一种淡黄色链霉菌发酵生产萨菲菌素的培养基和培养方法技术

本发明专利技术涉及一种淡黄色链霉菌发酵生产萨菲菌素的培养基和培养方法，利用本发明专利技术中提供的培养基配方和发酵控制工艺，能够提高萨菲菌素发酵单位，降低发酵成本，并且最大限度的降低原辅料来源不受环境影响，保证其供应充足，实现萨菲菌素稳定、高效的生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于发酵
，特别是涉及一种淡黄色链霉菌发酵生产萨菲菌素的新型培养基和培养方法。
技术介绍
萨菲菌素是由链霉菌产生的一种新型大环内酯类抗生素，是目前常用的免疫抑制剂。萨菲菌素主要是由5种组分组成，分别是A、B、C、D和E组分，萨菲菌素A是其中的关键组分，含量较高。目前，上市的免疫抑制药物存在一定的肾毒性和中枢毒性副作用，因此萨菲菌素作为新一代高效、低毒免疫抑制剂，具有较高的药物开发价值和市场前景。目前，国内萨菲菌素的发酵生产采用二级或三级发酵模式，该方式存在的主要问题有以下几点: I萨菲菌素发酵水平较低，其发酵水平维持在5?8mg/L。2发酵培养基含有葡萄糖和氨基酸，灭菌过程中以产生“美拉德反应”，即产生抑制菌体的有毒物质。3发酵培养基中加入了吸附树脂，增加了发酵和提取成本。4萨菲菌素发酵生产所需的原材料采购成本较高，特别是萨菲菌素培养基中常用的有机氮源酵母提取物市场价格较高，从而提高发酵成本，降低市场竞争力。5萨菲菌素发酵培养后期容易出现菌体自溶现象，降低了发酵效价。6发酵培养基中加入了氨基酸，发酵液容易变色，增加了提取纯化的难度。
技术实现思路
本专利技术的目的就在于克服上述现有技术的缺陷，提供一种发酵工艺简单，有效提高发酵单位，同时最大限度的降低原辅料对发酵单位的影响，降低生产成本，且原辅料来源不受环境影响，保证其供应充足，实现萨菲菌素稳定、高效生产的新型培养基。本专利技术的另一目的是提供利用上述培养基生产萨菲菌素的培养方法。为实现上述目的所采取的技术方案为: 一种淡黄色链霉菌发酵生产萨菲菌素的培养基，其特征在于包括种子培养基和发酵培养基，其中 所述种子培养基的组成为:花生油I?5ml/L、麦芽糖5?9g/L、麦芽糖酶0.001?0.005g/L、虫丘虫弓丨粉11?15g/L、玉米楽10?14ml/L、生物氮素5?9g/L、硝酸钱0.5?0.9g/L、轻质碳酸妈I?5g/L ;磷酸二氢钾0.1?0.5g/L ；所述发酵培养基的组成为:花生油10?14ml/L、麦芽糖15?19g/L、麦芽糖酶0.003?0.007g/L、蚯蚓粉20?24g/L、玉米浆17?21ml/L、生物氮素12?16g/L、硫酸铵0.5?0.9g/L、轻质碳酸1? 3?7g/L、磷酸二氢钾0.5?0.9g/L、氯化钾0.1?0.5g/L、硫酸镁0.03 ?0.07g/L、硫酸亚铁 0.1 ?0.5g/L、氯化钴 0.003 ?0.007g/L，氧载体 0.1 ?0.5g/L、碱式碳酸镁或氧化铝0.3?0.7g/L、聚氧丙烯甘油0.3?0.4g/L。所述氧载体是正己烷或全氟化碳。利用上述培养基生产萨菲菌素的培养方法，其特征在于其工艺步骤为: O种子培养:首先将种子培养基灭菌并冷却至25?30°C，并用无菌空气保压，然后在火焰保护下，将已经培养好的淡黄色链霉菌母瓶发酵液按照0.1?0.2L/m3的接种量接入种子培养基中进行种子培养，至菌体浓度20?30%、pH值6?7、培养时间40?60h移种； 2)发酵培养:先将发酵培养基灭菌，冷却至20?27°C，并用无菌空气保压，然后将培养好的种子液移入发酵培养基进行发酵培养，至菌体浓度35?40%、总糖< 10mg/100ml、氨基氮5?15mg/100ml、化学效价> 10mg/L、pH6?7、培养时间140?160h终止发酵。所述种子液的移种为:种子培养结束，首先移种8?10%，当发酵培养60?70h时，再次移种3?5%。所述种子培养基灭菌后的的质量要求为:氨基氮30?50mg/100ml、溶磷30?50ug/ml、总糖 10 ?20mg/100ml、pH6 ?7。所述发酵培养基灭菌后的质量要求为:氨基氮60?80mg/100ml、溶磷50?100ug/ml、总糖 30 ?40mg/100ml、pH6 ?7。所述培养好的淡黄色链霉菌母瓶发酵液质量要求为:pH6?8 ;菌体浓度25?30% ;镜检无杂菌。