黄瓜籽蛋白的制备方法及其作为治疗和预防血栓药物活性成分的应用。它涉及一种黄瓜籽蛋白的制备方法及其应用。本发明专利技术提供了一种黄瓜籽蛋白的制备方法及其作为治疗和预防血栓药物活性成分的应用。制备方法：一、石油醚脱脂；二、提取蛋白；三、分离纯化。本发明专利技术黄瓜籽蛋白同时兼具纤溶酶活性和抗凝血作用，能够作为治疗和预防血栓药物的活性成分使用。黄瓜籽蛋白来源于植物黄瓜，属于普通常规食物，因此对人体无毒副作用，而且不易产生过敏，作为抗栓药物具有安全性高的优点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术设及一种黄瓜巧蛋白的制备方法及其应用。
技术介绍
黄瓜巧为葫芦科植物黄瓜的干燥成熟种子，历代本草均有记载，并且疗效确切，具 有清肺润肠、续筋接骨，治疗骨折筋伤，抗骨质疏松等作用。目前研究多为黄瓜巧中脂肪酸、 植物酱醇、糖和巧类、挥发油类等化学成分的药效研究。未见黄瓜巧蛋白制备方法报道，更 无研究报道。
技术实现思路
本专利技术提供了一种黄瓜巧蛋白的制备方法及其作为治疗和预防血栓药物活性成 分的应用。 本专利技术黄瓜巧蛋白按W下步骤制备： 一、石油離脱脂；黄瓜巧粉碎，然后将黄瓜巧粉与石油離按料液比Ig: (3ml~5ml) 的比例混匀揽拌，〇°C~10°C低温浸提1化~1化，过滤，回收石油離，过滤剩余物自然惊干， 得到黄瓜巧脱脂粉； 二、将黄瓜巧脱脂粉与浓度为0.Imol/L~0. 2mol/L的氯化钢溶液按料液比为 Ig: (3ml~5ml)的比例揽拌混匀，置于4°C~10°C低温环境中浸提2次，每次6~lOh，合 并提取液，然后离屯、取上清液； =、采用硫酸锭分级沉淀法对步骤二获得的上清液进行蛋白沉淀，硫酸锭终级浓 度为55%，磁力揽拌时间为8~lOh，静置至沉淀物生成，然后于4°C、lOOOOr/min条件下离 屯、，离屯、沉淀物冷冻干燥即得黄瓜巧蛋白。[000引上述黄瓜巧蛋白作为治疗和预防血栓药物中的活性成分使用。 本专利技术黄瓜巧蛋白可能为多种蛋白质组合物，其具有纤溶酶活性，能够直接激活 纤溶酶原，启动纤溶过程，从而起到溶栓效果。 本专利技术黄瓜巧蛋白具有原材料价格低廉、产量大、适合大规模生产的特点。【具体实施方式】 本专利技术技术方案不局限于W下所列举【具体实施方式】，还包括各【具体实施方式】间的 任意组合。【具体实施方式】 一；本实施方式黄瓜巧蛋白按W下步骤制备： 一、石油離脱脂；黄瓜巧粉碎，然后将黄瓜巧粉与石油離按料液比Ig: (3ml~5ml) 的比例混匀揽拌，〇°C~10°C低温浸提1化~1化，过滤，回收石油離，过滤剩余物自然惊干， 得到黄瓜巧脱脂粉； 二、将黄瓜巧脱脂粉与浓度为0.Imol/L~0. 2mol/L的氯化钢溶液按料液比为 Ig: (3ml~5ml)的比例揽拌混匀，置于4°C~10°C低温环境中浸提2次，每次6~lOh，合 并提取液，然后离屯、取上清液；=、采用硫酸锭分级沉淀法对步骤二获得的上清液进行蛋白沉淀，硫酸锭终级浓 度为55%，磁力揽拌时间为8~lOh，静置至沉淀物生成，然后于4°C、lOOOOr/min条件下离 屯、，离屯、沉淀物冷冻干燥即得黄瓜巧蛋白。 本实施方式黄瓜巧蛋白具有溶栓和抗凝血的作用。【具体实施方式】 二；本实施方式与一的不同点是：步骤二中调节氯化 钢溶液的抑值为5~7 ;步骤二中离屯、转速为1500r/min。其它步骤及参数与实施方式一 相同。[001引 实施例1 黄瓜巧蛋白按W下步骤制备： 一、石油離脱脂；黄瓜巧粉碎，然后将黄瓜巧粉与石油離按料液比lg:3ml的比例 混匀揽拌，4°C低温浸提12化，过滤，回收石油離，过滤剩余物自然惊干，得到黄瓜巧脱脂 粉；[002U二、将黄瓜巧脱脂粉与浓度为0. 14mol/L、抑值为5的氯化钢溶液按料液比为Ig: 3ml的比例揽拌混匀，置于4°C低温环境中浸提2次，每次她，合并提取液，然后离屯、取上 清液，离屯、转速为1500r/min; =、采用硫酸锭分级沉淀法对步骤二获得的上清液进行蛋白沉淀，硫酸锭终级浓 度为55%，磁力揽拌时间为8~lOh，静置至沉淀物生成，然后于4°C、lOOOOr/min条件下离 屯、，离屯、沉淀物冷冻干燥即得黄瓜巧蛋白。 纤溶酶活性的测定： 采用琼脂糖-纤维蛋白平板法，W尿激酶为标准物质，对本实施例得到的黄瓜巧 蛋白进行纤溶酶活性测定，实验结果如表1所示。（琼脂糖-纤维蛋白平板法：用0. 9%的 生理盐水配制1%琼脂糖?