、E6M7、E6M8、E6M9、E7M2、E7M3、E7M4、E7M5、E7M7、E10M9，其中，E1为反向引物，序列如SEQIDNO：1所示；E2为反向引物，序列如SEQIDNO：2所示；E3为反向引物，序列如SEQIDNO：3所示；E4为反向引物，序列如SEQIDNO：4所示；E5为反向引物，序列如SEQIDNO：5所示；E6为反向引物，序列如SEQIDNO：6所示；E7为反向引物，序列如SEQIDNO：7所示；E10为反向引物，序列如SEQIDNO：10所示；M1为正向引物，序列如SEQIDNO：11所示；M2为正向引物，序列如SEQIDNO：12所示；M3为正向引物，序列如SEQIDNO：13所示；M4为正向引物，序列如SEQIDNO：14所示；M5为正向引物，序列如SEQIDNO：15所示；M6为正向引物，序列如SEQIDNO：16所示；M7为正向引物，序列如SEQIDNO：17所示；M8为正向引物，序列如SEQIDNO：18所示；M9为正向引物，序列如SEQIDNO：19所示。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：黄春琼，刘国道，白昌军，
申请(专利权)人：中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所，
类型：发明
国别省市：海南;66
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