一种人血清氧化低密度脂蛋白的免疫比浊检测试剂盒制造技术

本发明专利技术提供了一种人血清氧化低密度脂蛋白的免疫比浊检测试剂盒，其特征在于：包括试剂1和试剂2；所述试剂1包括：10-50mmol/L的缓冲液、0.01-0.1％w/v的聚乙二醇、0.01-0.05％w/v的防腐剂；所述试剂2包括：0.1-0.5％w/v标记有抗人氧化低密度脂蛋白抗体的胶乳颗粒、0.5-5％w/v的稳定物质、10-50mmol/L的缓冲液、0.01-0.05％w/v的防腐剂。该试剂盒灵敏度高、精密度好，适用于全自动生化分析仪。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物检测领域，具体而言，涉及检测一种人血清中氧化低密度脂蛋白的免疫比浊试剂盒。
技术介绍
心血管疾病是严重危害我国和世界人民生命健康的一类疾病，其患病率和死亡率都远远高于肿瘤等其他疾病，是危害人类健康和生命安全的第一杀手。据世界卫生组织报告指出，全球所有死亡原因的1/3是由心脑血管疾病引起的，其发病率是各种疾病之首。在我国，据国家心血管病中心发布的《中国心血管病报告2013》显示，心血管病的患病率处于持续上升阶段，全国心血管病患者约2.9亿，即每5个成人中就有1人患有心血管病。每年约有350万人死于心血管病，占总死亡率的41％，居各种疾病之首，即每10秒有1人死于心血管疾病。其中由血脂异常引发的心血管疾病呈逐年上升的趋势，我国血脂异常患者至少为2.5亿，患病率为18.6％，占心血管疾病总数的86.2％，而浙江地区近半数的成年居民血脂异常，且患病人群年轻化趋势明显。血脂异常作为脂质代谢障碍性疾病，主要损害心血管系统，导致冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary atherosclerotic heart disease，CHD)——冠心病及其他动脉粥样硬化性疾病的发生，是心血管病的主要危险因素之一。近期研究发现，天然LDL中的不饱和脂肪酸在自由基或其他氧化剂作用下生成脂类自由基，这些脂类自由基作为引发剂，引发脂质过氧化的链式反应，生成多种活性醛。这些化学性质活泼的醛与LDL中的载脂蛋白apoB结合产生新的抗原决定簇，进而形成氧化低密度脂蛋白(oxidized LDL，oxLDL)，其性质较天然LDL已发生明显改变，不能通过LDL受体途径进行代谢，而由oxLDL受体识别后内吞入巨噬细胞，从而使胆固醇酯在巨噬细胞中大量堆积而形成泡沫细胞，泡沫细胞因摄取大量的oxLDL而造成脂质堆积时即会发生坏死崩解，此过程一方面形成粥样硬化斑块坏死的核心，进一步地造成动脉粥样硬化早期病变脂纹的形成；另一方面也将oxLDL等氧化的脂质和蛋白质释放入循环血液，成为血浆中可以检测到的oxLDL，粥样硬化的斑块越大、越多，渗透至血液中的oxLDL也越多。因此，循环血液中的oxLDL的量可以反应动脉粥样硬化的严重程度，特别是与冠心病密切相关。大量的科学研究已证实oxLDL是比年龄、高血压、糖尿病、吸烟等更为重要的冠心病独立危险因素。因此对oxLDL的检测和监视是预防和控制心血管疾病尤其是冠心病的重要内容。目前，国内外对oxLDL的检测方式主要有酶联免疫吸附法(ELISA)、共轭双烯检测法和核磁共振(NMR)法。但是共轭双烯检测法和NMR法的检测仪器设备较为昂贵，且操作复杂，限制了其应用。而ELISA的检测方法存在操作复杂、耗时长等缺点，而正逐渐被自动化、快速化的全自动检测方法所代替。免疫比浊法是一种新型的免疫检测技术，它的检测原理是抗原抗体凝集成复合物而使反应体系产生一定的浊度，浊度大小与样品中被检物质的浓度成正比，在一定波长下测定浊度，即可测得样品中被检物质的含量。免疫比浊法可在全自动生化分析仪上使用，不但明显的缩短了检测时间，提高了检测效率，并且在一定程度上减少了人工操作而引入的人为误差，使其在临床上得到了较好的推广。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种人血清氧化低密度脂蛋白的免疫比浊检测试剂盒，该试剂盒灵敏度高、精密度好，适用于全自动生化分析仪。本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案是：本专利技术人血清氧化低密度脂蛋白的免疫比浊检测试剂盒包括试剂1和试剂2，所述试剂1包括：10-50mmol/L的缓冲液、0.01-0.1％w/v的聚乙二醇、0.01-0.05％w/v的防腐剂；所述试剂2包括：0.1-0.5％w/v标记有抗人氧化低密度脂蛋白抗体的胶乳颗粒、0.5-5％w/v的稳定物质、10-50mmol/L的缓冲液、0.01-0.05％w/v的防腐剂。