脊髓损伤治疗剂制造技术

本发明专利技术公开了对根本上治疗脊髓损伤和脱髓鞘疾病有效的治疗剂。具体地说，公开了都含有HGF蛋白质作为有效成分的脊髓损伤治疗剂和脱髓鞘疾病治疗剂。

【技术实现步骤摘要】
【专利说明】 本申请是申请日为2008年2月28日，申请号为200880004651. 0,专利技术名称为"脊 髓损伤治疗剂"的专利技术专利申请的分案申请。
本专利技术涉及脊髓损伤治疗剂，更具体地说，涉及以肝细胞生长因子（以下简称为 "HGF"）蛋白质作为有效成分的脊髓损伤治疗剂。本专利技术还涉及以HGF蛋白质作为有效成 分的脱髓鞘疾病治疗剂。
技术介绍
术语"脊髓损伤"（SCI、spinalcordinjury)指的是在由于例如交通事故或从高 处跌落引起的脊椎脱白骨折等外伤对脊髓实质造成损伤的部位以下呈现末梢的运动、感觉 和植物性神经系统麻痹的临床状态。 目前，脊髓损伤患者的数量在日本约为100, 000人，在美国约为250, 000人。每年， 此类患者的数量在日本至少增加5, 000人，在美国至少增加10, 000人。 随着近年医疗的进步，损伤后的存活率升高，为了抑制障碍的发展而进行的脊髓 损伤的重建手术的方法也取得显著进步。因此，在抑制继发性神经学恶化方面开始取得成 功。进一步地，由于康复技术的进步和支持装置（电动轮椅等）的开发，患者的日常生活活 动（ADL)得到改善。然而，由于缺乏从根本上治疗脊髓损伤自身（S卩，保护神经防止神经损 伤和神经再生）的有效方法，目前存在众多不能自主排尿、排便、进行体力劳动或步行的患 者。 HGF最初被确定为对成熟肝细胞强的丝裂原，在1989年被基因克隆（非专利文献 1、2)。尽管HGF作为肝细胞生长因子被发现，但根据在包括基因敲除/基因敲入小鼠技术 的表达和机能分析上的近来的大量研究，还发现HGF为新的神经营养因子（非专利文献3、 4)〇 在专利文献1中，公开了在行为学和组织学上对于HGF基因对帕金森病模型大鼠 的效果的实施例。其中呈现出的实验结果表明，HGF基因的在先给药对保护中脑黑质中的多 巴胺神经元免受神经毒素6-羟多巴胺出-OHDA)的影响具有效果。该专利文献1还表明， 基于这些实验结果，HGF基因不仅能够用于帕金森病的治疗，还可用于包括阿尔茨海默病、 脊髓小脑退行性变、多发性硬化、纹状体黑质变性（SND)、脊髓性肌萎缩（SMA)、亨廷顿舞蹈 病、夏伊-德雷格综合征、腓骨肌萎缩症（CMT)、弗里德赖希共济失调、重症肌无力、烟雾病、 淀粉样变性、皮克病、亚急性脊髓视神经病、皮肌炎/多肌炎、克-雅氏病、白塞综合征、系统 性红斑狼疮（SLE)、结节病、结节性动脉外膜炎（PN)、后纵韧带骨化、弥漫性脊椎管狭窄、混 合性结缔组织病（MCTD)、糖尿病末梢神经炎和缺血性脑血管病（例如脑梗死、脑出血）的其 它神经疾病的治疗，作为这种神经疾病之一，还举出脊髓损伤。 然而，6-0HDA为对合成儿茶酚胺类的神经细胞（具体地说，为去甲肾上腺素产生 神经细胞、肾上腺素产生神经细胞和多巴胺产生神经细胞）具有特异性的效果的特殊的合 成毒素，而且对在以上列出的大多数疾病中据报导被变性或杀死的神经细胞不表现出任何 毒性。因此，不可能根据6-0HDA具有神经细胞死亡抑制效果来预测对包括脊髓损伤的上述 疾病产生的效果。此外，上述专利文献1未记载给予HGF蛋白质带来的治疗效果。 非专利文献5中记载了，将整合HGF基因（HGF表达病毒载体）的病毒载体注入到 大鼠第十胸椎的脊髓内，然后在相同部位制造脊椎挤压伤，之后，在运动机能的评价时观察 下肢运动机能的恢复。 然而，尽管脊髓损伤通常由事故等中受到的外伤引起，但在非专利文献5中，在胸 椎挤压伤之前3天注入HGF表达病毒载体。明显不可能以这种方式预测事故的发生和损伤 部位、并预先局部给予HGF表达病毒载体。 此外，脊髓损伤患者的状态在受伤后72小时有可能不稳定，可能很难插入用于鞘 内给药的导管。因此，决定适当的给药时间是重要的。 