本发明专利技术涉及一种水产养殖用发酵型中草药水质改良剂的制备方法及其应用，属于水产养殖技术领域。其由枯草芽孢杆菌CGMCC 1.1413和植物乳杆菌CGMCC 1.557两株具不同性状和生态活性的微生物菌株，混合发酵具抑菌和提高免疫力的鱼腥草、黄芪等中草药，制成液态发酵型中草药水质改良剂。本发明专利技术有效地提高了中草药的水溶性和生物可利用性，将微生物与中草药有机地结合，使用方便，使用量小，每亩水面每米水深的最小用量仅为0.5公斤，不受环境条件的影响；使用后效果稳定，可有效地去除或转化养殖水体中的氨氮和亚硝酸氮，抑制和拮抗弧菌等病原生物，减少养殖中后期有害物质的积累，提高养殖生物机体的免疫力，达到生物净水防病的目的，减轻病害所造成的经济损失，保证养殖产量和质量。
【技术实现步骤摘要】
一种水产养殖用发酵型中草药水质改良剂的制备方法及其应用
本专利技术涉及一种水产养殖用发酵型中草药水质改良剂的制备方法及其应用，属于水产养殖
技术介绍
改革开放以来，我国的水产养殖业取得了突飞猛进的发展，成为世界上唯一养殖产量超过捕捞产量的渔业大国。我国现有的水产养殖业大多秉承了以“密、混、轮”为技术特征的传统养殖模式，即以多品种、高密度、大量施肥投饵而获得高产量的养殖模式。为了提高单位水体的养殖产量，往往过分地增加水体营养，过度投饵、施肥和加大放养密度，致使水中氮、磷猛增，透明度下降，水质恶化，水体中的饵料和养殖品种的代谢物大量积聚于池塘底部，底质污染严重。水体和底质中过量的有机质分解不仅可消耗水体中的溶解氧，使水体环境处于缺氧状态，同时可释放出许多有害物质，如氨氮、亚硝酸盐和硫化氢等，直接危害水体中的养殖生物，或引起养殖生物的应激反应。对水产动物，产生应激的起因主要是环境因素造成的。低溶氧、低pH值、高水温、高密度、感染寄生虫以及分子氨、硫化氢等有毒物质都会造成养殖对象产生程度不同的应激反应。动物应激的生理学表现的主要指标是体内肾上腺素和皮质醇大量产生或长期处于较高水平，使其合成代谢降低，分解代谢升高，抑制生长和繁殖活动。应激反应也会抑制动物的免疫功能，导致病害。生产中很多难以治愈的顽固性的鱼病往往是长期处于应激反应的结果。据调查，除了寄生虫病之外，所有的“细菌性”、“病毒性”病症几乎都与慢性、长期应激有关联。在天然水体中，各种有益菌和致病微生物是共存的，处于一种平衡状态。而当水体环境因子产生异常时，这种平衡状态将被打破，导致水产动物处于一种应激状态，生理功能紊乱，逐渐感染疾病。因此从生态学角度来看，尽管养殖水体是一个极为复杂的水生生态系统，但不论其多复杂，主要是水生生物—病原—环境三者之间的平衡关系。养殖水体生态环境的控制已成为发展我国水产养殖的关键问题。目前在水产养殖环境控制上，微生物制剂受到极大的关注。其安全性高、使用方便、成本低、控制效果好，但当水体中病原生物大量繁殖时因受生物竞争的影响而效果不佳。而在病原控制上，当前的主要措施仍是消毒剂和抗生素，虽然具有一定的效果，但存在风险隐患。中草药因具有天然、高效、毒副作用少、资源丰富等优点，在水产动物病害防治和抗应激上日益受到重视。但中草药成分复杂、药理性不明确、提取困难、水溶性不佳等又影响了其在水产养殖水体环境和病害控制上的应用。因此构建一种使用方便、安全无害、兼具微生物制剂净水和中草药抑菌抗应激功能于一体、能在短时间内快速净化水质、恢复水产动物生理机能、提高免疫的微生物发酵中草药产品显得十分重要。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术中的不足，提供一种水产养殖用发酵型中草药水质改良剂及制备方法及其应用，利用两种特异性微生物菌种经合理组配，形成混合菌种，在以糖蜜等为基础的培养液中发酵具抑菌和提高免疫力的中草药，生成含微生物活菌的发酵型中草药制剂。将制剂直接投入养殖水体，可有效地去除或转化养殖水体中的氨氮和亚硝酸氮，抑制和拮抗弧菌等病原生物，减少养殖中后期有害物质的积累，提高养殖生物机体的免疫力，达到生物净水防病的目的，减轻病害所造成的经济损失，保证养殖产量和质量。