一种蜜蜂雄蜂精液的保存液及其制备方法技术

本发明专利技术属于动物遗传育种领域，公开了一种蜜蜂雄蜂精液的保存液、其制备方法以及利用所述精液的保存液进行蜜蜂雄蜂精液保存的方法。本发明专利技术所述蜜蜂雄蜂精液的保存液包括精液贮存液和精液保护液；所述精液贮存液包括葡萄糖、氯化钾、碳酸氢钠、柠檬酸钠和水；所述精液保护液包括氯化钠、双氢链霉素和水，配方简单，对精子活力影响小，适合于雄蜂精液的常温保存及低温保存。本发明专利技术所述蜜蜂雄蜂精液的保存液的制备方法配制方法简单，配置时间短。采用所述蜜蜂雄蜂精液的保存液保存雄蜂精液，条件要求低，成本低，精子活力不下降，人工授精成功率高。

【技术实现步骤摘要】
一种蜜蜂雄蜂精液的保存液及其制备方法
本专利技术属于动物遗传育种领域，具体涉及精液的保存液，特别涉及蜜蜂雄蜂精液的保存液及其制备方法，同时还涉及了利用所述蜜蜂雄蜂精液的保存液对蜜蜂精液进行保存的方法。
技术介绍
蜜蜂是社会性昆虫群体，蜜蜂群体中具有同一性别但有不同的形态、身体结构、智能和行为的个体类型，称为级型分化。在蜜蜂生物学上的级型指同属于雌性的蜂王和工蜂两种类型。蜜蜂雌性的不同级型与其主要的职能分工有关，蜂王专司产卵，工蜂负责护理幼虫、供给食物，但是没有生育能力。蜂王是由受精卵发育而成的生殖器官发育完全的雌蜂，具有二倍染色体，在蜂群中专司产卵。但是蜜蜂还具有孤雌生殖的能力，未经交配的蜂王可以产生雄性后代，即雄蜂。处女王是羽化后但未经交配的蜂王，即蜂王未交配前称为处女王。而雄蜂是由未受精卵发育而成的蜜蜂，具有单倍染色体。雄蜂无采集能力，食物都是巢内已有的，它的职能主要是在巢外空中与婚飞的处女王交配。根据蜜蜂生物遗传育种原理，利用人工的方法诱导蜂群，在蜜粉源丰富、气候温暖的季节，可以有计划、大规模地培育优质雄蜂，采集雄蜂精液，进行保存。蜜蜂雄蜂精液的保存是指在实验室条件下将健康成熟的蜜蜂雄蜂精液经过某种处理(如混以一定比例的保护液等)，制成某种剂型。放置一段时间后，这种保存的精液仍能存活并具有受精能力，即给蜜蜂处女蜂王进行人工授精后，授精蜂王仍可以产出受精卵，这些卵可以发育成正常的工蜂。蜜蜂雄蜂精液的保存可以有效解决在世界范围内以及国内范围内进行蜜蜂优良蜂种遗传物质的传递，实现了经济、安全的运输方式。同时不受检疫检验的限制，降低传播病毒病等危害，降低运输成本，使得低成本利用优良蜜蜂资源成为可能。在选择育种方面，蜜蜂雄蜂精液的保存可以解决多目的父本雄蜂精液的传递、运输、待用等问题，固定地点开展多父本选择育种工作。国家间以保存的精液的形式交流遗传物质可以避免蜜蜂疾病和寄生物的传播，为养蜂业所面临的潜在问题提供了解决办法。在基因库保存方面，蜜蜂雄蜂精液的保存可以有效的开展多地区的蜜蜂遗传物质的收集工作，对全面开展我国(甚至是世界)范围内蜜蜂遗传物质的收集与整理、保存等工作提供了技术基础。在日常生产方面，由于蜜蜂雄蜂的出现有季节性，仅在每年夏秋大流蜜期可以大量生产高质量雄蜂，其他季节雄蜂较少或质量较差。而蜜蜂雄蜂精液的保存技术可以有效地摆脱气候条件的约束和季节的限制，并可以在雄蜂大量自然生产和容易培育时大量使用、储存，摆脱雄蜂生产的季节性限制。当自然界缺少或没有雄蜂的时候，可以使用储存的精液为处女蜂王进行人工授精，从而容易生产出早春繁殖蜂王和秋末替代蜂王。目前蜜蜂雄蜂精液的保存主要将健康成熟的蜜蜂雄蜂精液与蜜蜂保护液混合，低温保存。但低温保存条件要求高，成本高，限制了蜜蜂雄蜂精液的保存的广泛推广。而常温保存，保存时间短，保存后精子成活率低，人工授精成功率低。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于针对现有技术存在的缺陷提供一种蜜蜂雄蜂精液的保护液及其制备方法。采用本专利技术所述蜜蜂雄蜂精液的保护液保存雄蜂精液，保存后精子成活率高，人工授精成功率高。为实现本专利技术的目的，本专利技术采用如下技术方案：一种蜜蜂雄蜂精液的保存液，包括精液贮存液和精液保护液；所述精液贮存液包括葡萄糖、氯化钾、碳酸氢钠、柠檬酸钠和水；所述精液保护液包括氯化钠、双氢链霉素和水。在一些实施方案中，本专利技术所述的保存液，每100ml精液贮存液中含有：在一些优选实施方案中，本专利技术所述的保存液，每100ml精液贮存液中含有：在一些实施方案中，本专利技术所述的保存液，所述精液保护液中各成分含量如下：NaCl1wt％-3wt％双氢链霉素0.1wt％-2wt％水余量。在一些优选实施方案中，本专利技术所述的保存液，所述精液保护液中各成分含量如下：NaCl1wt％双氢链霉素0.25wt％水余量。本专利技术还提供了所述蜜蜂雄蜂精液的保存液的制备方法，分别称取葡萄糖、氯化钾、碳酸氢钠和柠檬酸钠，加水溶解后定容制得精液贮存液；将氯化钠、双氢链霉素按比例加入水中溶解后制成精液保护液。