一种基于定量核磁共振氢谱法测定芳基萘内酯型木脂素纯度的方法技术

本发明专利技术涉及基于定量核磁共振氢谱法测定芳基萘内酯型木脂素纯度的方法，可有效解决现有芳基萘内酯型木脂素纯度检测技术成本高、对照品不易获得，操作方法复杂、耗时长的问题，方法是，称取10-14mg的内标物，溶解于0.8-1.2mL 的DMSO-d6中，制备成内标物溶液；称取10-50mg的芳基萘内酯型木脂素，溶解于0.8-1.2mL 的DMSO-d6中，制备成目标分析物溶液；量取80-120μL的内标物溶液，180-220μL的目标分析物溶液，180-220μL的DMSO-d6，制成样品溶液，将样品溶液混悬25-35s，进行定量核磁测试，测定内标物上芳香质子和芳基萘内酯型木脂素H-2,6的峰面积，得出目标分析物相对于内标物的摩尔质量比，再通过目标分析物与内标物的质量比，本发明专利技术成本低，可快速准确的评价芳基萘内酯型木脂素的纯度，有良好的经济和社会效益。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医药化工领域，特别是一种基于定量核磁共振氢谱法测定芳基萘内酯型木脂素纯度的方法。
技术介绍
由于生物合成的复杂性，天然产物的结构也复杂多样。以常规的色谱学方法为主的分离纯化手段往往很难将结构非常相似的天然产物分离开来，而天然产物中混有痕量的高活性的杂质会导致生物活性的错误结论。据相关报道，天然产物熊果酸具有120种生物活性，有些生物活性在不同的文献中是完全相反的，如抗菌活性，细胞毒活性。出现这样结论的原因是，测试活性所用的熊果酸样品不是单一的熊果酸化学实体，与其共存的杂质严重影响了活性结果。因此建立完善的天然产物纯度评价方法是其准确的生物活性评价的必要条件。同时高纯度的天然产物也是相关药材质量评价所必须的。因此天然产物的纯度评价是非常重要的。芳基萘内酯型木脂素是从植物中发现的数目较多的一类木脂素，目前已在40余种植物中有报道。该类化合物具有抗肿瘤、抗病毒、抗菌、杀虫等作用。芳基萘内酯型木脂素类化合物以鬼臼毒素为代表，其衍生物依托泊苷(etoposide，VP-16)和替尼泊苷(teniposide，VM-26)于上个世纪80年代应用于临床，对乳腺癌、睾丸癌、小细胞肺癌、淋巴癌、儿童白血病等多种癌症均有良好的治疗效果，以鬼臼毒素为代表的芳基萘内酯型木脂素是目前研究最深入的一类天然产物之一，一直备受国内外学者的广泛关注。此类化合物在相关药材中的含量主要通过薄层色谱，高效液相色谱，毛细管电泳色谱，其中以带有紫外检测器的高效液相色谱方法最为普遍，这种方法对于那些没有紫外吸收的化合物无法检测，必须有高纯度标准品作对照，该标准品价格昂贵、不易获得，且此操作方法复杂耗时长。定量核磁共振氢谱法，由于其操作快速简便、样品消耗量少、同时给出定性的结构信息和定量分析结果，特别是定量核磁共振氢谱法不依赖于被测物的高纯度标准品，因此定量分析的成本大大降低。利用定量核磁共振氢谱法，选择内标物替代使用目标测试物的标准品做外标的高效液相色谱法进行芳基萘内酯型木脂素的纯度测定是一项非常重要的研究工作。但至今尚未见到采用定量核磁共振氢谱法测定芳基萘内酯型木脂素的纯度的公开报道。
技术实现思路
针对上述情况，为了克服现有技术之缺陷，本专利技术提供一种基于定量核磁共振氢谱法测定芳基萘内酯型木脂素纯度的方法，可有效解决现有芳基萘内酯型木脂素纯度检测技术成本高、对照品不易获得，操作方法复杂、耗时长的问题。