锦灯笼宿萼皂苷在制备抗肿瘤药物中的应用制造技术

本发明专利技术提供了以锦灯笼宿萼皂苷为活性成分的药物，其可单独与药用辅料或与其它药物联合制备成药物，本发明专利技术还提供了其在制备药物方面的应用，具体地提供了其在制备抗肿瘤药物方面的应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及以。
技术介绍
锦灯笼（Physalis alkekengi, L. var. francheti (Mast. ) Makino )又名红姑娘、 挂金灯、红灯笼、灯笼果，为爺科（Solanaceae)酸楽属植物，广泛分布于欧亚大陆，如俄 罗斯、中国、日本以及朝鲜等国家。锦灯笼为带果实的宿萼，秋季果实成熟，果实球形、味 甘、微酸，可作水果，营养丰富；宿萼微苦，成熟时呈红色或橙红色。锦灯笼果实不仅可 以食用，而且是我国的传统中药。锦灯笼含有内酯类、黄酮类、萜类、生物碱类、留醇类、氨 基酸类及无机元素等几大类化学成分。已有的研究表明，锦灯笼有多方面的药理作用，如 酸浆苦素B是锦灯笼的主要抗炎成分，常用于上呼吸道感染疾病的治疗；木犀草素对心血 管系统、祛痰及体外抗柯萨奇均具较好疗效。然而有关锦灯笼宿萼皂苷抗肿瘤活性的研究 尚未见报道，我们发现其抗肿瘤作用明显，是一种有开发前途的抗肿瘤药物。
技术实现思路
本专利技术提供了锦灯笼宿萼皂苷在制备抗肿瘤药物方面的应用。 本专利技术提供的化合物的制备方法为：将干燥的成熟锦灯笼宿萼粉碎，乙醇浸泡过 夜；水浴回流提取，过滤，取上清，共提取3次；将3次的滤液合并，离心，取上清弃沉 淀；将上清水浴旋转蒸发并回收乙醇.将上述上清液与配制好的水饱和正丁醇在分液漏斗 上反复充分震荡混合，过夜；然后将下层水层放入烧杯中，正丁醇层保留，将水层重复上 述萃取步骤两次；合并上层正丁醇层，旋转蒸发回收正丁醇至黏稠状；用少量甲醇溶解沉 淀，加入乙醚洗涤，离心，洗涤数次至上清无色；沉淀物在真空干燥箱中干燥过夜得粗皂 苷；将锦灯笼宿萼粗皂苷配制成10 mg/mL的水溶液，充分溶解、离心后，将上清液上样于 大孔树脂层析柱洗脱：首先用蒸馏水洗脱，将洗脱液进行薄层层析（TLC)检测，直至硅胶 G薄层层析检验没有显色反应为止，洗脱至无寡糖存在；然后以乙醇溶液进行洗脱，将洗脱 液进行三氯醋酸显色，直至无颜色反应，将洗脱液旋转蒸发浓缩至一定体积，水浴蒸发去 除存留的少量乙醇后，将浓缩液冰冻干燥，即得分离纯化后的锦灯笼宿萼皂苷。 本专利技术提供的含有化合物的药物，可以通过将化合物添加药学上可接受的辅料或 可选的其它成分而制成适于临床使用的药物组合物。 本专利技术的化合物在制备治疗肿瘤药物中的应用，是通过以下的药效实验得到证实 的。【具体实施方式】 制备例1:锦灯笼宿萼皂苷的制备 取600g干燥的成熟锦灯笼宿萼粉碎，加入70%的乙醇，浸泡过夜；60°C水浴回流提取 2 h，过滤，取上清，共提取3次；将3次的滤液合并，3 500 r/min离心10 min，取上清 弃沉淀；将上清水浴旋转蒸发并回收乙醇.将上述上清液与配制好的水饱和正丁醇在分液 漏斗上反复充分震荡混合，过夜；然后将下层水层放入烧杯中，正丁醇层保留，将水层重 复上述萃取步骤两次；合并上层正丁醇层，旋转蒸发回收正丁醇至黏稠状；用少量甲醇溶 解沉淀，加入5倍乙醚洗漆，3 OOO r/min离心15 min,洗漆数次至上清无色；沉淀物在 真空干燥箱中干燥过夜得粗皂苷；将锦灯笼宿萼粗皂苷配制成10 mg/mL的水溶液，充分溶 解、离心后，将上清液上样于D-101大孔树脂层析柱（4 cmX40 cm)，静止0.5 h后进行洗 脱.洗脱：首先用蒸馏水洗脱，将洗脱液进行薄层层析（TLC)检测，直至硅胶G薄层层析 检验没有显色反应为止（薄层层析方法：用正丁醇-甲酸-水（4 : 6 : 1，体积比）为展 开剂，5%硫酸乙醇溶液为显色剂，KKTC条件下2 min即可显色），洗脱至无寡糖存在；然 后以60%的乙醇溶液进行洗脱，将洗脱液进行三氯醋酸显色，直至无颜色反应，将洗脱液 旋转蒸发浓缩至一定体积，水浴蒸发去除存留的少量乙醇后，将浓缩液冰冻干燥，即得分 离纯化后的锦灯笼宿萼皂苷。 