一种川楝子的质量检测方法技术

本发明专利技术涉及一种川楝子的质量检测方法，该方法采用TC-C18色谱柱、以乙腈-水为流动相检测川楝子中的川楝素，采用该RP-HPLC检测方法与HPLC-MS联用检测方法的检测结果无差异，且该质量检测方法简便可行，灵敏度高，重复性好，稳定可靠。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种中药材川楝子的质量检测方法，属于制药

技术介绍
川楝子是楝科植物川楝（Melia toosendan Sieb. et Zucc.)的干燥果实，味苦，性 寒，有行气止痛、疏肝泄热等功效，是中国药典（2010年版）收录的常用中药材。对川楝子化 学成分的研究，主要集中于一些三萜类化合物，如川楝素。川楝素具有驱虫、抗癌、抗菌、影 响神经肌肉及细胞、影响呼吸中枢及消炎等多种生物活性。同时也是药典规定的川楝子、苦 楝皮等药材含量控制的指标成分，指标成分的含量检测对于中药材的质量控制至关重要。 中国药典（2010年版）一部采用HPLC-MS联用检测的方法对川楝子和苦楝皮中的川楝素进 行含量测定，基层药检部门以及相关药品的厂家如按药典方法进行质控，必须购置HPLC-MS 联用仪。然而HPLC-MS仪器价格昂贵，运行成本大，对仪器操作人员的水平要求高，在基层 药品检验部门和需要进行川楝素质控检测的一般制药企业里，该方法的可操作性较差。本 专利技术提供了采用RP-HPLC检测川楝子中的川楝素的方法，以利于基层药检部门以及相关制 药企业更广泛、便捷的使用。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供，该质量检测方法简便可行，灵 敏度高，重复性好。 为实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案： 方案一： 色谱条件与系统适用性试验规格为250mmX4. 6mm、5ym的TC-C18色谱柱，乙 腈-水25 : 75为流动相，检测波长为210nm，柱温为35°C，流速为lmL/min ;进样量为10ul， 理论塔板数按川楝素峰计算不低于3000 ; 对照品溶液的制备取川楝素对照品7. 7mg，精密称定，置25mL容量瓶中加甲醇 溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每ImL含川楝素0. 3080mg的溶液，作为对照品溶液； 供试品溶液的制备取过三号筛的川楝子粉末I. 〇〇65g，精密称定，置50mL具塞 锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，称定重量，超声提取30分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲 醇补足减失的重量，摇匀，滤过，重复提取3次，合并滤液蒸干，甲醇溶解定容至IOmL的容量 瓶中，摇匀，滤过，取续滤液，即得； 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测 定，即得。方案二： 色谱条件与系统适用性试验规格为250mmX4. 6mm、5ym的TC-C18色谱柱，乙 腈-水20 : 80为流动相，检测波长为210nm，柱温为35°C，流速为lmL/min ;进样量为10ul， 理论塔板数按川楝素峰计算不低于3000 ; 对照品溶液的制备取川楝素对照品7. 7mg，精密称定，置25mL容量瓶中加甲醇 溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每ImL含川楝素0. 3080mg的溶液，作为对照品溶液； 供试品溶液的制备取过三号筛的川楝子粉末I. 〇〇65g，精密称定，置50mL具塞 锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，称定重量，超声提取25分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲 醇补足减失的重量，摇匀，滤过，重复提取4次，合并滤液蒸干，甲醇溶解定容至IOmL的容量 瓶中，摇匀，滤过，取续滤液，即得； 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测 定，即得。 方案三： 色谱条件与系统适用性试验规格为250mmX4. 6mm、5ym的TC-C18色谱柱，乙 腈-水30 : 70为流动相，检测波长为210nm，柱温为35°C，流速为lmL/min ;进样量为10ul， 理论塔板数按川楝素峰计算不低于3000 ; 对照品溶液的制备取川楝素对照品7. 7mg，精密称定，置25mL容量瓶中加甲醇 溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每ImL含川楝素0. 3080mg的溶液，作为对照品溶液； 供试品溶液的制备取过三号筛的川楝子粉末I. 