选择苦瓜苗期耐冷性鉴定取材时期的方法技术

本发明专利技术公开了一种选择苦瓜苗期耐冷性鉴定取材时期的方法，利用已鉴定具有耐冷性差异的材料进行低温胁迫处理，取不同胁迫时期的功能叶进行生理生化指标的测定，分析数据处理结果，结合已知供试材料的耐冷性，确定利用生理生化指标法进行苦瓜苗期耐冷性鉴定的适宜取材时期。该法利用低温胁迫适宜时期的鉴定指标进行苦瓜耐冷性鉴定与评价，提高了鉴定与评价的可靠性和准确性，结果适用于不同苦瓜资源的苗期耐冷性鉴定，为苦瓜耐冷育种奠定基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于苦瓜种质资源鉴定与评价
，尤其设及一种选择苦瓜苗期耐冷 性鉴定取材时期的方法。
技术介绍
苦瓜（MomordicacharantiaL.)起源于东南亚的热带地区，广泛分布于热带、亚 热带及溫带地区，喜高溫，属于冷敏性蔬菜，气溫低于l〇°C生长发育不良，尤其是在春提早 栽培中，苗期遇低溫冷害天气，往往生长缓慢，胁迫时间长了还会形成僵苗，停止生长，限制 了苦瓜的种植范围和上市时节，制约苦瓜产业的发展。 进行苦瓜耐冷育种，首要是对育种资源进行耐冷性鉴定与评价。在苗期进行耐冷 性鉴定与评价时多采用生理生化指标法，由于不同育种资源对低溫冷害胁迫有不同的反应 机制，耐冷性强的资源，在冷胁迫开始时，冷害对细胞的损害轻，其生理生化指标变化不大； 相反，耐冷性弱的资源在胁迫开始时细胞就受损严重，反映在生理生化指标变化大。如利用 此时的生理生化指标进行资源耐冷性鉴定与评价，就会降低鉴定的准确性和可靠性。因此， 有必要确定苦瓜苗期耐冷性鉴定的适宜取材时期，然后测定相关指标进行耐冷性鉴定与评 价，W提高鉴定与评价的准确性和可靠性。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种， 该法能提高鉴定的准确性、可靠性，适用于不同苦瓜资源的苗期耐冷性鉴定，为苦瓜耐冷育 种奠定了基础。 阳〇化]为解决上述技术问题，本专利技术采用W下技术方案：选择苦瓜苗期耐冷性鉴定取材 时期的方法，利用已鉴定具有耐冷性差异的材料进行低溫胁迫处理，取不同胁迫时期的功 能叶进行生理生化指标的测定，分析数据处理结果，结合已知供试材料的耐冷性，确定利用 生理生化指标法进行苦瓜苗期耐冷性鉴定的适宜取材时期。 低溫胁迫处理是在10°C条件下对4叶1屯、苦瓜幼苗进行胁迫处理。 不同胁迫时期是低溫胁迫M、2d、如、6d、8tl0d。 生理生化指标包括可溶性蛋白质含量、脯氨酸含量、丙二醒含量、超氧化物歧化酶 活性、过氧化物酶活性。 上述，包括W下步骤： (1)培育幼苗； (2)低溫胁迫下生理生化指标的测定；[001引 做数据处理； (4)适宜取材时期的选择。 步骤（1)按W下操作进行：将种子用清水浸泡6~化后冲洗干净，用干净湿润纱 布包好置于30°C条件下恒溫催芽，按同一穴盘不同材料间隔方式点于穴盘中，按正常进行 苗期管理。 步骤（2)按W下操作进行：将4叶1屯、的苗放入10°C条件下进行冷胁迫处理，分 别于处理0d、2t4d、M、8d、10d取苦瓜功能叶，剪碎混均后进行可溶性蛋白质含量、脯氨酸 含量、丙二醒含量、超氧化物歧化酶活性、过氧化物酶活性生理生化指标的测定。 ①测定可溶性蛋白质含量采用考马斯亮蓝G-250染色法； ②测定脯氨酸含量采用酸性巧=酬法； ③测定丙二醒含量采用硫代己比妥酸法； ④测定超氧化物歧化酶活性采用氮蓝四挫还原法； ⑥测定过氧化物酶活性采用愈创木酪法。 