本发明专利技术提出了连翘叶中连翘酯苷A的提取纯化工艺方法，在纯化前尽可能去除连翘酯苷A提取物中的脂溶性色素和水溶性杂质，减轻后续纯化连翘酯苷A的难度，最终产品连翘酯苷A的色度好、纯度达到95-99%、提取率达到3.5-5.5%。其技术方案为：（1）提取；（2）萃取：将步骤（1）得到的浓缩物加水溶解，得提取液；然后，调pH值至6，加入石油醚萃取除去脂溶性色素；然后，用水饱和正丁醇萃取除去大部分水溶性杂质；其中，按体积比水饱和正丁醇的用量为提取液的0.5-2倍；萃取次数为2-4次，回收正丁醇，得连翘酯苷A萃取物；（3）色谱柱精制（上200-300目硅胶柱），得粗结晶物；（4）重结晶，得成品。本发明专利技术的主要创新在于步骤（2）萃取。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及连翘叶中连翘酯苷A的提取纯化工艺方法。
技术介绍
目前，对连翘酯苷A的提取及纯化方法都有报道。现有技术中，通过用有机溶剂提取，再上硅胶柱或柱层析法纯化得到连翘酯苷A，例如公开号为CN101215302A的专利技术专利就公开了一种连翘酯苷A制备方法，就是利用有机溶剂提取，再用柱层析纯化(精制)得到连翘酯苷A ;这种方法虽然达到了提取、纯化(精制)连翘酯苷A的目的，但是用有机溶剂提取后，直接把提取液进行柱层析，提取液中还含有脂溶性色素、水溶性杂质，不但加大了后续柱层析的难度和时间，最终获得的连翘酯苷A中的杂质多，并且连翘酯苷A的色度不好。
技术实现思路
本专利技术提出连翘叶中连翘酯苷A的提取纯化工艺方法，通过具体工艺步骤，在纯化前尽可能去除连翘酯苷A提取物中的脂溶性色素和水溶性杂质，减轻后续纯化连翘酯苷A的难度，最终产品连翘酯苷A的色度好、纯度达到95-99%、提取率达到3.5-5.5%。为达到目的，本专利技术采用的技术方案如下:连翘叶中连翘酯苷A的提取纯化工艺方法，具体步骤如下: (O提取:取干燥连翘叶，粉碎至50-70目，得连翘粉，以连翘粉的质量为依据加入11-20倍的50?80%乙醇，每次提取60-120分钟，加热回流提取三次，将三次所得提取液合并、过滤，滤液600C下浓缩至无醇味； (2)萃取:将步骤(I)得到的浓缩物加水溶解，得提取液；然后，调pH值至6，加入石油醚萃取除去脂溶性色素；然后，用水饱和正丁醇萃取除去大部分水溶性杂质；其中，按体积比水饱和正丁醇的用量为提取液的0.5-2倍；萃取次数为2-4次，回收正丁醇，得连翘酯苷A萃取物； (3)色谱柱精制:连翘酯苷A萃取物干法上200-300目硅胶柱，用乙酸乙酯与甲醇的混合液洗脱，其中乙酸乙酯与甲醇的体积比7: 1，收集洗脱液，浓缩至干，得粗结晶物； (4)重结晶:将得到的粗结晶物用无水乙醇溶解，稍微加热，待全部溶解后冷却，然后放置冰箱中在1-6°C温度下重结晶，12小时后，减压抽滤，得到连翘酯苷A晶体；然后，重复上述重结晶步骤2_3次；最后干燥，得成品。有益效果:本专利技术在色谱柱精制纯化前，增加了去脂溶性色素及水溶性杂质的萃取步骤，减轻了后续精制纯化连翘酯苷A的难度，连翘酯苷A的纯化是通过色谱柱精制、重结晶的步骤达到的，从而提高提出率、提高连翘酯苷A的纯度，提取纯化后的连翘酯苷A纯度达到95-99%、提取率达到3.5-5.5%。【具体实施方式】实施例1:取50g干燥连翘叶，加入0.8Kg的80%乙醇水溶液，加热回流提取三次，每次90分钟，将三次所得提取液合并、过滤，滤液在60°C下浓缩至无醇味；将浓缩物加一定量水溶解，得提取液；然后，调PH值至6，用石油醚萃取除去脂溶性色素，再用饱和正丁醇萃取除去大部分水溶性杂质，按体积比萃取溶剂的用量为提取液的I倍，萃取3次，回收正丁醇，得连翘酯苷A萃取物；将连翘酯苷A萃取物干法上200-300目硅胶柱，用乙酸乙酯与甲醇的混合液洗脱，其中乙酸乙酯与甲醇的体积比7: 1，收集洗脱液；薄层层析检测(按体积比，展开剂为二氯甲烷:甲醇:甲酸=10:2:0.02),浓缩至干，得粗结晶物(连翘酯苷A粗品);将得到的粗结晶物用无水乙醇溶解(稍微加热，加热温度30-45°C )，待全部溶解后，放置冰箱中在1-6°C温度下重结晶，12小时后，减压抽滤(重复2次)，得到连翘酯苷A晶体2.35g。利用HPLC (蛋白质检测与分析)测定连翘酯苷A的含量，连翘酯苷A的纯度为96.5%，提取率(收率)为3.8%。以上，实施例1只是对本专利技术的进一步说明，本专利技术专利申请不受到实施例1的限制，只要在本说明书
