一种由多聚甲醛固体试剂快速获得高效甲醛固定液的方法技术

本发明专利技术公开了一种由多聚甲醛固体试剂快速获得高效甲醛固定液的方法。将多聚甲醛固体和水混合密封在5ml冻存管中，放入超声清洗仪中进行超声辐射处理，再拿出摇晃，重复操作使其形成分散度较好的浊化液；再向多聚甲醛的水相分散液中加入NaOH溶液，密封并用力摇晃使其充分混匀；放入水浴锅中温浴，再拿出摇晃，重复操作；制得澄清透亮的甲醛溶液。本发明专利技术能够在短时间内制得固定效果良好的高效甲醛溶液，解决了在对一种重要的生物样本电镜处理固体试剂进行配制过程中，溶解困难、溶解损失、操作不便的问题，而且所配制量可大可小，灵活可调，更加适用于各种需要，为电镜研究提供了便利，具有重要实际意义和广泛应用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种获得甲醛固定液的方法，尤其是涉及。
技术介绍
甲醛固定液是一种渗透组织能力较强的快速固定液，对于临床取材及较致密组织的固定效果良好。由于其不能较好固定细胞基质，所以在电子显微镜学研宄中，常以较高浓度的甲醛溶液与25%戊二醛存储液按一定比例混合后使用。甲醛分子极易挥发，并且存放时易在溶液里发生聚合而使其固定效用降低。因此，在使用中人们往往倾向于选择其固体聚合物一一多聚甲醛，用时再将其解聚为具有化学活性的单体甲醛，现用现配，效果最好。然而，一直以来，在电子显微镜学研宄中，由多聚甲醛固体配制甲醛溶液是一件非常耗时耗力的事情，给科研工作带来了诸多不便。多聚甲醛是一种白色固体颗粒，以往，人们常根据热解聚和碱解聚多聚甲醛原理相结合的方法，采用加热型磁力搅拌器使多聚甲醛与水混溶达到悬浊液的状态，并且加热至65度，然后再滴加IM的氢氧化钠溶液使其最终形成澄清透明的溶液。然而在实际操作时，这样的方法存在很多弊端。首先，磁力搅拌器对于多聚甲醛这样的固体聚合物颗粒，很难形成分散度均匀良好的混合体系；在混合度不够均匀的条件下，要加速解聚，则需要加热更长的时间或滴加更多的碱液，从而易导致部分甲醛分子中的醛基在受热或偏碱环境条件下发生反应而变性，使最终得到的甲醛固定液效用降低。其次，对配置体系进行测温无疑增加了操作难度，因其挥发性、毒性，对人体及环境会有潜在危险，所以操作要在通风橱进行，而通风橱的强吸气流又会加剧多聚甲醛的挥发从而使其固定效能下降。因此，找到一种由多聚甲醛固体试剂快速方便制备甲醛溶液的方法是具有重要实际意义和广泛应用价值的。
技术实现思路
为了解决
技术介绍
中存在的问题，本专利技术提出了，能够在短时间内制得固定效果良好的高效甲醛溶液，而且所配制量可大可小，灵活可调，更加适用于各种需要，为电镜研宄提供了便利，具有重要实际意义和广泛应用价值。本专利技术采用的技术方案如下:I)按照需配制甲醛溶液的浓度及所需用量，称取多聚甲醛，量取超纯水，将两者混合、密封；将多聚甲醛固体和水混合密封在5ml冻存管中，多聚甲醛的质量体积浓度为0.05 ?0.lg/ml ；2)放入超声清洗仪中进行超声辐射处理，再拿出用力摇晃使其充分混匀，重复操作3?5次，使其形成分散度较好的浊化液；3)向多聚甲醛的水相分散液中加入浓度为IM的NaOH溶液，NaOH溶液与步骤I)中混合溶液的体积比为2:1000?5:1000，密封并用力摇晃使其充分混匀；4)放入水浴锅中温浴，再拿出用力摇晃使其充分混匀，重复操作2?4次；5)形成制得澄清透亮的甲醛溶液。优选地，所述的步骤4)之后再放入超声清洗仪中进行超声辐射处理，接着放入水浴锅中温浴，然后拿出用力摇晃使其充分混匀，重复操作I?2次，以得到澄清透亮的甲醛溶液。所述的超声福射处理的时间为5?10分钟。所述的水浴锅温度为50?60°C，温浴时间为5?lOmin。所述本专利技术方法用于配制10%以内的甲醛溶液。本专利技术基于热解聚和碱解聚多聚甲醛的原理，采用超声对多聚甲醛和水的混合体系进行密封辐射处理，使其在较短时间内形成分散度较为良好的分散体系，并在此基础上，对其进行相对以往更加微量地碱处理，同时进行相对于以往解聚温度更低的热处理，最终使其在较短时间内快速完全溶解。本专利技术通过对密封体系采取超声介入，加速了多聚甲醛固体在水相中的分散，降低了多聚甲醛的解聚温度及碱液用量，减少了溶质损失，能够在短时间内制得固定效果良好的高效甲醛溶液，而且所配制量可通过选择冻存管的体积、增加或减少冻存管的个数，灵活调节，更加适于工作需要，为电镜样品制备提供了很大便利。