步骤（3)按W下操作进行：利用数据点折线图、综合隶属函数值、相关性分析方法 对数据进行处理。 步骤（4)按W下操作进行：根据数据点折线图、综合隶属函数值、相关性分析方法 数据处理结果结合已知供试材料的耐性，确定利用生理生化指标法进行苦瓜苗期耐冷性鉴 定的适宜取材时期。 针对目前苦瓜苗期耐冷性鉴定取材时期存在的问题，专利技术人建立了一种选择苦瓜 苗期耐冷性鉴定取材时期的方法，利用已鉴定具有耐冷性差异的材料进行低溫胁迫处理， 取不同胁迫时期的功能叶进行生理生化指标的测定，分析数据处理结果，结合已知供试材 料的耐冷性，确定利用生理生化指标法进行苦瓜苗期耐冷性鉴定的适宜取材时期。该法利 用低溫胁迫适宜时期的鉴定指标进行苦瓜耐冷性鉴定与评价，提高了鉴定与评价的可靠性 和准确性，结果适用于不同苦瓜资源的苗期耐冷性鉴定，为苦瓜耐冷育种奠定基础。【附图说明】 图1低溫胁迫下苦瓜可溶性蛋白质含量指标的变化图。图2低溫胁迫下苦瓜脯氨酸含量指标的变化图。 图3低溫胁迫下苦瓜丙二醒含量指标的变化图。 图4低溫胁迫下苦瓜超氧化物歧化酶活性指标的变化图。 图5低溫胁迫下苦瓜过氧化物酶活性指标的变化图。【具体实施方式】 实施例 1.供试材料 选用已鉴定的耐冷材料MC108、中间材料MC45和冷敏材料MC6,由广西农业科学院 蔬菜研究所提供。 2.试验方法及结果 阳〇3引 （1)培育幼苗 将种子用清水浸泡6~化后冲洗干净，用干净湿润纱布包好置于30°C条件下恒溫 催芽，按同一穴盘不同材料间隔方式点于穴盘中，按正常进行苗期管理。 似低溫胁迫下生理生化指标的测定 将4叶1屯、的苗放入10°C条件下进行冷胁迫处理，分别于处理0d、2t4d、M、8d、 lOd取苦瓜功能叶，剪碎混均后进行可溶性蛋白质含量、脯氨酸含量、丙二醒含量、超氧化物 歧化酶活性、过氧化物酶活性等生理生化指标的测定。实验设计为每处理3次重复，每重复 15株，每处理共45株苗，6个处理共270株苗。 生理生化指标的测定方法为： ①测定可溶性蛋白质含量采用考马斯亮蓝G-250染色法； ②测定脯氨酸（Pro)含量采用酸性巧=酬法； ③测定丙二醒（MDA)含量采用硫代己比妥酸灯BA)法； ④测定超氧化物歧化酶（SOD)活性采用氮蓝四挫（NBT)还原法； ⑥测定过氧化物酶（POD)活性采用愈创木酪法。[00创 做数据处理 3. 1数据点折线图处理用Excel完成。 W45] 低溫胁迫下生理生化指标变化如图1至5,在低溫胁迫下，耐冷性不同的材料，其 生理生化指标的变化趋势不完全一致，说明耐冷性不同苦瓜资源对冷害胁迫有不同的反应 当前第1页1 2 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种选择苦瓜苗期耐冷性鉴定取材时期的方法，其特征在于：利用已鉴定具有耐冷性差异的材料进行低温胁迫处理，取不同胁迫时期的功能叶进行生理生化指标的测定，分析数据处理结果，结合已知供试材料的耐冷性，确定利用生理生化指标法进行苦瓜苗期耐冷性鉴定的适宜取材时期。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈小凤，黄如葵，陈振东，黄玉辉，梁家作，黄熊娟，冯诚诚，刘杏连，秦健，
申请(专利权)人：广西壮族自治区农业科学院蔬菜研究所，
类型：发明
国别省市：广西;45