所述胶乳颗粒直径为50nm～200nm,优选直径为100-120nm。所述缓冲液为磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、Tris缓冲液、HEPES缓冲液、MES中的一种或多种；所述缓冲液pH值为6.5-8.5。所述缓冲液可以为其他具有相似特征的缓冲液。由于抗体分子的特殊性，需要有稳定物质保持其结构和活性的稳定。所述的稳定物质为生物大分子、高分子聚合物等其中的一种或多种；生物大分子为牛血清白蛋白或糖类物质，糖类包括蔗糖、海藻糖、葡聚糖、甘露糖和葡萄糖中的一种或多种；所述的高分子聚合物为聚乙二醇或聚乙烯醇。所述试剂2中的稳定物质优选为0.5-5％w/v的牛血清白蛋白BSA。为了防止试剂受到微生物的污染，本专利技术试剂1和试剂2中分别添加了适量的防腐剂，防腐剂是叠氮化钠、硫柳汞、Proclin300、卡松中的一种或多种。优选的，本专利技术防腐剂为0.01-0.05％w/v的叠氮化钠。本专利技术试剂盒中，所述试剂2的制备具体地可以采用以下方法制备，包括以下步骤：步骤1：制备活化的胶乳悬液：向1mg胶乳微粒中加入0.1-0.2mL的5mg/mL的EDC和0.1-0.2mL的5mg/mL的NHS；在20-25℃下震荡反应30min；离心后，用50mmol/L的磷酸盐缓冲液(pH＝7.4)冲洗反应后的悬浮颗粒，以除去多余的未反应的EDC和NHS，得到活化的胶乳悬液；优选地，选用的胶乳微粒的直径为100-120nm。步骤2：制备稀释的抗体溶液：将抗人氧化低密度脂蛋白抗体用50mmol/L的磷酸盐缓冲液(pH＝7.4)稀释至1mg/mL；得到稀释的抗体溶液；步骤3：向所述步骤1制备得到的活化后的胶乳悬液中加入所述步骤2制备的稀释的抗体溶液10μL，室温20-25℃下反应2h；步骤4：将步骤3处理后所得溶液离心用10％(w/v)BSA进行封闭，室温20-25℃反应1h；步骤5：将步骤4所得溶液离心后悬浮于溶液A中，所述溶液A含0.5-5％w/v的稳定物质、10-50mmol/L的缓冲液(pH＝8.0)、0.01-0.05％w/v的防腐剂；所述免疫胶乳在溶液A中的浓度为0.1％(w/v)-0.5％(w/v)。优选地，所述溶液A含10mmol/L磷酸盐(pH＝8.0)、1％(w/v)BSA和0.02％(w/v)叠氮钠，所述免疫胶乳在溶液A中的浓度为0.1％(w/v)。本专利技术所述的人血清氧化低密度脂蛋白的免疫比浊检测试剂盒，用于测定人血清氧本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人血清氧化低密度脂蛋白的免疫比浊检测试剂盒，其特征在于：包括试剂1和试剂2；所述试剂1包括：10‑50mmol/L的缓冲液、0.01‑0.1％w/v的聚乙二醇、0.01‑0.05％w/v的防腐剂；所述试剂2包括：0.1‑0.5％w/v标记有抗人氧化低密度脂蛋白抗体的胶乳颗粒、0.5‑5％w/v的稳定物质、10‑50mmol/L的缓冲液、0.01‑0.05％w/v的防腐剂。

【技术特征摘要】
1.一种人血清氧化低密度脂蛋白的免疫比浊检测试剂盒，其特征在
于：包括试剂1和试剂2；所述试剂1包括：10-50mmol/L的缓冲液、
0.01-0.1％w/v的聚乙二醇、0.01-0.05％w/v的防腐剂；所述试剂2包括：
0.1-0.5％w/v标记有抗人氧化低密度脂蛋白抗体的胶乳颗粒、0.5-5％w/v的
稳定物质、10-50mmol/L的缓冲液、0.01-0.05％w/v的防腐剂。
2.根据权利要求1所述的人血清氧化低密度脂蛋白的免疫比浊检测
试剂盒，其特征在于：所述胶乳颗粒直径为50nm～200nm。
3.根据权利要求1所述的人血清氧化低密度脂蛋白的免疫比浊检测
试剂盒，其特征在于：所述胶乳颗粒直径为100-120nm。
4.根据权利要求1所述的人血清氧化低密度脂蛋白的免疫比浊检测
试剂盒，其特征在于：所述缓冲液为磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、Tris
缓冲液、HEPES缓冲...

【专利技术属性】
技术研发人员：梅义武，刘兴，章凌彬，叶佳颖，
申请(专利权)人：浙江卓运生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33