本发明专利技术涉及一种基于定量计数法原理的尿液有形成分候选参考测量方法，其步骤：选取仪器；收集尿液样品；对尿液样本进行三组计数，获得六份标本计数；对每组尿液样本都不进行离心处理而直接进行检测；对每组尿液样本均采用经过校准的移液器填充一次性计数板的计数池；将每组尿液样本计数板的计数池充池后都静置3分钟，显微镜采用低倍镜镜头观察计数池中有形成分的全貌及分布；再采用高倍显微镜镜头，观察鉴定细胞成分和计算数量；上皮细胞EC的变异系数CV<14％；红细胞RBC、白细胞WBC的变异系数CV<7％；根据尿液红细胞、白细胞和上皮细胞计数的扩展不确定度，合成标准不确定度。本发明专利技术保证了检验结果的准确性和可靠性，进一步促进尿液检查结果能够互通互认。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种尿液有形成分检验标准化方法，特别是关于一种用于校准和评价 常规镜检类尿液有形成分分析仪的基于定量计数法原理的尿液有形成分（红细胞RBC、白 细胞WBC和上皮细胞EC)候选参考测量方法。
技术介绍
目前，尿液有形成分是指通过尿液排出体外能在光学显微镜下观察到的有形物， 包括各种细胞、管型、结晶及各类病理成分分析，对泌尿系统疾病诊断、治疗、监测及健康 普查等均有重要应用价值，是尿液分析中必不可少的检查手段。尿液有形成分检查方法较 多，从方法学上可分为人工镜检法、尿沉渣分析仪检查法和干化学分析法。人工镜检法根据 方法性质可分为定性检查法和定量检查法。尿沉渣分析仪法基于分析原理的不同主要分为 流式细胞法、机器视觉图像识别法等。仪器法自动化程度高，适用于临床大批量样本检测。 由于仪器种类、检测方法的不同，同一项目实验室间甚至实验室内的结果存在较大差异。自 2000年以来，国际上开始推荐使用标准化的尿沉渣定量计数法。2003年国际实验血液学 协会（ISLH)推荐尿液有形成分计数参考测量程序，2009年CLSI发布再版的尿沉渣分析指 南（GP16-A3)，目的是提高尿液检验结果的质量和可靠性。2009年我国血液、体液专家委员 会也提出《尿液有形成分检验标准化的建议》，但目前为止尚未建立尿液有形成分的参考方 法，为满足尿液有形成分检验标准化的需要，如何实现尿液检查结果的互通互认成为目前 亟待解决的技术问题。
技术实现思路
针对上述问题，本专利技术的目的是提供一种基于定量计数法原理的尿液有形成分候 选参考测量方法，该方法实现了尿液有形成分检验的自动化和标准化，同时保证了检验结 果的准确性和可靠性，进一步促进尿液检查结果能够互通互认。 为实现上述目的，本专利技术采取以下技术方案：一种基于定量计数法原理的尿液有 形成分候选参考测量方法，其特征在于包括以下步骤：1)选取显微镜、一次性尿液定量计 数板和移液器；2)采用视觉原理尿有形成分分析仪配套试剂，并收集尿液样品；3)对尿液 样本进行三组计数，每组计算均需获得三份白细胞WBC和三份上皮细胞EC共六份标本计 数，要求三组之间的计数差异在95%可信区间内，若超出该可信区间则重新计数；4)对每 组尿液样本都不进行离心处理而直接进行检测，并在检测前将原始尿颠倒充分混匀至少30 次；5)对每组尿液样本均采用经过校准的移液器填充一次性尿液定量计数板的计数池，移 液器每次取样本量7ul进行充池以避免液体过多溢出；当计数池未充完全、计数区域有气 泡以及计数区域有碎片时则需重新填充新的计数池；6)将每组尿液样本计数板的计数池 充池后都静置3分钟，显微镜采用低倍镜10X 10镜头观察计数池中有形成分的全貌及分 布；再采用10X40高倍显微镜镜头，观察鉴定细胞成分和计算数量，记录结果，结果以"个 /ul "报告；7)采用低倍显微镜镜头时：对上皮细胞EC计数，每次至少计数10个/ul，最多 不超过80个/ul，计数6次，根据计数结果计算每个样本的均值和标准差，并由均值和标准 差得到变异系数，使上皮细胞EC的变异系数CV〈14% ;若计数为不合格数据，则剔除超出均 值±2SD的数据，合格数据不少于15个；采用高倍显微镜镜头时：分别对红细胞RBC、白细 胞WBC计数，每次至少计数40个/ul，最多不超过300个/ul，计数6次，根据计数结果计算 每个样本的均值和标准差，并由均值和标准差得到变异系数，使红细胞RBC、白细胞WBC的 变异系数CV〈7%;若计数为不合格数据，则剔除超出均值±2SD的数据，合格数据不少于15 个；8)取扩展因子k = 2,根据尿液红细胞RBC、白细胞WBC和上皮细胞EC计数的扩展不 确定度，合成标准不确定度为：Uc2(y) = (ul)2+(u2)2+…+ (un)2,相对扩展不确定度：U95% = 2XUc (y) 〇 较佳地，所述步骤1)中，所述一次性尿液定量计数板采用Uric-SCP尿液定量计数 板，其每个计数池充池容积为6. 4ul，计数区域容积为lul。 较佳地，所述步骤2)中，尿液样品收集过程为：（1)采用洁净带盖的塑料尿管收集 清洁中段尿液l〇ml ;相对密度〈1. 010 ;渗透压〈300m0sm/kg的稀释尿液标本和pH>7. 5碱性 的尿液标本除外；（2)将尿液标本冷藏保存，冷藏温度为2°C至4°C。 