实验例1:锦灯笼宿萼皂苷对体外肿瘤细胞的抑制作用 材料和试剂 药物及试剂： 锦灯笼宿萼皂苷，白色粉末，按照制备例1方法制备； 注射用硫酸长春新碱，上海华联制药有限公司，规格Img/支； RPMI1640培养基：GIBC0公司生产； 新生牛血清(超级)，杭州四季青生物工程材料有限公司； 胰蛋白酶，Sigma公司生产； 横基罗丹明B(sulforhadamineB,SRB)，Sigma公司； 注射用链霉素，山东瑞阳制药有限公司，Ig (100万单位）/支； 注射用青霉素钠，山东鲁抗医药股份有限公司，80万单位/支； 其它常用化学试剂为国产分析纯。 细胞株：人肝癌细胞株SMMC-7721、Bel-7402、人卵巢癌细胞株H08910、人前列腺 癌胞PC-3M、人肺腺癌细胞株A549、人结肠癌细胞株HCT-8、人食管癌细胞株CaEs-17、人脑 胶质瘤细胞株U251、人胃癌细胞株BGC-823、人胃腺癌细胞株SGC-7901，均购自中国医学科 学院北京肿瘤研究所药理室。 仪器：C02培养箱，超净工作台，酶标仪，倒置显微镜，细胞培养瓶（Costar，USA)， 96孔细胞培养板（Costar，USA)。软件：MicrosoftExcel7. 0 统计分析软件；MicrocalOrigin6. 0 数据处理软 件。 实验方法 药物及试剂配制： RPMI1640培养基一袋加水一升，补加2克碳酸氢钠，10万单位青霉素和IOOmg链霉素， 调节pH值至7. 4,用0. 22Mm除菌滤膜过滤除菌。90ml培养基加灭活新生牛血清IOml即为 完全培养液。胰蛋白酶用D-hanks缓冲液配成0. 25%溶液后过滤除菌。 准确称取锦灯笼宿萼皂苷20.0 mg于灭菌离心管中，加入DMSO 1ml，配成20 mg/ ml原液。取10 W原液加到IOml的完全培养液中，即成为20呢/ml应用液，再分别用完全 培养液稀释为l〇、5、2. 5和I. 25吒/ml的应用液。 细胞培养及传代： 所有细胞均贴壁培养于含IOml完全培养液细胞培养瓶中，于37°C、5%C02、饱合湿度下 培养。细胞长满瓶底后用灭菌D-hanks液洗两次，加0. 25%胰蛋白酶消化细胞2分钟，倒掉 胰蛋白酶，待轻摇细胞能完全脱落后，加完全培养液30ml后，用移液管吹散细胞，分装于3 个新的细胞培养瓶中，继续培养。 上述实验均在严格无菌条件下进行。 结果测定：将对照用培养板取出于含细胞孔中轻轻加入25ul 50%预冷的三氯醋 酸溶液于培养液面上，静置5分钟后，在4°C冰箱放置1小时，弃去上层液体，用去离子水洗 5遍，置空气中干燥后留待与加药培养板一并染色分析。 细胞加药培养48小时后，取出培养板，于每孔加入50ul预冷的50%三氯醋酸，静 置5分钟后移入4°C冰箱中静置1小时，取出用去离子水洗5遍，空气中干燥，待完全干燥 后每孔加入1%的乙酸配制的〇. 4%的SRB lOOul，染色20分钟后倒掉染液，用1%乙酸洗5 次，去除未结合的染料。空气中干燥后用pH 10. 5的lOmmol/L的非缓冲Tris碱液150ul 溶解，在平板振荡器上振荡5分钟，在BioRad酶标仪上测定各孔在490nm的光吸收。本底 对照板的细胞同样处理测定0D490。 根据各孔0D490计算药物对细胞增殖的抑制率： 根据药物浓度对数与抑制率，用Microcal 本文档来自技高网...

【技术保护点】
锦灯笼宿萼皂苷在制备药物方面的应用。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：黄映琪，
申请(专利权)人：青岛百草汇中草药研究所，
类型：发明
国别省市：山东;37