一种海水中敌百虫手性对映体的检测方法，其特征在于步骤：取养殖海水90～110mL于烧杯中，加入敌百虫标准品5mg～10mg，振荡混匀后加入1～2滴冰乙酸溶液，取10～50mL过HLB固相萃取小柱，用6～10mL乙酸乙酯洗脱，将洗脱液用氮气吹至近干，残液流动相溶解定溶至1mL，并采用微孔滤膜进行过滤后得到溶液A，以正己烷与异丙醇体积比为85～95:15～5做为流动相对敌百虫对映体进行分离；用高效液相色谱仪对上述溶液A进行检测，选用CHIRALCEL IC手性柱，柱温为20℃～35℃，流速为0.7mL/min～1.0mL/min，波长为207nm。本发明专利技术能成功实现敌百虫手性对映体的拆分，从而检测海水中敌百虫对映体的残留量，为海水中手性药物残留检测提供理论依据。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及。
技术介绍
敌百虫属于手性有机磷杀 虫剂，对鱼体内外寄生的吸虫、线虫、棘头虫及危害鱼苗、鱼卵的枝角类、桡角类幼虫和水蜈 蚣等均具有良好的杀灭作用。敌百虫具有一个手性碳原子，一对手性对映体，其对映体结构 式如图1.1-1. 2所示。敌百虫水解的后产物能与虫体的胆碱酯酶相结合，使虫体神经肌肉 功能失常，先兴奋，后麻痹，直至死亡，常作为抗寄生虫药用于海水养殖中杀灭鱼虱等常见 鱼体寄生虫以提高渔业产量。敌百虫在海水养殖中的推荐剂量为0. 1~lmg/L，然而在实际 养殖工程中，人们常常施用过量的敌百虫，从而导致养殖水体中出现敌百虫药物残留。敌百 虫对非目标生物也会产生毒性作用（抑制胆碱酯酶活性），带有敌百虫残留的废水排入河 流或海中，将直接或间接地危害环境及人类健康。 目前，针对敌百虫在土壤、环境、食品中的残留检测研究不少，但是尚没有针对敌 百虫对映体残留进行分析检测，并且在以往的研究中，通常不区分海水养殖用药的手性对 映体，那么水产品药物残留的风险评估所依据的数据则不完全真实。因此开展手性药物对 映体拆分技术的研究，针对水产养殖中常用的敌百虫的选择性残留行为进行系统研究，将 大大推进水产养殖用手性药物研究的进展和应用。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供，采 用高效液相色谱法手性固定相法检测海水中敌百虫对映体的残留量，可成功实现敌百虫手 性对映体的拆分。 本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种海水中敌百虫手性对映体的 检测方法，其特征在于包括以下步骤： 1)取养殖海水90~IlOmL于烧杯中，加入敌百虫标准品5mg~IOmg,振荡混匀后 加入1~2滴20wt%冰乙酸溶液，取10~50mL过HLB固相萃取小柱，然后用6~IOmL乙 酸乙酯洗脱，洗脱液收集于容量瓶中； 2)将步骤1)中的洗脱液乙酸乙酯用氮气吹至近干，残液用正己烷+异丙醇的流动 相溶解定溶至lmL，并采用0. 22 μ m微孔滤膜进行过滤后得到溶液A，它以正己烷与异丙醇 体积比为85~95:15~5做为流动相对敌百虫对映体进行分离； 3)采用高效液相色谱仪对上述溶液A进行检测；检测时选用CHIRALCEL IC手性 柱，手性柱的柱温为20°C~35°C，正己烷与异丙醇体积比为85~95:15~5做为流动相， 检测时的流速为〇· 7mL/min~1.0 mL/min，波长为207nm。 作为改进，步骤2和3)的流动相还含有乙醇，它以正己烷、异丙醇与乙醇体积比为 90:8~9. 5:2~0. 5做为流动相对敌百虫对映体和水样中的杂质进行分离。 再改进，所述步骤2和3)的正己烷、异丙醇与乙醇的体积比为90:8. 5:1. 5。 优选，所述步骤3)的检测时的流速为1.0 mL/min。 优选，所述步骤3)的柱温为25°C。 优选，所述步骤3)的CHIRALCEL IC手性柱的填料为5 μ m硅胶表面涂布纤维 素-三。 最后，所述步骤1)的HLB固相萃取小柱是经甲醇+水活化。 与现有技术相比，本专利技术的优点在于：采用高效液相色谱法手性固定相法检测海 水中敌百虫对映体的残留量，成功实现了敌百虫手性对映体的拆分，从而可对海水中敌百 虫对映体的残留量进行检测，为海水中手性药物残留检测提供理论依据。其中，对映体及在 0. 5mg/L~10mg/L浓度范围内与其响应值呈良好的线性关系，回归方程及相关系数分别为 y = 20. 795x - L 7766、R2 = 0· 9993 及 y = 19. 730χ+2· 9066、R2 = 0· 9992,样品平均回收 率分别为89. 07%和82. 93%，日间精密度分别为6. 77%和6. 29%，定量限分别为0. 05mg/ L 和 0· 04mg/L。【附图说明】 图I. 1~1. 