用于活体外测定致肥胖风险的方法技术

本发明专利技术提供一种用于活体外测定致肥胖风险的方法包括下列步骤：齐备一含核酸的样品，侦测该样品的去耦合蛋白3(uncoupling protein3,UCP3)与多配体蛋白聚糖3(syndecan3,SDC3)的对偶基因的基因型；以及，鉴别该样品的UCP3与SDC3对偶基因的基因型，取得一鉴别结果，该鉴别结果是UCP3与SDC3对偶基因同时变异，该样品为源自于一具有增加的致肥胖的风险的个体。所述的方法利用多基因的基因型判定致肥胖的风险，而具有相比于单一基因的基因型，可增加预测的准确度，以降低不同个体仅由相同的特定单一基因判定致肥胖风险的产生错误的可能性，并可供用于作为提供对应保健对策的依据。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种检测致肥胖风险的方法，尤指利用多个特定基因的单一核苷酸多 型性于活体外测定致肥胖的风险的方法
技术介绍
脂肪代谢与热生成（thermogenesis)的调节影响到动物利用能量的效 率，而线粒体为动物体内涉及能量的位置，主要功能是产生三磷酸腺苷（adenosine triphosphate，ATP)作为能量来源供给细胞利用。ATP的产生是通过内膜上的ATP合成酶 进行二磷酸腺苷（adenosinediphosphate,ADP)的磷酸化稱合反应而得。所谓稱合反应 (coupling)是指线粒体结合磷酸化反应与质子流动（protonflow)的一种化学渗透作用。 ATP生成可通过去f禹合蛋白（uncouplingprotein，UCP)进调节，使能量不以ATP形式储存， 而是以热能的形式释放。编码去耦合蛋白的基因，主要区分为去耦合蛋白Uuncoupling proteinl，UCPl)、去稱合蛋白 2(uncouplingprotein2，UCP2)及去稱合蛋白 3(uncoupling protein3，UCP3)三种，其在人体表达的位置不同。UCP1主要表达在褐色脂肪，UCP2在各个 组织都有表达，UCP3则同时表达于褐色脂肪以及骨胳肌，其功能除了参与去耦合作用外，也 有调节脂肪代谢与热生成的功能。 实验中发现提高线粒体内膜外质子梯度浓度的消耗可以促进基础代谢率（AmJP hysiol. 19960ct;271(4Ptl) :C1380-9)，因此UCP3可调节骨胳肌线粒体内膜质子流动产生 热能，影响人体基础代谢能力，并增加能量消耗，减少过多的能量转换成脂肪储存。UCP3的 基因变异研究中，位在外显子3 (exon3)内的rsl800006 (Tyr99Tyr,T-C)变异被发现C对 偶基因与法国高加索人肥胖有关，且与功能性启动子（promoter)区域内的rsl800849变异 (-55C-T)有很强的连锁不平衡（linkagedisequiliburium，LD)，该变异可能影响UCP3 基因mRNA表达的稳定性（Diabetologia. 2000Feb; 43 (2) : 245-9)。但在欧洲其他的研究中， 发现rsl800006 与糖尿病及胰岛素抗性有关（HormRes. 2008; 69(1) : 31-6.Epub2007Dec4; Diabetes. 2008Apr; 57 (4) : 1101-7.doi: 10. 2337/db07-1269.Epub2008Jan25)。因此，目前 尚未有利用UCP3基因变异来判断测定致肥胖风险的技术，仍待有进一步改进的技术，以增 加利用UCP3基因变异的检测准确性。 多配体蛋白聚糖（syndecan,SDC)是一种硫酸肝素蛋白聚糖（heparansulfate proteoglycan,HSPG),主要由核心蛋白（coreprotein)及硫酸肝素聚糖链（heparin sulfatechain)两个部分所组成。SDC基因家族主要存在于细胞膜上，由4个成员组成 (SDC1~SDC4)，其中多配体蛋白聚糖3(syndecan3,SDC3)主要表达于神经系统，包含控制 食欲的下视丘。在正常小鼠禁食实验中，发现禁食状态下大脑下视丘神经细胞SDC3基因表 有显著上升，推测此时SDC3可能是Agouti相关肽（Agouti-relatedpeptide,AGRP)的共同 受体，并通过AGRP结合褪黑素受体（melanocortinreceptor)传递增加食欲的信号，促进 摄食行为。