一种人胆管癌细胞系及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种人胆管癌细胞系及其应用，所述的人胆管癌细胞系保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C201452。所述人胆管癌细胞的应用为：该人胆管癌细胞系用于制备在免疫缺陷哺乳动物中产生胆管癌的试剂。该人胆管癌细胞系性状稳定，可稳定多次传代，在动物体内具有成瘤性，可以成功制备胆管癌动物模型，可以用来分析体外对药物的敏感性和耐药性、体内动物实验对药物的敏感性和耐药性，进而建立体外、体内两个相关联的抗肿瘤药物活性检测平台，是应用于基础研究和临床前期应用的理想人原发性胆管癌细胞系，为进一步研究肿瘤的发生机制和药物检测提供了理想的材料。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及细胞系领域，特别涉及一种人胆管癌细胞系及其应用。
技术介绍
原发性胆管癌是一类起源于上皮细胞的肿瘤，诊断较晚，预后差。由于早期缺乏特异性的临床表现和诊断指标，因而临床上发现的原发性胆管癌多是中、晚期病例。胆管癌的发生率约占胃肠道恶性肿瘤的3％。发病的平均年龄大约为50岁，男性的发病率约为女性的1.5倍。亚洲人的发生率是黑人和白人的2倍。近三十年来，全世界范围内胆管癌的发病率在不断升高，但它的发病机理仍不清楚。已知胆管癌的危险因素与胆管慢性炎症、病毒感染、胆道先天畸形、环境或职业毒素暴露等状态的有关。目前胆管癌的治疗方法以手术切除为主，但是总体效果欠佳，复发率高。大约80％的胆管癌由于转移或进展期只能行姑息治疗。虽然手术和肝移植可治疗部分肝门部胆管癌患者，但5年生存率仍然很低。化疗可用于不可切除的或复发转移的胆管癌患者，以控制疾病、延长生存期并提高生活质量。充分了解胆管癌的生物学机制、致病基因以及其肿瘤微环境之间复杂的相互作用可为患者选择最佳治疗方案并提高患者生存率。目前报道的应用于研究的胆管癌细胞系非常少，生物多样性低。建立胆管癌细胞系，可以为进一步研究胆管癌的发生机制提供材料，也可以为检测治疗胆管癌的药物提供平台。但包括胆管癌细胞在内的许多肿瘤细胞的体外培养建系均非常困难，原发肿瘤组织由于离体后环境变化，细胞往往会发生衰退死亡，导致体外细胞建系的成功率极低，即使能在体外生存，也常发生某些生物学特性的改变或丢失，与临床上胆管癌的生物学性状相差较大。另一方面，临床胆管癌患者确诊往往已是中晚期，无法进行手术，化疗是唯一的治疗方法。因此，建立胆管癌动物模型，对于肿瘤的药效学研究显得格外重要。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题就是针对现有的人胆管癌细胞系存在的生物多样性低，与临床上胆管癌的生物学性状相差较大这一技术问题，提供一种新的人胆管癌细胞系及其应用。本专利技术的人胆管癌细胞系性状稳定，可稳定多次传代，在动物体内具有成瘤性，可以成功制备胆管癌动物模型，可以用来分析体外对药物的敏感性和耐药性、体内动物实验对药物的敏感性和耐药性，进而建立体外、体内两个相关联的抗肿瘤药物检测平台，是应用于基础研究和临床前期应用的理想人原发性胆管癌细胞系，使得通过原代培养建立的人源肿瘤细胞更接近于肿瘤的临床生物学特性，对药物的敏感性和耐药性将具有更好的预测性，可用于临床前抗肿瘤药物的活性检测，为进一步研究肿瘤的发生机制和药物抗肿瘤活性检测提供了理想的材料。本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案之一是：一种人胆管癌细胞系，其保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO：C201452。本专利技术还提供如上所述的人胆管癌细胞系的子代细胞系。本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案之二是：本专利技术所述的人胆管癌细胞系的用途，所述的人胆管癌细胞系用于制备在免疫缺陷哺乳动物中产生胆管癌的试剂。本专利技术所述的免疫缺陷哺乳动物为本领域常规的免疫缺陷哺乳动物，较佳的为免疫缺陷小鼠，所述的免疫缺陷小鼠较佳的为裸小鼠。所述的胆管癌为本领域常规的胆管癌，较佳地为低分化或中分化胆管癌细胞癌。本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案之三是：一种药物的抑制胆管癌的活性的检测方法，所述检测方法包括以下步骤：将待测药物施用于细胞模型中，施用后抑制细胞增殖或导致细胞凋亡的药物为具有抑制胆管癌活性的药物，其中所述的细胞模型是本专利技术所述的人胆管癌细胞系。