在一些实施方案中，所述制备方法还包括灭菌的步骤。具体为120℃高压灭菌15min。在一些具体实施例中，所述蜜蜂雄蜂精液的保存液中所述精液贮存液的制备方法为葡萄糖、氯化钾、碳酸氢钠和柠檬酸钠加水溶解后定容，120℃高压灭菌15min，冷却后置于2-5℃备用。在一些具体实施例中，所述蜜蜂雄蜂精液的保存液中所述精液保护液的制备方法为按浓度配制氯化钠溶液，120℃高压灭菌15min，然后加入双氢链霉素至终浓度，120℃高压灭菌15min。本领域技术人员可以理解，本专利技术所述蜜蜂雄蜂精液的保存液中的水优选为超纯水。本专利技术所述蜜蜂雄蜂精液的保存液中精液贮存液和精液保护液优选现用现配。本专利技术还提供了一种蜜蜂精液的保存方法，将雄蜂精液与精液贮存液混合后置于密闭的容器中，然后置于含有精液保护液的保存容器中封闭保存。在一些实施方案中，本专利技术所述的保存方法，所述雄蜂精液与精液贮存液的混合的体积比约为1:3-1:3.5。本领域技术人员可以理解本专利技术所述的保存方法中所使用的保存容器可以为任意一种可以用来保存蜜蜂精液的容器。如0.2mL保存管，0.5mL冻存管等均可。在一些实施方案中，本专利技术所述的保存方法，所述保存为28-32℃保存27天-68天或低温保存35周以内。28-32℃常温保存，便于运输。而低温保存，保存时间更长，精液中精子成活率和人工授精的成功率更高。在一些实施方案中，本专利技术所述的保存方法，所述低温保存的具体方法为将封闭的保存容器在5℃平衡1.5h-2h；然后将保存容器按照3℃/min降温的速度，从5℃降温至-6℃；之后将保存容器放置在离液氮液上方2cm-3cm处快速降温，降温速率是-140℃/min，最后于液氮中冷冻保存中。在低温保存后精液在使用前需要对低温保存的精液进行解冻。具体的解冻方法为将低温冷冻的保存容器从液氮中迅速取出后，投入36℃-40℃水中30秒。对蜜蜂精液进行保存需要先采集雄蜂精液。在一些具体实施例中，所述雄蜂精液的采集的具体操作为先将进样器针头吸入少许生理液和气泡，然后右手操纵进样器，使针头与精液接触后稍微拉开点距离，但二者并不断开，借助于精液本身的粘滞性把覆盖在白色粘液上的土黄色精液较完全地抽吸进针头，然后继续采集其它雄蜂的精液，待进样器针头内贮满所需精液量后，用生理液封闭针头。所述生理液的配方为每100ml缓冲液中含有NaCl0.5g-2g，KCl0.01g-0.05g，CaCl20.01g-0.05g，葡萄糖0.2g-0.6g，余量为水。其中，值得注意的是，在采集雄蜂时精液每2只雄蜂的精液间应避免出现气泡。本领域技术人员可以理解，本专利技术所述雄蜂精液采用强迫性成熟的雄蜂排精获得。通常雄蜂出房12天后，即达性成熟，便可捕捉采精。性成熟雄蜂的捕捉方法包括：利用颜色标记雄蜂日龄法、巢内直接选择性成熟雄蜂法、巢门捕捉婚飞雄蜂法和捕捉幽闭饲养雄蜂法等。目前用于雄蜂精液的采集的雄蜂的标准要求雄蜂种纯、个大、健壮、活跃和性成熟。而所述强迫雄蜂排精的具体方法为：用左手拇指和食指从腹面捉住胸、腹部两侧，用右手拇指按压雄蜂的腹部背板1节～3节处，然后三指配合，同时向腹部尾端施加压力，强迫“阴茎”外翻并射精。在强迫本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种蜜蜂雄蜂精液的保存液，包括精液贮存液和精液保护液；所述精液贮存液包括葡萄糖、氯化钾、碳酸氢钠、柠檬酸钠和水；所述精液保护液包括氯化钠、双氢链霉素和水。

【技术特征摘要】
1.一种蜜蜂雄蜂精液的保存液，由精液贮存液和精液保护液组成；所述精液贮存液由葡萄糖、氯化钾、碳酸氢钠、柠檬酸钠和水组成；所述精液保护液由氯化钠、双氢链霉素和水组成；每100ml精液贮存液中含有：所述精液保护液中各成分含量如下：NaCl1wt％-3wt％双氢链霉素0.1wt％-2wt％水余量。2.根据权利要求1所述的保存液，每100ml精液贮存液中含有：3.根据权利要求1所述的保存液，所述精液保护液中各成分含量如下：NaCl1wt％双氢链霉素0.25wt％水余量。4.权利要求1-3任意一项所述精液的保存液的制备方法，分别称取葡萄糖、氯化钾、碳酸氢钠和柠檬酸钠，加水溶解后定容制得精液贮存液；将氯化钠、双氢链霉素按比例加入水中溶解后...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘之光，石巍，郭海坤，陈超，陈晓，王慧华，
申请(专利权)人：中国农业科学院蜜蜂研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11