按照本专利技术提供的技术方案，一种水产养殖用发酵型中草药水质改良剂的制备方法，所述发酵型中草药水质改良剂为液体制剂，由枯草芽孢杆菌CGMCC1.1413和植物乳杆菌CGMCC1.557组成混合菌在一定培养基和发酵温度下与中草药一同发酵，完成后加工成液体制剂；按重量份计具体步骤如下：（1）枯草芽孢杆菌的培养：从试管斜面上取一环枯草芽孢杆菌CGMCC1.1413菌苔，接种到50~100mL灭菌的肉汤培养基中，于30~35℃、100~120r·min-1摇床上培养24~30h；然后将其接入5~8L经灭菌的肉汤培养基中，于30~35℃、100~120r·min-1摇床上培养24~30h，制成菌种种子液备用；（2）植物乳杆菌的培养：从试管斜面上取一环植物乳杆菌CGMCC1.557菌苔，接种到50~100mL灭菌的MRS液体培养基中，于32~37℃静置培养30~40h；然后将其接入5~8L经灭菌的MRS液体培养基中，于32~37℃静置培养28~32h，制成菌种种子液备用；（3）混合菌的组合：取步骤（1）培养至活菌浓度≥108CFU·mL-1的枯草芽孢杆菌和步骤（2）中培养至活菌浓度≥108CFU·mL-1的植物乳杆菌各5~8L，放入经灭菌的25L桶中混合，得到菌种混合种子液备用；（4）中草药的微生物发酵：在1.0吨不锈钢发酵罐中加入总体积600~700L的液体发酵培养基，经121℃灭菌15min后冷却备用；将步骤（3）所得菌种混合种子液10~16L接入发酵罐，在32~37℃、转速40~80r·min-1的条件下培养28~35h，待菌液浓度≥108CFU·mL-1时，调pH值为3.2~3.8，用5L塑料桶分装，最后包装入库，得到产品水产养殖用发酵型中草药水质改良剂。步骤（1）中所述的肉汤液体培养基为：蛋白胨10g·L-1，牛肉膏5g·L-1，NaCl5g·L-1，调节pH值6.8~7.2，经121℃灭菌20min后冷却备用；步骤（2）中所述的MRS液体培养基为，牛肉膏10g·L-1，蛋白胨10g·L-1，酵母膏5g·L-1，葡萄糖5g·L-1，柠檬酸二胺2g·L-1，吐温801g·L-1，乙酸钠5g·L-1，磷酸氢二钾2g·L-1，硫酸镁0.2g·L-1、硫酸锰0.05g·L-1，碳酸钙20g·L-1，调节pH值6.4~6.6，经121℃灭菌15min后冷却备用；步骤（4）中所述液体发酵培养基，其组份比例按重量份数计：糖蜜12~18份，大豆粉3~7份，酵母膏3~7份，乙酸钠1~3份，硫酸镁0.1~0.5份，磷酸氢二钾1~2份，中草药12~20份，水50~60份，于室温下在发酵罐中溶解混合，调节溶液pH值至6.4~6.6，121℃灭菌15min，冷却后备用。步骤（1）中所得菌种种子液的OD600值为0.9~1.2，活菌数≥108CFU·mL-1；步骤（2）中所得菌种种子液活菌数≥108CFU·mL-1。所述糖蜜中糖分含量≥55%。所述中草药为100目以上的粉状混合物，其组份比例按重量份数计：鱼腥草35~45份，金银花12~18份，黄芪10~20份，黄芩10~15份，甘草10~15份。采用乳酸和碳酸氢钠调节pH值。所述水产养殖用发酵型中草药水质改良剂的应用，将水产养殖用发酵型中草药水质改良剂投放于水质待改善的养殖池塘中，用量为0.5~1kg/亩·米水深，连用3~5天。本专利技术中各组分的作用原理如下：（1）枯草芽孢杆菌：枯草芽孢杆菌（Basillussubtilis）是芽孢杆菌属的一种，单个菌体0.7～0.8μm×2～3μm，着色均匀。无荚膜，周生鞭毛，能运动。革兰氏阳性菌，芽孢大小为0.6～0.9μm×1.0～1.5μm，椭圆至柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色。