其中所述检测方法为本领域常规使用的检测方法，所述检测方法较佳地包括以下步骤：(1)将一定数量的人胆管癌细胞或其子代细胞接种于96孔细胞培养板孔中，培养24小时；(2)将待测化合物稀释成不同浓度施用于细胞，待测化合物作用72小时后通过测定细胞的活力，计算不同浓度的待测化合物对细胞的增殖抑制能力，计算待测化合物半数抑制浓度，用以判断待测化合物的抑制肿瘤的活性。其中步骤(1)所述人胆管癌细胞系或其子代细胞的接种量较佳地为5000/孔。步骤(2)所述检测不同化合物半数抑制浓度，用以判断待测化合物的抗肿瘤能力的方法为本领域常规检测和计算方法。其中所述半数抑制浓度检测方法较佳地包括ATP生物发光法或MTT法，本专利技术所述检测方法优选地为ATP生物发光法。所述的ATP生物发光法是通过对细胞中的ATP进行定量测定来检测培养物中活细胞数目的一种均质检测方法，其中所述的ATP是反应活细胞新陈代谢能力的一个重要指标。本专利技术还提供一种药物的治疗胆管癌的活性的检测方法，所述检测方法包括以下步骤：将测试化合物施用于动物模型，施用后导致胆管癌症状改善或治愈的测试化合物就是治疗胆管癌的候选化合物，其中所述的动物模型具有如上所述的人胆管癌细胞系所导致的胆管癌肿瘤。本专利技术所述检测方法较佳地包括以下步骤：(1)将所述的胆管癌细胞或其子代细胞制备成细胞悬液，接种于哺乳动物皮下，进行饲养，获得人胆管癌动物模型；(2)观察和测量动物的体重与肿瘤生长情况；(3)将测试化合物施用于动物模型，施用后导致胆管癌症状改善或治愈的测试化合物就是治疗胆管癌的候选化合物。其中，所述的动物模型较佳地为免疫缺陷动物，优选地为裸小鼠。较佳的可采用细胞悬液注射方法来建立动物模型。在施用步骤中，将测试化合物通过尾静脉注射、口服、腹腔注射或于肿瘤局部用药等方式施用于胆管癌荷瘤动物。较佳的使用对照实验，一种优选的对照实验方式是：同时还使用不含测试化合物的溶剂施用于胆管癌荷瘤动物作为对照。本专利技术还提供了一种人胆管癌细胞系的建立方法，所述的建立方法包括以下步骤：(1)获得新鲜的临床人胆管癌手术切除标本，剪切成小块，接种免疫缺陷哺乳动物；(2)接种60～80天后，将荷瘤动物安乐死，取出肿瘤组织，进行癌细胞的原代培养和传代培养。其中步骤(1)所述小块的重量较佳地为20～50mg，所述免疫缺陷哺乳动物较佳地为免疫缺陷小鼠，所述的免疫缺陷小鼠较佳地为裸小鼠。其中步骤(1)所述的新鲜的临床胆管癌手术切除标本较佳的用新鲜的HBSS缓冲液(含500U/mL青霉素G、500μg/mL硫酸链霉素和1.25μg/mL两性霉素B)漂洗后，再进行接种。所述的接种的方法为本领域常规方法，较佳地为皮下穿刺接种，原位接种或者肾囊膜内接种，优选地为皮下穿刺接种。其中步骤(2)所述的肿瘤组织的体积较佳地为300mm3～500mm3，所述原代培养为本领域常规的原代培养技术。其中步骤(2)所述的原代培养方法为本领域常规的哺乳动物细胞的原代培养方法。较佳的所述的原代培养方法包括以下步骤：将肿瘤组织剪切成小块，置入培养瓶中，于37℃孵箱5％CO2条件下培养；6-8小时后，向培养瓶内加入1640完全培养液(含10％胎牛血清，100U/mL青霉素G、100μg/mL)，静置培养。其中步骤(2)所述的传代培养方法为本领域常规哺乳动物细胞的传代培养方法。所述的传代培养方法较佳地包括以下步骤：吸弃旧培养液，向瓶中加入新鲜的0.05％胰蛋白酶溶液，待细胞脱落后，加入新鲜的完全培养液，仔细吹本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人胆管癌细胞系，其特征在于，所述的人胆管癌细胞系保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C201452。

【技术特征摘要】
1.一种人胆管癌细胞系，其特征在于，所述的人胆管癌细胞系保藏在
中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO：C201452。
2.如权利要求1所述的人胆管癌细胞系的子代细胞系。
3.如权利要求1或2所述的人胆管癌细胞系的用途，其特征在于，所
述的人胆管癌细胞系用于制备在免疫缺陷哺乳动物中产生胆管癌的试剂。
4.如权利要求3所述的人胆管癌细胞系的用途，其特征在于，所述的
免疫缺陷哺乳动物为免疫缺陷小鼠。
5.如权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：王科，欧阳可栋，秦宵然，赵刚，闻丹忆，张伟，朱纯超，
申请(专利权)人：上海立迪生物技术有限公司，上海交通大学医学院附属仁济医院，
类型：发明
国别省市：上海;31