较佳地，所述步骤6)中，对每组尿液样本的计数，每个颗粒计数一次，不得重复计 数，并在一小时内完成计数；其中，计数板上每个方格左侧和上侧压线的颗粒作为有效计 数，右侧和下侧不计数。 较佳地，所述步骤7)中，优选得到上皮细胞EC的变异系数CV为12. 7 %，红细胞 1?(：、白细胞冊(：的变异系数(^分别为6.6%和6.4%。 本专利技术由于采取以上技术方案，其具有以下优点：1、本专利技术中没有采用离心方法 去除尿液样本中的上清液，避免了离心对尿液有形成分的影响，保证了检验结果的准确性 和可靠性。2、本专利技术通过优化测量过程中的每一个环节，采用定量计数板法计数尿液有形 成分WBC、RBC和EC，使本专利技术的不确定度低、精密度高、准确度好，可以有效促进尿液检查 结果能够互通互认。3、本专利技术由于采用将尿液样本在计数板内的静置时间为3分钟，因此 可以有效避免尿液样本干涸状态，确保计算的准确度。【具体实施方式】 下面结合实施例对本专利技术进行详细的描述。 本专利技术提供一种，其步骤 如下： 1)选取测量仪器：AULYMPUS CX41显微镜、一次性尿液定量计数板和Eppendorf Reference移液器。其中，其中，本专利技术中一次性尿液定量计数板优选Uric-SCP尿液定量计 数板，其每个计数池充池容积为6. 4ul，计数区域容积为lul。 2)采用视觉原理尿有形成分分析仪配套试剂，并收集尿液样品；其中，尿液样品 收集过程为： (1)采用洁净带盖的塑料尿管收集清洁中段尿液10ml ;稀释（相对密度〈1. 010 ; 渗透压〈300m0sm/kg)和碱性（pH>7. 5)的尿液标本除外，因为红、白细胞易于溶解。 (2)将尿液标本冷藏保存，冷藏温度为2~4°C，测量过程需要在lh内完成。 3)对尿液样本进行三组计数，每组计算均需获得三份白细胞WBC和三份上皮细胞 EC共六份标本计数，要求三组之间的计数差异在95 %可信区间内，若超出该可信区间则重 新计数； 4)对每组尿液样本都不进行离心处理而直接进行检测，并在检测前将原始尿颠倒 充分混匀至少30次； 5)对每组尿液样本均采用经过校准的移液器填充一次性尿液定量计数板的计数 池，移液器每次取样本量7ul进行充池以避免液体过多溢出。当计数池未充完全、计数区域 有气泡以及计数区域有碎片时则需重新填充新的计数池。 6)将每组尿液样本计数板的计数池充池后都静置3分钟，显微镜采用低倍镜 10X10镜头观察计数池中有形成分的全貌及分布；再采用10X40高倍显微镜镜头，观察鉴 定细胞成分（细胞、真菌、结晶等）和计算数量，记录结果，结果以"个Ail"报告； 其中，对每组尿液样本的计数，每个颗粒计数一次，不得重复计数，并在一小时内 完成计数；其中，计数板上每个方格左侧和上侧压线的颗粒作为有效计数，右侧和下侧不计 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种基于定量计数法原理的尿液有形成分候选参考测量方法，其特征在于包括以下步骤：1)选取显微镜、一次性尿液定量计数板和移液器；2)采用视觉原理尿有形成分分析仪配套试剂，并收集尿液样品；3)对尿液样本进行三组计数，每组计算均需获得三份白细胞WBC和三份上皮细胞EC共六份标本计数，要求三组之间的计数差异在95％可信区间内，若超出该可信区间则重新计数；4)对每组尿液样本都不进行离心处理而直接进行检测，并在检测前将原始尿颠倒充分混匀至少30次；5)对每组尿液样本均采用经过校准的移液器填充一次性尿液定量计数板的计数池，移液器每次取样本量7ul进行充池以避免液体过多溢出；当计数池未充完全、计数区域有气泡以及计数区域有碎片时则需重新填充新的计数池；6)将每组尿液样本计数板的计数池充池后都静置3分钟，显微镜采用低倍镜10×10镜头观察计数池中有形成分的全貌及分布；再采用10×40高倍显微镜镜头，观察鉴定细胞成分和计算数量，记录结果，结果以“个/ul”报告；7)采用低倍显微镜镜头时：对上皮细胞EC计数，每次至少计数10个/ul，最多不超过80个/ul,计数6次，根据计数结果计算每个样本的均值和标准差，并由均值和标准差得到变异系数，使上皮细胞EC的变异系数CV<14％；若计数为不合格数据，则剔除超出均值±2SD的数据，合格数据不少于15个；采用高倍显微镜镜头时：分别对红细胞RBC、白细胞WBC计数，每次至少计数40个/ul，最多不超过300个/ul，计数6次，根据计数结果计算每个样本的均值和标准差，并由均值和标准差得到变异系数，使红细胞RBC、白细胞WBC的变异系数CV<7％；若计数为不合格数据，则剔除超出均值±2SD的数据，合格数据不少于15个；8)取扩展因子k＝2，根据尿液红细胞RBC、白细胞WBC和上皮细胞EC计数的扩展不确定度，合成标准不确定度为：Uc2(y)＝(u1)2+(u2)2+…+(un)2，相对扩展不确定度：U95％＝2×Uc(y)。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：马怀安，王清涛，张瑞，高志琪，苑惠敏，窦会东，焦炳欣，郭鸿雁，王芳，刘一君，郝莹，
申请(专利权)人：首都医科大学附属北京朝阳医院，
类型：发明
国别省市：北京;11
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