、0.3%纤维蛋白原@和IBP凝血酶原@，501：水浴溶解，将①和② 混合后加入⑨，混匀铺于圆形培养皿中，冷却凝固后点样，点样量l〇yl，37°C培养1她，测 定溶酶圈直径。尿激酶标准曲线各样品浓度为10,20,40,60,80^/血。根据尿激酶标准曲 线计算样品的酶活。）表1 通过实验测得本实施例黄瓜巧蛋白纤溶酶活性达到2188. 94IU/g，具有较高的纤 溶活性。[002引抗凝血实验； 采用断尾法进行抗凝血实验。 抗凝血实验；实验动物采用清洁级小鼠，雄性，体重（23±2)g，常规喂养3周后随 机分为五组，每组8只，分别为正常对照组（每天灌胃水lOml/kg)、黄瓜巧蛋白高剂量组 (每天灌胃纤溶酶活50000IU/kg)、中剂量组（每天灌胃纤溶酶活25000IU/kg)、低剂量组 (每天灌胃纤溶酶活12500IU/kg)和蝴激酶阳性对照组（每天灌胃酶活25000IU/kg)，连 续灌胃14d后，末次给药比后利用剪刀将小鼠尾尖3cm(提前标记）处横断，待血液自行溢 出开始计时，每隔30s用滤纸吸去血滴一次，直至血液自然停止，W滤纸吸时无血为结束时 间，此时间即为体内出血时间，实验结果如表2所示。 表 2 实验证明本实施例黄瓜巧蛋白具有抗凝血作用。 本专利技术黄瓜巧蛋白同时兼具纤溶酶活性和抗凝血作用，能够作为治疗和预防血栓 药物的活性成分使用。黄瓜巧蛋白来源于植物黄瓜，属于普通常规食物，因此对人体无毒副 作用，而且不易产生过敏，作为抗栓药物具有安全性高的优点。【主权项】1. 黄瓜籽蛋白的制备方法，其特征在于黄瓜籽蛋白按以下步骤制备： 一、石油醚脱脂：黄瓜籽粉碎，然后将黄瓜籽粉与石油醚按料液比lg: (3ml~5ml)的比 例混匀搅拌，〇°C~KTC低温浸提12h~14h，过滤，回收石油醚，过滤剩余物自然晾干，得到 黄瓜籽脱脂粉； 二、 将黄瓜籽脱脂粉与浓度为0. lmol/L~0. 2mol/L的氯化钠溶液按料液比为 lg: (3ml~5ml)的比例搅拌混勾，置于4°C~10°C低温环境中浸提2次，每次6~10h，合 并提取液，然后离心取上清液； 三、 采用硫酸铵分级沉淀法对步骤二获得的上清液进行蛋白沉淀，硫酸铵终级浓度为 55%，磁力搅拌时间为8~10h，静置至沉淀物生成，然后于4°C、lOOOOr/min条件下离心，离 心沉淀物冷冻干燥即得黄瓜籽蛋白。2. 根据权利要求1所述的黄瓜籽蛋白的制备方法，其特征在于步骤二中调节氯化钠溶 液的PH值为5~7。3. 根据权利要求1所述的黄瓜籽蛋白的制备方法，其特征在于步骤二中离心转速为 1500r/min〇4. 黄瓜籽蛋白作为治疗和预防血栓药物活性成分的应用，其特征在于黄瓜籽蛋白作为 治疗和预防血栓药物中的活性成分使用。【专利摘要】。它涉及一种黄瓜籽蛋白的制备方法及其应用。本专利技术提供了一种。制备方法：一、石油醚脱脂；二、提取蛋白；三、分离纯化。本专利技术黄瓜籽蛋白同时兼具纤溶酶活性和抗凝血作用，能够作为治疗和预防血栓药物的活性成分使用。黄瓜籽蛋白来源于植物黄瓜，属于普通常规食物，因此对人体无毒副作用，而且不易产生过敏，作为抗栓药物具有安全性高的优点。【IPC分类】A61P7/02, A61K38/16, C07K14/415, C07K1/30【公开号】CN104987371【申请号】CN201510本文档来自技高网...
【技术保护点】
黄瓜籽蛋白的制备方法，其特征在于黄瓜籽蛋白按以下步骤制备：一、石油醚脱脂：黄瓜籽粉碎，然后将黄瓜籽粉与石油醚按料液比1g:(3ml～5ml)的比例混匀搅拌，0℃～10℃低温浸提12h～14h，过滤，回收石油醚，过滤剩余物自然晾干，得到黄瓜籽脱脂粉；二、将黄瓜籽脱脂粉与浓度为0.1mol/L～0.2mol/L的氯化钠溶液按料液比为1g:(3ml～5ml)的比例搅拌混匀，置于4℃～10℃低温环境中浸提2次，每次6～10h，合并提取液，然后离心取上清液；三、采用硫酸铵分级沉淀法对步骤二获得的上清液进行蛋白沉淀，硫酸铵终级浓度为55％，磁力搅拌时间为8～10h，静置至沉淀物生成，然后于4℃、10000r/min条件下离心，离心沉淀物冷冻干燥即得黄瓜籽蛋白。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王伟明，王萍，陈丽艳，孙银玲，
申请(专利权)人：黑龙江省中医药科学院，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23
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