当给予喂食时，SDC3膜外结构（ectodomain)会脱离细胞膜使a黑色素刺激荷 尔蒙（a-MSH)可与褪黑素受体结合传递抑制食欲的信号。SDC3基因剔除小鼠（SDC3null mice)也发现其脂肪量低于正常小鼠，且摄食量下降，能量消耗上升，推论SDC3基因可以调 节体重及身体能量的平衡。然而，在针对欧洲人种的研究结果发现SDC3的变异与肥胖发生 无显著相关，再者，各个SDC3的SNP位点与肥胖发生的关联性有所不同。 基于上述可见，单独以UCP3或SDC3基因作为肥胖基因指标恐仍有争议之处，特定 而言，单独利用UCP3或SDC3基因检测致肥胖风险恐仍有不准确的疑虑。
技术实现思路
有鉴于现有技术检测致肥胖风险的方法，仍有检测结果不准确的问题，本专利技术的 目的在于提供一种具有提高准确率的检测致肥胖风险的方法。 为达上述目的，本专利技术提供一种，其利用多基 因的基因型判定致肥胖的风险，而具有相比于单一基因的基因型，可增加预测的准确度，以 降低不同个体仅由相同的特定单一基因判定致肥胖风险的产生错误的可能性，并可供用于 作为提供对应保健对策的依据。 在一方面，本专利技术提供一种包括下列步骤： 齐备一含核酸的样品， 侦测该样品的去|禹合蛋白3(uncouplingprotein3，UCP3)与多配体蛋白聚糖 3(syndecan3,SDC3)的对偶基因的基因型，以及， 鉴别该样品的UCP3与SDC3对偶基因的基因型，取得一鉴别结果，该鉴别结果是 UCP3与SDC3对偶基因的同时变异，该样品为源自于一具有增加的致肥胖风险的个体。 另一方面，本专利技术提供一种测定致肥胖风险的基因多型性标记，其是由UCP3与 SDC3基因型所形成的组合。 依据本专利技术，所述的变异是例如，但不限于：核苷酸重复、核苷酸插入、核苷酸缺 失、复本变异或单一核苷酸多型性（singlenucleotidepolymorphism,SNP)，所述的变 异造成插入子（intron)的序列变异、无义突变（nonsensemutation)或阅读框架位移 (readingframeshift)〇 依据本专利技术，该含核酸的样品来自于一为亚洲人种的族群的个体；特定的，该个体 是汉人（HanChinese)。 依据本专利技术，所述的核酸是脱氧核糖核酸或核糖核酸，优选为基因组脱氧核糖核 酸（genomicDNA)。如所知者，当所述的核酸是核糖核酸时，齐备一含核酸的样品的步骤包 括，提供一核糖核酸，并且形成互补脱氧核糖核酸。 依据本专利技术，所述的侦测UCP3与SDC3的对偶基因的基因型的步骤包括利用此 领域中所知的任何以一般遗传工程、生物化学等方法鉴别UCP3与SDC3的对偶基因的基 因型的技术，例如，但不限于：聚合酶链锁反应配合定序分析（PCRandSequencing)、即 时聚合酶链锁反应（RealtimePCR)、限制性片段长度多型性（restrictionfragment lengthpolymorphism,RFLP)、质谱仪分析（MassSpectrometry);或者，任何其他合适的 分析基因型的高通量筛选方法（high-throughputscreeningmethod),诸如配合连接子 聚合酶链锁反应（Linker-PCR)的生物晶片（Biochip)或次世代定序（Nextgeneration sequencing,NGS)〇依据本专利技术，所述的UCP3对偶基因的变异发生于外显子区域及非编码区 (Untranslatedregion,UTR)内，所述的鉴别该样品的UCP3与SDC3对偶基因的基本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于活体外测定致肥胖风险的方法，其包括：齐备一含核酸的样品，侦测该样品的去耦合蛋白3与多配体蛋白聚糖3的对偶基因的基因型，以及鉴别该样品的UCP3与SDC3对偶基因的基因型，取得一鉴别结果，该鉴别结果是UCP3与SDC3对偶基因同时变异，该样品为源自于一具有增加的致肥胖的风险的个体。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡岳颖，林咏翔，关淑君，黄雪茵，
申请(专利权)人：大江基因医学股份有限公司，
类型：发明
国别省市：中国台湾;71