〇〇65g，精密称定，置50mL具塞 锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，称定重量，超声提取35分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲 醇补足减失的重量，摇匀，滤过，重复提取2次，合并滤液蒸干，甲醇溶解定容至IOmL的容量 瓶中，摇匀，滤过，取续滤液，即得； 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测 定，即得。 本专利技术提供的质量检测方法具有较强的适应性，其方法具有简便可行，灵敏度 高，重复性好的特点，与药典公开的检验方法相比不仅简单易操作，而且稳定可靠。采用 RP-HPLC法对3个批次川楝子进行川楝素含量测定，同按照《中国药典》2010年版中川楝子 川楝素含量测定方法（HPLC-MS法）的测定结果进行比较如下表，结果表明该方法检测值稳 定可靠。 含量数据对比结果表 现就本专利技术的主要研究方法介绍如下： 1.准确度检查 精密称取已知含量的川楝子样品6份，每份1.0 OOOg，依次分别精密加入川楝素 对照品〇· 63mg、0. 59mg、0. 84mg、0. 80mg、I. 13mg、0. 99mg，按方案二所述方法制备供试品溶 液及色谱条件测定含量，计算回收率，其平均回收率为102. 4%，回收率的相对标准偏差为 3. 9 %，符合标准要求，结果见表1。 表1回收率考察 2.重复性检查 在规定范围内，同一个分析人员在较短时间间隔内，精密吸取川楝素对照品溶液 IOuL连续进样6次，以测得的川楝素峰面积计算相对标准偏差，结果为1. 8%，在标准范围 内，符合规定要求。 3.专属性检查 设置3组试验样品，分别为川楝素对照品溶液、川楝子供试品溶液、试剂空白溶液 组，分别精密吸取川楝素对照品溶液、川楝子供试品溶液和空白溶液各10uL，注入液相色 谱仪，对照品中川楝素的保留时间为35. 942min和46. 227min，供试品中川楝素保留时间 35. 873min和46. 073min，试剂空白组在川楝素对照品的保留时间无色谱峰出现，在标准范 围之内。 4.线性和范围 取川楝素对照品贮备液分别稀释成浓度为0· 2870mg/mL、0. 1435mg/mL、 0· 1076mg/mL、0.0717mg/mL、0.0358mg/mL的溶液，分别精密吸取川楝素对照品溶液各 10uL，注入液相色谱仪，以川楝素峰面积的平均值和浓度进行回归处理的线性方程为Y = 10019082. 226X+7652. 520,线性相关系数为0. 9998,可见在0. 036 %~0. 28 %的浓度范围 内呈良好的线性关系，可用于川楝素的含量测定。 5.耐用性检查 试验所用的色谱柱分别为安捷伦色谱柱、菲罗门色谱柱；流动相组成分别为乙 腈-水（25 : 75)、（28 : 72)、（30 : 70);柱温分别为33°C、35°C、37°C时，精密吸取川楝 素对照品溶液10uL，注入液相色谱仪，记录图谱，依据保留时间进行定位，其分离度和理论 塔板数见表2。 表2耐用性检查结果 分离度和理论塔板数在标准范围之内，符合规定，确保流动相的组成比例、不同厂 牌的同类型色谱柱、柱温的变化因素能通过系统适用性。 6.方法精密度检查 精确量取川楝素对照品，平行配制对照溶液6份，在拟定的色谱条件下，1日内重 复进样分析6次，计算出其平均日内相对偏差=1.06% (n = 6)，将上述溶液在6日本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种川楝子的质量检测方法，其特征在于：色谱条件与系统适用性试验  规格为250mm×4.6mm、5μm的TC‑C18色谱柱，乙腈‑水20‑30∶70‑80为流动相，检测波长为210nm，柱温为35℃，流速为1mL/min；进样量为10ul，理论塔板数按川楝素峰计算不低于3000；对照品溶液的制备  取川楝素对照品7.7mg，精密称定，置25mL容量瓶中加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每1mL含川楝素0.3080mg的溶液，作为对照品溶液；供试品溶液的制备  取过三号筛的川楝子粉末1.0065g，精密称定，置50mL具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，称定重量，超声提取25‑35分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，重复提取2‑4次，合并滤液蒸干，甲醇溶解定容至10mL的容量瓶中，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李婵，雷久雨，南叶飞，
申请(专利权)人：李婵，雷久雨，南叶飞，
类型：发明
国别省市：陕西;61