所述种子培养条件为:罐压0.03?0.05MPa ;罐温24?26°C;空气流量:0?10h，采用空气搅拌代替机械搅拌；llh?移种:20?40m3/h ;搅拌转速60?80r/min。所述发酵培养条件为: a培养基初始pH:发酵培养基灭菌后pH控制在6?7 ; b温度:采用变温控制工艺， O?50h:培养温度26?27°C， 51?120h:培养温度24?25°C， 121h?发酵结束:培养温度23?24°C ； c搅拌转速:采用变频搅拌控制工艺， O?50h:转速控制在80r/min， 51?120h:转速控制在120r/min， 121h?发酵结束:转速控制在90r/min ； d压力控制:罐压0.05?0.06MPa ； e pH控制:发酵过程中pH控制在5?7 ; f空气流量: O ?50h:150 ?200m3A ;51 ?120h:200 ?300m3/h ； 121h?发酵结束:50?100m3/h ； h溶氧控制: 发酵前50h内，不控制溶氧； 51?80h，溶氧控制在60%以上； 81?120h，溶氧控制在30%以上； 121?发酵结束:溶氧控制在40%以上。所述发酵过程中采用流加法进行补料，补料包括补增效剂、补水、补硝酸铵、补麦芽糖和pH控制，其中 a补增效剂工艺控制: 发酵前50h不用进行补增效剂， 发酵时间在51?120h，当脂肪含量低于lg/L，补入增效剂，控制脂肪含量为I?1.5g/L，每隔6?8h检测发酵液脂肪含量， 发酵时间在121h?发酵结束，当脂肪含量低于0.3g/L，补入增效剂，控制脂肪含量为0.3?0.5g/L，每隔6?8h检测发酵液脂肪含量； b补水工艺控制: 发酵前60h不用进行补水， 发酵时间在61?121h，当菌体浓度高于40%，加入灭菌水，要求控制发酵液菌体浓度在35?40%，每隔6?8h检测发酵液菌体浓度， 发酵时间在121h?发酵结束，当菌体浓度高于35%，加入灭菌水，要求控制发酵液菌体浓度在30?35%，每隔6?8h检测发酵液菌体浓度；c发酵过程pH控制工艺: 发酵前60h，pH不进行控制， 发酵时间在61?120h，若pH < 6.0，加入10?20%的氢氧化钠，调节pH至6?7 ;若pH > 7，加入30%的硫酸溶液，调节pH至6?7， 发酵时间在121?发酵结束，若pH < 6.3，加入10?20%的氢氧化钠，调节pH控至6.3?6.7 ;若pH > 6.7，加入30%的硫酸溶液，调节pH至6.3?6.7 ; d补入麦芽糖: 发酵前60h，总糖含量不进行控制， 发酵61h至120h:总糖含量< 15mg/100ml时，补入已灭菌的麦芽糖溶液，使总糖的含量控制在15?20mg/100ml.发酵121h至发酵结束:总糖含量< 5mg/100ml时，补入已灭菌的麦芽糖溶液，使总糖的含量控制在5?10mg/100ml。上述补糖工艺中加入麦芽糖酶，其浓度控制在0.001?0.003%。e补硫酸铵: 萨菲菌素发酵培养过程中，分别在60h和120h补入30%的硫酸铵溶液，其用本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种淡黄色链霉菌发酵生产萨菲菌素的培养基，其特征在于包括种子培养基和发酵培养基，其中所述种子培养基的组成为：花生油1～5ml/L、麦芽糖5～9g/L、麦芽糖酶0.001～0.005g/L、蚯蚓粉11～15g/L、玉米浆10～14ml/L、生物氮素5～9g/L、硝酸铵0.5～0.9g/L、轻质碳酸钙1～5g/L；磷酸二氢钾0.1～0.5g/L；所述发酵培养基的组成为：花生油10～14ml/L、麦芽糖15～19g/L、麦芽糖酶0.003～0.007g/L、蚯蚓粉20～24g/L、玉米浆17～21ml/L、生物氮素12～16g/L、硫酸铵0.5～0.9g/L、轻质碳酸钙3～7g/L、磷酸二氢钾0.5～0.9g/L、氯化钾0.1～0.5g/L、硫酸镁0.03～0.07g/L、硫酸亚铁0.1～0.5g/L、氯化钴0.003～0.007g/L，氧载体0.1～0.5g/L、碱式碳酸镁或氧化铝0.3～0.7g/L、聚氧丙烯甘油0.3～0.4g/L。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：任勇，
申请(专利权)人：宁夏泰益欣生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：宁夏;64