本专利技术解决的技术方案为，该方法包括以下步骤：称取10-14mg的内标物，溶解于0.8-1.2mL的DMSO-d6中，制备成内标物溶液；称取10-50mg的芳基萘内酯型木脂素，溶解于0.8-1.2mL的DMSO-d6中，制备成目标分析物溶液；量取80-120μL的内标物溶液，180-220μL的目标分析物溶液，180-220μL的DMSO-d6，转移到离心管中，制成样品溶液，将该样品溶液混悬25-35s，转移至核磁管中，进行定量核磁测试，定量核磁测试的条件：扫描次数(NS)，8或16；光谱宽度(SW)，15-25ppm；弛豫时间(D1)，16-35s；测试温度，20-30℃；脉冲角度，30°，或45°，或90°；采集时间(AQ)，2.5-3.5s；测定内标物上芳香质子和芳基萘内酯型木脂素H-2,6的峰面积，得出目标分析物相对于内标物的摩尔质量比，再通过目标分析物与内标物的质量比依据公式：PX=IXIStd·NStdNX·MXMStd·mStdm·PStd]]>计算出目标分析物的纯度PX，其中：Ix为目标分析物的峰面积；IStd为内标的峰面积；Nx为目标分析物的原子核的数目；NStd为内标的原子核的数目；Mx为目标分析物的摩尔质量；MStd为内标的摩尔质量；Mx为目标分析物的质量；mStd为内标的质量；Px为目标分析物的纯度；PStd为内标物的纯度；所述的芳基萘内酯型木脂素为去氧鬼臼毒素，鬼臼毒素，4-去甲鬼臼毒素，鬼臼毒素-7′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，4-去甲鬼臼毒素-7′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷中的任一种；所述内标物为1,4-二硝基苯，3,4,5-三氯吡啶，1,3,5-三氯-2-硝基苯中的任一种。本专利技术成本低，可快速准确的评价芳基萘内酯型木脂素的纯度，有良好的经济和社会效益。附图说明图1为本专利技术定量核磁谱图。图2为本专利技术定量核磁共振法测定的4-去甲鬼臼毒素与1,4-二硝基苯摩尔比和重量分析法测定的摩尔比线性回归结果图。具体实施方式以下结合实施例对本专利技术的具体实施方式作进一步详细说明。本专利技术在具体实施中可由以下实施例给出。本专利技术方法包括以下步骤：称取10-14mg的内标物，溶解于0.8-1.2mL的DMSO-d6中，制备成内标物溶液；称取10-50mg的芳基萘内酯型木脂素，溶解于0.8-1.2mL的DMSO-d6中，制备成目标分析物溶液；量取80-120μL的内标物溶液，180-220μL的目标分析物溶液，180-220μL的DMSO-d6，转移到离心管中，即得样品溶液，将该样品溶液混悬25-35s，转移至核磁管中，进行定量核磁测试，所述的定量核磁测试的条件：扫描次数(NS)，8或16；光谱宽度(SW)，15-25ppm；弛豫时间(D1)，16-35s；测试温度，20-30℃；脉冲角度，30°，或45°，或90°；采集时间(AQ)，2.5-3.5s；测定内标物上芳香质子和芳基萘内酯型木脂素H-2,6的峰面积，得出目标分析物相对于内标物的摩尔质量比，再通过目标分析物与内标物的质量比依据公式计算出目标分析物的纯度；所述的芳基萘内酯型木脂素为去氧鬼臼毒素，鬼臼毒素，4-去甲鬼臼毒素，鬼臼毒素-7′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，4-去甲鬼臼毒素-7′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，sinolignan A中的任一种；R1＝CH3或H；R2＝H，OH，glc或6-acetyl-glc所述内标物为1,4-二硝基苯，3,4,5-三氯吡啶，1,3,5-三氯-2-硝基苯中的任一种；所述芳基萘内酯型木脂素纯度依据如下公式获得PX=IXIStd·NStdNX·MXMStd·mStdm·PStd]]>Ix为目标分析物的峰面积；IStd为内标的峰面积；Nx为目标分析物的原子核的数目；NStd为内标的原子核的数目；Mx为目标分析物的摩尔质量；MStd为内标的摩尔质量；Mx为目标分析物的质量；mStd为内标的质量；Px为目标分析物的纯度；PSt本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于定量核磁共振氢谱法测定芳基萘内酯型木脂素纯度的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：称取10‑14mg的内标物，溶解于0.8‑1.2mL的DMSO‑d6中，制备成内标溶液；称取10‑50mg的芳基萘内酯型木脂素，溶解于0.8‑1.2mL的DMSO‑d6中，制备成目标分析物溶液；量取80‑120μL的内标溶液，180‑220μL的目标分析物溶液，180‑220μL的DMSO‑d6，转移到离心管中，即得样品溶液，将该样品溶液混悬25‑35s，转移至核磁管中，进行定量核磁测试，所述的定量核磁测试的条件：扫描次数，8或16；光谱宽度，15‑25ppm；弛豫时间，16‑35s；测试温度，20‑30℃；脉冲角度，30°，或45°，或35°；采集时间，2.5‑3.5s；测定内标物上芳香质子和芳基萘内酯型木脂素H‑2,6的峰面积，得出目标分析物相对于内标物的摩尔质量比，再通过目标分析物与内标物的质量比依据公式：PX=IXIStd·NStdNX·MXMStd·mStdm·PStd]]>计算出目标分析物的纯度PX，其中：Ix为目标分析物的峰面积；IStd为内标的峰面积；Nx为目标分析物的原子核的数目；NStd为内标的原子核的数目；Mx为目标分析物的摩尔质量；MStd为内标的摩尔质量；Mx为目标分析物的质量；mStd为内标的质量；Px为目标分析物的纯度；PStd为内标物的纯度；所述的芳基萘内酯型木脂素为去氧鬼臼毒素，鬼臼毒素，4‑去甲鬼臼毒素，鬼臼毒素‑7′‑O‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷，4‑去甲鬼臼毒素‑7′‑O‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷，sinolignanA中的任一种；所述内标物为1,4‑二硝基苯，3,4,5‑三氯吡啶，1,3,5‑三氯‑2‑硝基苯中的任一种。...

【技术特征摘要】
1.一种基于定量核磁共振氢谱法测定芳基萘内酯型木脂素纯度的方法，其特征在于，该
方法包括以下步骤：称取10-14mg的内标物，溶解于0.8-1.2mL的DMSO-d6中，制备成内标
溶液；称取10-50mg的芳基萘内酯型木脂素，溶解于0.8-1.2mL的DMSO-d6中，制备成目标
分析物溶液；量取80-120μL的内标溶液，180-220μL的目标分析物溶液，180-220μL的DMSO-d6，
转移到离心管中，即得样品溶液，将该样品溶液混悬25-35s，转移至核磁管中，进行定量核
磁测试，所述的定量核磁测试的条件：扫描次数，8或16；光谱宽度，15-25ppm；弛豫时间，
16-35s；测试温度，20-30℃；脉冲角度，30°，或45°，或35°；采集时间，2.5-3.5s；测定内
标物上芳香质子和芳基萘内酯型木脂素H-2,6的峰面积，得出目标分析物相对于内标物的摩
尔质量比，再通过目标分析物与内标物的质量比依据公式：
PX=IXIStd·NStdNX·MXMStd·mStdm·PStd]]>计算出目标分析物的纯度PX，其中：
Ix为目标分析物的峰面积；IStd为内标的峰面积；Nx为目标分析物的原子核的数目；NStd为内标的原子核的数目；Mx为目标分析物的摩尔质量；MStd为内标的摩尔质量；Mx为目标
分析物的质量；mStd为内标的质量；Px为目标分析物的纯度；PStd为内标物的纯度；
所述的芳基萘内酯型木脂素为去氧鬼臼毒素，鬼臼毒素，4-去甲鬼臼毒素，鬼臼毒素
-7′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，4-去甲鬼臼毒素-7′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，sinolignanA中的任一种；
所述内标物为1,4-二硝基苯，3,4,5-三氯吡啶，1,3,5-三氯-2-硝基苯中的任一种。
2.根据权利要求1所述的一种基于定量核磁共振氢谱法测定芳基萘内酯型木脂素纯度的
方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：称取12.47mg的1,4-二硝基苯，溶解于1.0mL的