技术实现思路
部分限定的技术方案，都应落入本专利技术专利申请的保护范围。【主权项】1.连翘叶中连翘酯苷A的提取纯化工艺方法，具体步骤如下: (O提取:取干燥连翘叶，粉碎至50-70目，得连翘粉，以连翘粉的质量为依据加入11-20倍的50?80%乙醇，每次提取60-120分钟，加热回流提取三次，将三次所得提取液合并、过滤，滤液600C下浓缩至无醇味； (2)萃取:将步骤(I)得到的浓缩物加水溶解，得提取液；然后，调pH值至6，用石油醚萃取除去脂溶性色素；然后，用水饱和正丁醇萃取除去大部分水溶性杂质，水饱和正丁醇的用量为提取液的0.5-2倍；萃取次数为2-4次，回收正丁醇，得连翘酯苷A萃取物； (3)色谱柱精制:连翘酯苷A萃取物干法上200-300目硅胶柱，用乙酸乙酯与甲醇的混合液洗脱，其中乙酸乙酯与甲醇的体积比7: 1，收集洗脱液，浓缩至干，得粗结晶物； (4)重结晶:将得到的粗结晶物用无水乙醇溶解，稍微加热，待全部溶解后冷却，然后放置冰箱中在1-6°C温度下重结晶，12小时后，减压抽滤，得到连翘酯苷A晶体；然后，重复上述重结晶步骤2_3次；最后干燥，得成品D【专利摘要】本专利技术提出了连翘叶中连翘酯苷A的提取纯化工艺方法，在纯化前尽可能去除连翘酯苷A提取物中的脂溶性色素和水溶性杂质，减轻后续纯化连翘酯苷A的难度，最终产品连翘酯苷A的色度好、纯度达到95-99%、提取率达到3.5-5.5%。其技术方案为：（1）提取；（2）萃取：将步骤（1）得到的浓缩物加水溶解，得提取液；然后，调pH值至6，加入石油醚萃取除去脂溶性色素；然后，用水饱和正丁醇萃取除去大部分水溶性杂质；其中，按体积比水饱和正丁醇的用量为提取液的0.5-2倍；萃取次数为2-4次，回收正丁醇，得连翘酯苷A萃取物；（3）色谱柱精制（上200-300目硅胶柱），得粗结晶物；（4）重结晶，得成品。本专利技术的主要创新在于步骤（2）萃取。【IPC分类】C07H15/18, C07H1/08【公开号】CN105085587【申请号】CN201510473247【专利技术人】曹克红, 杨光义 【申请人】湖北济世药业有限责任公司, 十堰市太和医院【公开日】2015年11月25日【申请日】2015年8月5日本文档来自技高网...
【技术保护点】
连翘叶中连翘酯苷A的提取纯化工艺方法，具体步骤如下：（1）提取：取干燥连翘叶，粉碎至50‑70目，得连翘粉，以连翘粉的质量为依据加入11‑20倍的50～80% 乙醇，每次提取60‑120分钟，加热回流提取三次，将三次所得提取液合并、过滤，滤液60℃下浓缩至无醇味；（2）萃取：将步骤（1）得到的浓缩物加水溶解，得提取液；然后，调pH值至6，用石油醚萃取除去脂溶性色素；然后，用水饱和正丁醇萃取除去大部分水溶性杂质，水饱和正丁醇的用量为提取液的0.5‑2倍；萃取次数为2‑4次，回收正丁醇，得连翘酯苷A萃取物；（3）色谱柱精制：连翘酯苷A萃取物干法上200‑300目硅胶柱，用乙酸乙酯与甲醇的混合液洗脱，其中乙酸乙酯与甲醇的体积比7∶1，收集洗脱液，浓缩至干，得粗结晶物；（4）重结晶：将得到的粗结晶物用无水乙醇溶解，稍微加热，待全部溶解后冷却，然后放置冰箱中在1‑6℃温度下重结晶，12小时后，减压抽滤，得到连翘酯苷A晶体；然后，重复上述重结晶步骤2‑3次；最后干燥，得成品。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：曹克红，杨光义，
申请(专利权)人：湖北济世药业有限责任公司，十堰市太和医院，
类型：发明
国别省市：湖北;42
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