本专利技术具有以下有益效果:本专利技术解决了在对一种重要的生物样本电镜处理固体试剂进行配制过程中溶解困难、溶解损失、操作不便的问题。I)采用超声辐射，使多聚甲醛固体和水的密封体系在短时间内形成分散度较好的浊化液，从原来的数小时缩减为几十分钟。2)减少并量化了碱液用量，从原来的模糊添加几滴IM NaOH溶液量化为加入2:1000?5:10001M NaOH溶液，优化了单体甲醛保持活性的环境。3)将解聚温度从原来的65°C降低为50?60°C及对溶解体系密封处理，减少了溶质挥发及损失。4)整个溶解过程从原来的数小时缩减为I小时左右，加速了多聚甲醛的溶解，节省了工作时间。5)选择密封性好、体积适当且能使超声波空化效应较好发挥的5ml冻存管作为溶解器具，可通过增减冻存管数量，灵活掌握所配制溶液的体积。【附图说明】图1是用仅含有2.5%戊二醛的磷酸缓冲液作为前固定液处理灰飞虱触角所得的实施例透射电镜图。图2是用含有2.5%戊二醛和由本专利技术浓缩配制的甲醛溶液稀释所得的2%甲醛的磷酸缓冲液作为前固定液处理灰飞虱触角所得的实施例透射电镜图。【具体实施方式】下面结合具体实施例对本专利技术作进一步详细说明。本专利技术的实施例如下:具体实施例1:质量体积比0.05g/ml的甲醛溶液的配制，用分析天平称取0.25g多聚甲醛固体颗粒，放入5ml的冻存管中，加入5ml dd H2O,拧紧冻存管管盖。将冻存管插入水漂孔中，放入已加水至刻度线的超声清洗仪中，超声5min，拿出并用力摇晃几次，重复操作5次，形成具有一定分散度的多聚甲醛水相分散系。向该分散系中加入10 μ I的IM的NaOH溶液，用力摇晃使之混合均匀。将冻存管放入50°C水浴锅中温浴5min，拿出用力摇晃几次，重复操作4次。再依次超声5min，50°C水浴锅中温浴5min，重复操作2次。最终得到澄清透明的5%甲醛溶液。具体实施例2:质量体积比0.08g/ml的甲醛溶液的配制，用分析天平称取0.4g多聚甲醛固体颗粒，放入5ml的冻存管中，加入5ml dd H20，拧紧冻存管管盖。将冻存管插入水漂孔中，放入已加水至刻度线的超声清洗仪中，超声8min，拿出并用力摇晃几次，重复操作4次，形成具有一定分散度的多聚甲醛水相分散系。向该分散系中加入20 μ I的IM的NaOH溶液，用力摇晃使之混合均匀。将冻存管放入55°C水浴锅中温浴8min，拿出用力摇晃几次，重复操作3次。再依次超声8min，55°C水浴锅中温浴8min，仅操作I次。最终得到澄清透明的8%甲醛溶液。具体实施例3:质量体积比0.lg/ml的甲醛溶液的配制，用分析天平称取0.5g多聚甲醛固体颗粒，放入5ml的冻存管中，加入5ml dd H20，拧紧冻存管管盖。将冻存管插入水漂孔中，放入已加水至刻度线的超声清洗仪中，超声lOmin，拿出并用力摇晃几次，重复操作3次，形成具有一定分散度的多聚甲醛水相分散系。向该分散系中加入25 μ I的IM的NaOH溶液，用力摇晃使之混合均匀。将冻存管放入60°C水浴锅中温浴lOmin，拿出用力摇晃几次，重复操作2次。再依次超声10min，60°C水浴锅中温浴lOmin，仅操作I次。最终得到澄清透明的10%甲醛溶液。通过本专利技术方法获得的甲醛固定液是一种高效的电镜固定液，可以将浓缩配制的5 %、8 %或10 %的甲醛溶液与25 %的戊二醛存储液、磷酸缓冲液或甲次砷酸盐缓冲液按不同体积比例配合，最终可制得含有2.5%戊二醛与2%甲醛的电镜样品处理前固定液。并且通过本专利技术实施例得到固定液处理的样品再经前漂洗、后固定、后漂洗、脱水、浸透、包埋、聚合、切片、染色观察本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种由多聚甲醛固体试剂快速获得高效甲醛固定液的方法，其特征在于：1）将多聚甲醛固体和水混合密封在5ml冻存管中，多聚甲醛的质量体积浓度为0.05~0.1g/ml；2）放入超声清洗仪中进行超声辐射处理，再拿出摇晃，重复操作3~5次，使其形成浊化液；3）向多聚甲醛的水相分散液中加入浓度为1M的NaOH溶液，NaOH溶液与步骤1）中混合溶液的体积比为2:1000~5:1000，密封并用力摇晃使其充分混匀；4）放入水浴锅中温浴，再拿出摇晃，重复操作2~4次；5）制得澄清透明的甲醛溶液。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：付丙鲜，洪健，祝增荣，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33