DMSO-d6中，制备成1,4-二硝基苯内标溶液；称取28.61mg的去氧鬼臼毒素，溶解于1.0mL
的DMSO-d6中，制备成去氧鬼臼毒素目标分析物溶液；量取100μL的1,4-二硝基苯内标溶液，
200μL的去氧鬼臼毒素目标分析物溶液，200μL的DMSO-d6，转移到离心管中，即得样品溶
液，将该样品溶液混悬30s，转移至核磁管中，进行定量核磁测试，所述的定量核磁测试的条
件：扫描次数16；光谱宽度，20ppm；弛豫时间，16s；测试温度，25℃；脉冲角度，30°；
采集时间，3.2s；测定1,4-二硝基苯上芳香质子和去氧鬼臼毒素H-2,6的峰面积，得出去氧鬼
臼毒素相对于1,4-二硝基苯的摩尔质量比，再通过去氧鬼臼毒素与1,4-二硝基苯的质量比依
据公式计算出去氧鬼臼毒素的纯度。
3.根据权利要求1所述的一种基于定量核磁共振氢谱法测定芳基萘内酯型木脂素纯度的
方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：称取12.85mg的1,4-二硝基苯，溶解于1.0mL的
DMSO-d6中，制备成1,4-二硝基苯内标溶液；称取29.95mg的鬼臼毒素，溶解于1.0mL的

\tDMSO-d6中，制备成鬼臼毒素目标分析物溶液；量取100μL的1,4-二硝基苯内标溶液，200μL
的鬼臼毒素目标分析物溶液，200μL的DMSO-d6，转移到离心管中，即得样品溶液；将该样
品溶液混悬30s，转移至核磁管中，进行定量核磁测试，所述的定量核磁测试的条件：扫描次
数，16；光谱宽度，20ppm；弛豫时间，16s；测试温度，25℃；脉冲角度，30°；采集时间，
3.2s；测定1,4-二硝基苯上芳香质子和鬼臼毒素H-2,6的峰面积，得出鬼臼毒素相对于1,4-二
硝基苯的摩尔质量比，再通过鬼臼毒素与1,4-二硝基苯的质量比依据公式计算出鬼臼毒素的
纯度。
4.根据权利要求1所述的一种基于定量核磁共振氢谱法测定芳基萘内酯型木脂素纯度的
方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：称取12.90mg的1,4-二硝基苯，溶解于1.0mL的
DMSO-d6中，制备成1,4-二硝基苯内标溶液；称取29.35mg的4-去甲鬼臼毒素，溶解于1.0mL
的DMSO-d6中，制备成4-去甲鬼臼毒素目标分析物溶液；量取100μL的1,4-二硝基苯内标溶
液，200μL的4-去甲鬼臼毒素目标分析物溶液，200μL的DMSO-d6，转移到离心管中，即得
样品溶液，将该样品溶液混悬30s，转移至核磁管中，进行定量核磁测试，所述的定量核磁测
试的条件：扫描次数，8；光谱宽度，25ppm；弛豫时间，35s；测试温度，30℃；脉冲角度，
90°；采集时间，3.5s；测定1,4-二硝基苯上芳香质子和4-去甲鬼臼毒素H-2,6的峰面积，得
出4-去甲鬼臼毒素相对于1,4-二硝基苯的摩尔质量比，再通过4-去甲鬼臼毒素与1,4-二硝基
苯的质量比依据公式计算出4-去甲鬼臼毒素的纯度。
5.根据权利要求1所述的一种基于定量核磁共振氢谱法测定芳基萘内酯型木脂素纯度的
方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：称取11.87mg的1,4-二硝基苯，溶解于1.0mL的
DMSO-d6中，制备成1,4-二硝基苯内标溶液；称取39.84mg的4-去甲鬼臼毒素-7′-O-β-D-吡喃
葡萄糖苷，溶解于1.0mL的DMSO-d6中，制备成4-去甲鬼臼毒素-7′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷目
标分析物溶液；量取100μL的1,4-二硝...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙彦君，张艳丽，赵璇，裴莉昕，司金光，王俊敏，纪宝玉，弓建红，高巍，关延彬，
申请(专利权)人：河南中医学院，
类型：发明
国别省市：河南;41