本发明专利技术公开了一种利用中药特征图谱区别道地药材黄山贡菊与伪品七月菊的方法，包括对照品溶液的制备、供试品溶液的制备、方法学考察等步骤。本发明专利技术通过正相高效液相色谱技术建立了贡菊与七月菊色谱指纹图谱，该方法能使菊花SFC提取的极性较小的化学成分得到较好的分离，具有很好的稳定性、重现性。本发明专利技术方法高效，结果客观，精密可靠，能够弥补外观鉴别方法不够客观的缺陷，从内在质量上区别二者，避免了感官判断的主观性，为黄山贡菊的道地性提供了一定的理论依据，利于保护道地药材黄山贡菊品质，适应国家对道地药材发展的要求。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及利用中药特征图谱作为区别道地药材黄山贡菊与伪品七月菊，尤其是 道地药材黄山贡菊与伪品七月菊的鉴别除伪方法，初步建立了贡菊、七月菊及两种菊花间 指纹图谱的共有模式，以及主要峰相对保留时间和相对峰面积的RSD范围，为黄山贡菊的 道地性提供了一定的理论依据。
技术介绍
贡菊为菊科植物菊Chrysanthemum morifolium Ramat?的干燥头状花序，10~11 月花盛开时分批采收，阴干或烘干，主产于黄山歙县地区，目前均为栽培品。同样主产于歙 县的七月菊为黄山贡菊的变异品种，花期较长，7月至9月底均能采摘，因其形似黄山贡菊 而花期较早，产量较大，在市场中常做为黄山贡菊的混淆品。单靠外观经验鉴别不易鉴别出 干燥的黄山贡菊和七月菊，目前七月菊常被干燥后混于黄山贡菊中，以次充好，而干燥后的 七月菊与黄山贡菊较为相似，外观上不易鉴别。中药材由于受到品种、采收时间、贮存、炮制 工艺等因素的制约，加上产地较多，规格等级复杂，各地方标准对同种药材炮制加工工艺也 不一致，因此在功效、作用上存在一定的差异性。故仅凭单一指标性成分很难全面客观的反 映中药材的内在质量。目前，中药特征图谱作为中药这一复杂样品体系质量控制的技术手 段，已在国内外获得了广泛认可并发展迅速。其诞生于生产实践，具有实用性和通用性，是 全面反映中药材内在质量的强有力的技术手段。本专利通过对不同产地、加工方法来源的 贡菊、七月菊药材进行色谱图分析比较，确立它们的共有峰，从而为道地药材黄山贡菊的质 量评价体系研究提供科学的实验依据，从内在质量上来鉴别七月菊与黄山贡菊。【专利技术内容】 本专利技术的目的在于提供一种利用中药特征图谱区别道地药材黄山贡菊与伪品七 月菊的方法，本专利技术方法高效，结果客观，精密可靠，能够弥补外观鉴别方法不够客观的缺 陷，从内在质量上区别二者，避免了感官判断的主观性，为黄山贡菊的道地性提供了一定的 理论依据，利于保护道地药材黄山贡菊品质，适应国家对道地药材发展的要求。 为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案： -种利用中药特征图谱区别道地药材黄山贡菊与伪品七月菊的方法，包括以下步 骤： (1)对照品溶液的制备 精密称取维生素A对照品10. 44mg，置10ml棕色量瓶中，加正己烷溶解并稀释至刻 度，摇匀，作为储备液；精密量取lml置50ml棕色量瓶中，加正己烷稀释至刻度，摇匀，作为 对照品溶液； ⑵供试品溶液的制备 称取贡菊、七月菊样品各5g，用C02超临界萃取仪萃取1小时，提取液用旋蒸仪旋 干，用正己烷定容至10ml，0. 45 y m滤膜滤过，取续滤液进行分析。整个过程避光操作； ⑶方法学考察 在HPLC-UV色谱图中，选择维生素A为参照峰，各成分峰相对于维生素A的峰面积 之比（RPA)，可按下列公式计算： RPA = Ai/Ar 其中Ai =特征峰峰面积； Ar =指标成分峰峰面积（维生素A); 样品中特征峰的相对保留时间（RRT)可按下列公式计算： RRT = RTi/RTr 其中RTi=特征峰保留时间； RTr =指标成分峰保留时间（维生素A); ①精密度试验 精密吸取贡菊供试品溶液10ul，按色谱条件，连续进样6针，以维生素A作为参照 峰，指定其a值为1.000,考察仪器的精密度。 ②稳定性试验 精密吸取同一贡菊供试品溶液10 y L，按色谱条件，分别在0h、2h、4h、8h、12h、24h 进样检测，以维生素A (峰1)作为参照峰，指定其a值为1. 000,考察贡菊供试品溶液的稳 定性。 ③重复性试验 取同一贡菊药材样品6份，每份称取贡菊样品5g，用C02超临界萃取仪（超临界 条件：温度：35°C ;压力：250bar ;夹带剂：无水乙醇；比例：10% ;分离压lObar ;旋蒸仪条 件：温度：45°C，压力：120pa。）萃取1小时，提取液用旋蒸仪旋干，用正己烷定容至10ml， 0. 45 ym滤膜滤过，取续滤液进行分析。整个过程避光操作。进行6次独立的供试液溶液的 制备，按色谱条件进行测定，以维生素A (峰1)作为参照峰，指定其a值为1. 000,考察方法 的重复性。 步骤⑵中所述超临界条件：温度35°C，压力250bar，夹带剂无水乙醇，比例 1〇%，分离压1(^31' ;所述旋蒸仪条件：温度45<€，压力120口3。 步骤（3)精密度试验、稳定性试验和重复性试验中所述色谱条件为：色谱柱： Phenomenex Luna silica(2) (250X4. 6mm，5 ym);流动相：正己烧（A)和异丙醇（B) (99. 