2是本专利技术提供的敌百虫对映体结构式； 图2是本专利技术实施例中敌百虫的色谱图。【具体实施方式】 以下结合附图实施例对本专利技术作进一步详细描述。 -种海水中敌百虫手性对映体的检测方法，包括以下步骤： (1)取养殖海水IOOmL于烧杯中，加入敌百虫标准品5mg~IOmg,振荡混匀后加入 1~2滴20wt%冰乙酸（分析纯）溶液，取10~50mL过HLB固相萃取小柱（经5mL甲醇 +5mL水活化，然后用6~IOmL乙酸乙酯洗脱，洗脱液收集于IOmL容量瓶中； (2)将步骤⑴中的洗脱液乙酸乙酯用氮气吹至近干，残液用正己烷：异丙醇：乙 醇按照90:8. 5:1. 5 (V: V: V)溶解定溶至lmL，并采用0. 22 μ m微孔滤膜进行过滤后得到溶液 A ； (3)采用高效液相色谱仪对上述溶液A进行检测；检测时选用CHIRALCEL IC手性 柱，该手性柱的填料为5 μ m硅胶表面涂布纤维素-三;正己 烷：异丙醇：乙醇按照90:8. 5:1. 5(V:V:V)作为流动相，所述手性柱的柱温为20°C~35°C; 检测时的流速为〇· 7mL/min~1.0 mL/min，波长为207nm。 在本实施例中，步骤（2和3)中分别使用正己烷与异丙醇体积比为95:5、90:10和 85:15的流动相对敌百虫进行手性拆分，拆分结果如表1所示，可以看出，随着流动相中异 丙醇比例的增大，流动相极性增强，分离度减小因此，所使用流动相的最佳组成为正己烷与 异丙醇的体积分数分别为90与10,在该流动相配比条件下对映体分离效果良好。 表 1 由于检测时流速不同拆分效果可能不同，本实施例在选用体积分数分别为90与 10的正己烧与异丙醇作为流动相的前提下，分别检测了流速为0. 7mL/min、0. 8mL/min、 0. 9mL/min、l. OmL/min时对映体之间的拆分情况，拆分结果如表2所示，当流速为lmL/min 时分离所需时间最短。因此本实施例检测时的流速优选为lmL/min。 保持其它的色谱条件不变，本实施例还考察了柱温对敌百虫对映体手性分离的影 响。表3为不同柱温下敌百虫的拆分结果，可以看出，随着柱温升高，分离度有下降趋势，但 在下列温度下敌百虫对映体均可达到基线分离，由于柱温过高会使色谱柱的寿命缩短，因 此，本实施例优选接近室温的25°C作为最佳柱温。 在进行样品测定时，由于右敌百虫色谱峰与水样中杂质的色谱峰不能实现基线分 离，故在流动相中添加一定比例的乙醇，使其可以实现基线分离，结果如表4所示。当正己 烷：异丙醇：乙醇比例90:8. 5:1. 5时右敌百虫可与水样中分离，同时也可以保证实验在较 短的时间内完成。 取养殖海水90~IlOmL于烧杯中，加入敌百虫标准品5mg~IOmg,振荡混匀后加 入1~2滴20wt %冰乙酸溶液，取10~50mL，之后过HLB小柱，乙酸乙酯8mL洗脱，洗脱液 氮吹至近干后用流动相定容至ImL过0. 22 μ m有机滤膜上机检测。敌百虫浓度在0. 5mg/ L~10mg/L范围内与其响应值呈良好的线性关系，以X表示浓度，Y表示左敌百虫峰面积。 回归方程及相关系数为y = 20. 795x - 1. 7766、R2 = 0. 9993。右敌百虫浓度在0. 5mg/L~ 10mg/L范围内与其响应值呈良好的线性关系，以Y表示浓度，X表示右敌百虫峰面积。回归 方程及相关系数为及相关本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种海水中敌百虫手性对映体的检测方法，其特征在于包括以下步骤：1)取养殖海水90～110mL于烧杯中，加入敌百虫标准品5mg～10mg，振荡混匀后加入1～2滴20wt％冰乙酸溶液，取10～50mL过HLB固相萃取小柱，然后用6～10mL乙酸乙酯洗脱，洗脱液收集于容量瓶中；2)将步骤1)中的洗脱液乙酸乙酯用氮气吹至近干，残液用正己烷+异丙醇的混合液作为流动相溶解定溶至1mL，并采用0.22μm微孔滤膜进行过滤后得到溶液A，它以正己烷与异丙醇体积比为85～95:15～5做为流动相对敌百虫对映体进行分离；3)采用高效液相色谱仪对上述溶液A进行检测；检测时选用CHIRALCEL IC手性柱，手性柱的柱温为20℃～35℃，正己烷与异丙醇体积比为85～95:15～5做为流动相，检测时的流速为0.7mL/min～1.0mL/min，波长为207nm。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：聂晶，欧阳小琨，高小峰，杨立业，王阳光，吴伟建，郁迪，徐红萍，
申请(专利权)人：浙江海洋学院，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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