枯草芽孢杆菌菌液是枯草芽孢杆菌的发酵生产的，在菌体生长过程中能产生枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短杆菌肽等活性物质，对水环境中的病原微生物有明显的抑制作用；枯草芽孢杆菌可刺激水产养殖本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种水产养殖用发酵型中草药水质改良剂的制备方法，其特征是：所述发酵型中草药水质改良剂为液体制剂，由枯草芽孢杆菌CGMCC1.1413和植物乳杆菌CGMCC1.557组成混合菌在一定培养基和发酵温度下与中草药一同发酵，完成后加工成液体制剂；按重量份计具体步骤如下：（1）枯草芽孢杆菌的培养：从试管斜面上取一环枯草芽孢杆菌CGMCC 1.1413菌苔，接种到50~100mL灭菌的肉汤培养基中，于30~35℃、100~120r·min‑1摇床上培养24~30h；然后将其接入5~8L经灭菌的肉汤培养基中，于30~35℃、100~120r·min‑1摇床上培养24~30h，制成菌种种子液备用；（2）植物乳杆菌的培养：从试管斜面上取一环植物乳杆菌CGMCC 1.557菌苔，接种到50~100mL灭菌的MRS液体培养基中，于32~37℃静置培养30~40h；然后将其接入5~8L经灭菌的MRS液体培养基中，于32~37℃静置培养28~32h，制成菌种种子液备用；（3）混合菌的组合：取步骤（1）培养至活菌浓度≥108 CFU·mL‑1的枯草芽孢杆菌和步骤（2）中培养至活菌浓度≥108 CFU·mL‑1的植物乳杆菌各5~8L，放入经灭菌的25L桶中混合，得到菌种混合种子液备用；（4）中草药的微生物发酵：在1.0吨不锈钢发酵罐中加入总体积600~700L的液体发酵培养基，经121℃灭菌15 min后冷却备用；将步骤（3）所得菌种混合种子液10~16L接入发酵罐，在32~37℃、转速40~80r·min‑1的条件下培养28~35h，待菌液浓度≥108 CFU·mL‑1时，调pH值为3.2~3.8，用5L塑料桶分装，最后包装入库，得到产品水产养殖用发酵型中草药水质改良剂。...
【技术特征摘要】
1.一种水产养殖用发酵型中草药水质改良剂的制备方法，其特征是：所述发酵型中草药水质改良剂为液体制剂，由枯草芽孢杆菌CGMCC1.1413和植物乳杆菌CGMCC1.557组成混合菌在一定培养基和发酵温度下与中草药一同发酵，完成后加工成液体制剂；按重量份计具体步骤如下：（1）枯草芽孢杆菌的培养：从试管斜面上取一环枯草芽孢杆菌CGMCC1.1413菌苔，接种到50~100mL灭菌的肉汤培养基中，于30~35℃、100~120r·min-1摇床上培养24~30h；然后将其接入5~8L经灭菌的肉汤培养基中，于30~35℃、100~120r·min-1摇床上培养24~30h，制成菌种种子液备用；（2）植物乳杆菌的培养：从试管斜面上取一环植物乳杆菌CGMCC1.557菌苔，接种到50~100mL灭菌的MRS液体培养基中，于32~37℃静置培养30~40h；然后将其接入5~8L经灭菌的MRS液体培养基中，于32~37℃静置培养28~32h，制成菌种种子液备用；（3）混合菌的组合：取步骤（1）培养至活菌浓度≥108CFU·mL-1的枯草芽孢杆菌和步骤（2）中培养至活菌浓度≥108CFU·mL-1的植物乳杆菌各5~8L，放入经灭菌的25L桶中混合，得到菌种混合种子液备用；（4）中草药的微生物发酵：在1.0吨不锈钢发酵罐中加入总体积600~700L的液体发酵培养基，经121℃灭菌15min后冷却备用；将步骤（3）所得菌种混合种子液10~16L接入发酵罐，在32~37℃、转速40~80r·min-1的条件下培养28~35h，待菌液浓度≥108CFU·mL-1时，调pH值为3.2~3.8，用...
【专利技术属性】
技术研发人员：吴伟，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院淡水渔业研究中心，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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