基于LAMP实时荧光法的猪等孢球虫卵囊检测方法及其引物技术

本发明专利技术公开了一种基于LAMP实时荧光法的猪等孢球虫卵囊检测方法及其引物，根据猪等孢球虫18S rRNA设计了特异引物，结合荧光定量PCR仪，建立了猪等孢球虫的LAMP实时荧光检测技术。采用本发明专利技术方法，猪等孢球虫重组质粒的检测极限是2.74×102 拷贝/µL，换算成质粒DNA浓度为1fg/µL；提取特定个数卵囊的LAMP检测试验结果显示，LAMP的检测极限为5个卵囊的DNA。本发明专利技术LAMP实时荧光检测技术的建立为猪等孢球虫的分子检测提供了一种极具价值的检测方法，弥补了传统显微镜检测法的不足。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，具体涉及一种基于LAMP实时荧光法的猪等孢球虫卵 囊检测方法及其引物，是一种利用环介导等温扩增技术结合荧光定量PCR仪，进行粪便中 猪等孢球虫卵囊快速检测的方法。
技术介绍
猪球虫病主要是由寄生于空肠与回肠的猪等孢球虫（Isospora suis)引起，三周 龄以内的哺乳仔猪感染后可出现腹泻和体重下降等临床症状。母猪对猪球虫病的传播影响 不大，临床中很少检测到球虫卵囊，被猪等孢球虫卵囊污染的产房是一代仔猪传给下一代 仔猪的主要途径。猪场环境、临床用药、管理水平与猪球虫病显著相关，非特异性免疫系统 对抗球虫病有重要作用。在试验条件下，100%的相对湿度和25°C气温是等孢球虫卵囊发育 和存活的最佳条件。自然条件下，猪等孢球虫卵囊在体外完成孢子化过程，孢子化的卵囊具 有感染宿主的能力，常给养殖户的经济利益带来巨大的损害。近几年来，随着猪场规模的不 断扩大和养殖管理水平的不断提高，人们越来越重视对仔猪球虫病的预防和治疗。 常见的检测猪等孢球虫的方法是采用传统显微镜检测粪便中的卵囊，但是，由 于球虫个体微小，粪便中杂质较多，给检测带来一定的困难。除了本文档来自技高网...

【技术保护点】
检测猪等孢球虫卵囊的引物，其特征在于：所述引物如下：上游外引物F3：5'‑ATAGGATCAGGACCTCGTG‑3'；下游外引物B3：5'‑GGCATTCCTCGTTGAAGAT‑3'；上游内引物FIP(F1c‑F2)：5'‑CGTGCAGCCCAGAACATCTGTGTCTAACGCAAGGAAGT‑3'；下游内引物BIP(B1c‑B2)：5'‑ACACTGATGCATCCAACGAGTTTCACGATGCATACTCACAAG‑3'；上游环引物LoopF：5'‑TCACAGACCTGTTATTGCCTC‑3'；下游环引物LoopB：5'‑TGGCCGATAGGTCTAGGTAAT‑3'。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王寿昆，黄翠琴，温福利，岳良平，
申请(专利权)人：龙岩学院，福建农林大学，
类型：发明
国别省市：福建;35