进一步地，还存在许多可想象的问题，例如控制在通常的基因治疗中蛋白质表达 量的困难性、由于重复给药而使一部分基因表达载体存在触发免疫应答的危险、以及一部 分基因表达载体存在将基因导入到基因组中的可能性。 包括脊髓神经的有髓神经的神经纤维被由称为髓磷脂的脂蛋白的层形成的鞘覆 盖。该髓鞘发挥作为神经纤维的绝缘体的作用，通过有髓神经能够进行跳跃传导。将该髓鞘 的破坏称为脱髓鞘。当发生脱髓鞘时，由于神经传递的显著缓慢而引起多种神经症状。伴 有这种脱髓鞘的疾病通常称作脱髓鞘疾病，代表性地包括例如多发性硬化。脊髓损伤也通 常伴有脱髓鞘。 多发性硬化为以弥漫性脱髓鞘斑的形成为特征的缓慢发展的中枢神经系统疾 病。多发性硬化的发病率在欧洲和美国为每100, 〇〇〇人中约50~100个病例，在日本为每 100, 000人中约1~5个病例。症状因人而异，可包括视觉丧失、复视、眼球震颤、发音障碍、 虚弱、感觉异常、膀胱问题和心境不稳。该疾病随着反复这种症状缓解和重新开始而发展。 虽然怀疑病因为免疫异常，但是还未确定。因此，与其它脱髓鞘疾病相同，目前还没有根本 性治疗方法。 如上所述，尽管已知包括注入整合HGF基因的病毒载体（HGF表达病毒载体）的方 法，也已知当诸如疱疹病毒（HSV)或腺病毒等病毒引入到脑内时，在脑中产生浓度依赖性 炎症反应，引起脱髓鞘（专利文献2)。 因此，同样根据此观点，包括使用整合HGF基因的病毒载体的治疗方法明显不会 成为脱髓鞘疾病的根本性治疗方法。由此要求确立不引起脱髓鞘的治疗方法。 专利文献1 :W02003/045439号小册子 专利文献2 :W02005/100577号小册子 非专利文献 1 :Biochem.Biophys.Res.Commun.，122, 1450-1459 (1984) 非专利文献 2 :Nature, 342, 440-443 (1989) 非专利文献 3 :Nat.Neurosci.，2, 213-217(1999) 非专利文献 4 :Clin.Chim.Acta.，327, 1-23 (2003) 非专利文献5 :日本整形外科学会杂志、2005. 08. 25、Vol. 79,No. 8,pS764
技术实现思路
本专利技术的目的在于，提供不使用基因，通过简便的方法就可以治疗脊髓损伤和脱 髓鞘疾病的药剂。 为了解决上述课题，本专利技术人进行了广泛的调查研究。结果他们发现，HGF蛋白质 在包括脱髓鞘抑制效果和5HT神经再生效果的脊髓损伤治疗中具有最期待的机能再生效 果，HGF蛋白质作为脊髓损伤的治疗剂是有用的。而且，本专利技术人还发现，HGF蛋白质作为脱 髓鞘疾病的治疗剂是有用的。基于这些发现，最终完成了本专利技术。 因此，本专利技术涉及： (1)脊髓损伤治疗剂，含有HGF蛋白质作为有效成分； (2)根据上述⑴所述的治疗剂，其中，HGF蛋白质为具有序列号1或2的氨基酸 序列的蛋白质，具有与序列号1或2的氨基酸序列实质上相同的氨基酸序列且具有活性与 HGF实质上相同的蛋白质，或者为具有活性与HGF实质上相同的所述蛋白质之一的部分肽； (3)根据上述⑴所述的治疗剂，其中，HGF蛋白质为具有序列号2的氨基酸序列 的蛋白质； (4)根据上述⑴~⑶中的任意一项所述的治疗剂，其中，所述治疗剂适于局部 用于脊髓损伤部位； (5)根据上述（4)所述的治疗剂，其中，所述治疗剂为鞘内给药用注射剂的剂型； (6)根据上述⑷所述本文档来自技高网...

【技术保护点】
HGF蛋白质在制备脊髓损伤治疗剂中的应用，所述脊髓损伤为脊髓损伤发生后两周内的脊髓损伤，其中所述治疗剂为鞘内给药用注射剂的剂型，所述治疗剂包括浓度为0.0002～2.0w/v％的所述HGF蛋白质。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：冈野荣之，户山芳昭，中村雅也，岩波明生，北村和也，中村敏一，船越洋，花田敬吾，
申请(专利权)人：学校法人庆应义塾，国立大学法人大阪大学，克霖固鲁制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：日本;JP