7 : 〇.3v/v)，柱温30°C，进样体积为20yL，检测器为二极管阵列检测器（DAD)或紫外检测器 (UV)，检测波长为325nm，流速：1.0ml/min，洗脱时间为45分钟。 本专利技术通过正相高效液相色谱技术建立了贡菊与七月菊色谱指纹图谱，该方法能 使菊花SFC提取的极性较小的化学成分得到较好的分离，具有很好的稳定性、重现性，同时 进行了这两种菊花之间的比较，通过实验发现： (1)菊花样品组内相似性极高，说明同一品种菊花群体特征具有一致性；而组间 相似度低于〇. 8,说明不同品种菊花种属间存在一定的差异； (2)不同品种菊花药材极性小化学成分种类上稍有差别，其中贡菊在7. 7min及 14. 5min有两个特征峰，而七月菊在39. 5min左右时有一个特征峰，但主要成分含量上差 异较大。据调查分析可能与生长环境、采摘时间、品种、加工方法以及储存方法等有相关联 系； (3)根据已知信息及分析结果相结合，初步建立了贡菊、七月菊及两种菊花间指纹 图谱的共有模式，以及主要峰相对保留时间和相对峰面积的RSD范围，为黄山贡菊的道地 性提供了一定的理论依据。 本专利技术方法高效，结果客观，精密可靠，能够弥补外观鉴别方法不够客观的缺陷， 从内在质量上区别二者，避免了感官判断的主观性，为黄山贡菊的道地性提供了一定的理 论依据，利于保护道地药材黄山贡菊品质，适应国家对道地药材发展的要求。【附图说明】 图1为8批贡菊药材特征图谱及其共有模式； 图2为8批七月菊药材特征图谱及其共有模式； 图3为8批贡菊与8批七月菊药材特征图谱及其共有模式。【具体实施方式】 1、实验仪器、试剂与材料 仪器：Thar C02超临界萃取仪（德祥科技有限公司），Laborta 4001 efficien 旋转蒸发仪（德国Heidolph公司），All分析研磨机（IKA公司），电子分析天平（BS210S 德国，Sartorius)，高效液相色谱仪（LC-20AD型，日本岛津）。材料：Phenomenex Luna silica (2) (250X4. 6mm，5 y )、8批贡菊、8批七月菊药材样品、维生素A对照品（中检院，供 含量测定用，批号：100368-201301。lg含维生素A醋酸酯343mg其中含反式维生素A醋酸 酯96. 9% )。无水乙醇为分析纯，水为超纯水；正己烧、异丙醇为色谱纯。 2、色谱条件 采用日本岛津LC-20AD高效液相色谱仪，色谱柱：Phenomenex Luna silica (2) (250X4. 6mm，5ym);流动相：正己烷⑷和异丙醇⑶（99. 7 :0. 3本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种利用中药特征图谱区别道地药材黄山贡菊与伪品七月菊的方法，其特征在于包括以下步骤： （1）对照品溶液的制备 精密称取维生素A对照品10.44mg，置10ml棕色量瓶中，加正己烷溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液；精密量取1ml置50ml棕色量瓶中，加正己烷稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液； （2）供试品溶液的制备 称取贡菊、七月菊样品各5g，用CO2超临界萃取仪萃取1小时，提取液用旋蒸仪旋干，用正己烷定容至10ml，0.45μm滤膜滤过，取续滤液进行分析；整个过程避光操作； （3）方法学考察 在 HPLC‑UV 色谱图中，选择维生素A为参照峰，各成分峰相对于维生素A的峰面积之比(RPA)，可按下列公式计算：RPA=Ai/Ar 其中 Ai=特征峰峰面积； Ar=指标成分峰峰面积 (维生素A)； 样品中特征峰的相对保留时间(RRT)可按下列公式计算:RRT=RTi/RTr其中 RTi= 特征峰保留时间；RTr= 指标成分峰保留时间 (维生素A)； ①精密度试验 精密吸取贡菊供试品溶液10ul，按色谱条件，连续进样6 针，以维生素A作为参照峰，指定其α值为 1.000，考察仪器的精密度； ②稳定性试验精密吸取同一贡菊供试品溶液10μL，按色谱条件，分别在 0h、2h、 4h、 8h、 12h、 24h 进样检测， 以维生素A(峰 1)作为参照峰， 指定其α值为 1.000，考察贡菊供试品溶液的稳定性； ③重复性试验取同一贡菊药材样品 6 份，每份称取贡菊样品5g，用CO2超临界萃取仪（超临界条件：温度：35℃；压力：250bar；夹带剂：无水乙醇；比例：10%；分离压10bar；旋蒸仪条件：温度：45℃，压力：120pa）萃取1小时，提取液用旋蒸仪旋干，用正己烷定容至10ml，0.45μm滤膜滤过，取续滤液进行分析；整个过程避光操作；进行 6 次独立的供试液溶液的制备，按色谱条件进行测定，以维生素A(峰 1)作为参照峰，指定其α值为 1.000， 考察方法的重复性。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：蔡亚禄，张亚中，金传山，
申请(专利权)人：合肥伟海讴斯医药科技有限公司，蔡亚禄，
类型：发明
国别省市：安徽;34
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。