应用于组织样本中组蛋白修饰染色体免疫共沉淀方法技术

本发明专利技术涉及一种应用于组织样本中组蛋白修饰染色体免疫共沉淀方法，首先进行组织样本前处理；然后在冰浴中研磨后，用无菌纱布过滤，收集滤液中的细胞，悬浮在酶切消化缓冲液中水浴；将加入酶切消化缓冲液的细胞，加入微球菌核酸酶，酶切后，加入与微球菌核酸酶等量的酶切终止液；在冰浴下进行高频超声并离心处理，得到破碎的染色质溶液；取ProteinA/G，加入含牛血清白蛋白的PBS缓冲液，再加抗体孵育，加入破碎的染色质溶液，过夜孵育；在磁力架上用高盐溶液多次洗涤，洗涤后用TE溶液洗脱磁力珠上的DNA，用纯化液纯化提取DNA，用超纯水溶解DNA。与现有技术相比，本发明专利技术能够在高通量水平上精准定位组蛋白或转录因子的结合位点，提高了临床样本的检测效果。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种应用于组织样本中组蛋白修饰染色体免疫共沉淀方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)组织样本前处理：取组织样本切割成块状，加预冷的含有蛋白抑制剂的PBS洗涤剂洗涤；(2)组织单细胞分离：用组织研磨器，在冰浴中研磨后，用无菌纱布过滤，收集滤液；(3)细胞裂解与酶消化：收集步骤(2)滤液中的细胞，悬浮在酶切消化缓冲液中，37℃水浴2分钟；(4)微球菌核酸酶酶切反应：将加入酶切消化缓冲液的细胞，加入微球菌核酸酶，37℃酶切5分钟后，加入与微球菌核酸酶等量的酶切终止液；(5)超声破碎：在冰浴下，对步骤(4)所得液进行高频超声并离心处理，得到破碎的染色质溶液；(6)抗体结合：取Protein A/G，用含牛血清白蛋白的PBS缓冲液洗涤后，加入含牛血清白蛋白的PBS缓冲液，再加抗体，4℃孵育2‑4小时后，加入破碎的染色质溶液，4℃过夜孵育；(7)ChIP后的DNA提取：孵育过后的溶液，在磁力架上用高盐溶液多次洗涤，洗涤后用TE溶液洗脱磁力珠上的DNA，用纯化液纯化提取DNA，用超纯水溶解DNA。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李旦，刘小乐，
申请(专利权)人：同济大学，
类型：发明
国别省市：上海;31