一种通过花蕾进行宽叶弹簧草鳞茎诱导和植株再生的方法技术

本发明专利技术公开了一种通过花蕾进行宽叶弹簧草鳞茎诱导和植株再生的方法，具体操作步骤如下：1)培养基的配制，包括基本培养基和组培各阶段培养基的组分；2)外植体的选取及消毒；3)鳞茎的诱导及增殖；4)壮苗生根；5)移栽。本发明专利技术有益的效果：利用植物组织培养技术对宽叶弹簧草的花蕾进行了鳞茎的直接诱导和植株再生，并简化了组培操作程序，能够在较短时间内获得大量遗传性状一致的优质壮苗，同时克服了母本稀缺和常规繁殖方法慢的缺点，对保护弹簧草种质资源和工厂化种苗生产都具有积极意义。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了，具体操作步骤如下：1)培养基的配制，包括基本培养基和组培各阶段培养基的组分；2)外植体的选取及消毒；3)鳞茎的诱导及增殖；4)壮苗生根；5)移栽。本专利技术有益的效果：利用植物组织培养技术对宽叶弹簧草的花蕾进行了鳞茎的直接诱导和植株再生，并简化了组培操作程序，能够在较短时间内获得大量遗传性状一致的优质壮苗，同时克服了母本稀缺和常规繁殖方法慢的缺点，对保护弹簧草种质资源和工厂化种苗生产都具有积极意义。【专利说明】
本专利技术涉及植物组织培养技术，具体涉及。
技术介绍
宽叶弹簧草(Albuca concordiana)为风信子科宽叶弹簧草属多年生观赏多肉植物，原产南非，其带状叶片扭曲盘旋，球形鳞茎古朴独特，且花色清新淡雅，是珍贵的弹簧草品种。在自然条件下宽叶弹簧草生长缓慢，繁殖率较低；同时国际多肉植物研宄组织(TheInternat1nal Organizat1n for Succulent Plant Study)为了保护野生多肉植物免遭掠夺性采集甚至灭绝的威胁，已经在70年代制定了《多肉植物栽培知识及收集者的行为守则》，极大地限制了我国的多肉植物引种工作，使得目前宽叶弹簧草的市售价格居高不下，其推广和应用受到制约。然而，利用植物组织培养技术进行宽叶弹簧草的快速繁殖可以在短期内获得大量与母株遗传背景一致的优质种苗，这对于满足国内外对于宽叶弹簧草的市场需求、保护珍稀的宽叶弹簧草种质资源具有重要的意义。但是，在此之前还没有建立弹簧草组织培养的报道，更没有通过花蕾诱导宽叶弹簧草鳞茎和植株再生的成功实例。 【专利
技术实现思路
】 本专利技术的目的在于克服现有技术存在的不足，而提供。 本专利技术的目的是通过如下技术方案来完成的。这种通过花蕾进行宽叶弹簧草鳞茎诱导和植株再生的方法，主要包括如下步骤: I)、培养基的配制: (I)基本培养基:MS培养基，其中蔗糖20?30g/L，琼脂5?9g/L，pH = 5.8 ； (2)诱导培养基:MS+6-BA 3 ?6mg/L+NAA0.2 ?1.0mg/L ； (3)增殖培养基:MS+6-BA 0.5 ?1.0mg/L+NAA0.05 ?0.2mg/L ； (4)壮苗生根培养基:MS+6-BA 0.01 ?0.05mg/L+NAA0.05 ?0.2mg/L ； 2)外植体的选取与消毒:取宽叶弹簧草的幼嫩花序，将花蕾清洗消毒后备用； 3)鳞茎的诱导及增殖:将步骤2)消毒处理后的花蕾在无菌条件下接种于诱导培养基上，经I?2个月后直接诱导出鳞茎，将鳞茎转接到增殖培养基上进行增殖培养； 4)壮苗生根培养:将步骤3)鳞茎在无菌条件下分割成单株后转接到壮苗生根培养基上，培养20?40天后可成为具有Icm幼根的壮苗； 5)移栽:将步骤4)生根后的壮苗从培养瓶中取出并清洗后移栽至基质中栽培。 进一步地，本专利技术在所述步骤I)中，所述的培养基包括基本培养基和组培各阶段培养基的组分具体为: (I)基本培养基:MS培养基，其中蔗糖30g/L，琼脂7.5g/L，pH = 5.8 ； (2)诱导培养基:MS+6-BA 4.0mg/L+NAA 0.5mg/L ； (3)增殖培养基:MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.05mg/L ； (4)壮苗生根培养基:MS+6-BA 0.01mg/L+NAA 0.lmg/L。 进一步地，本专利技术在所述步骤2)中，所述的消毒处理是是去除花序上闭合花蕾的外包片，再将花蕾连同部分花葶逐个切下，先用饱和洗衣粉溶液浸泡30?60min后，再用自来水冲洗干净，然后依次在体积比为70%的酒精和有效氯浓度为1%的次氯酸钠溶液中分别浸泡0.5?Imin和4?7min，最后用无菌水冲洗3?5次； 进一步地，本专利技术在所述步骤3)中，所述消毒处理后的花蕾，先用解剖刀将其基部切伤后接种于诱导培养基上，并使伤口接触到培养基；培养I?2个月可从花蕾伤口处直接诱导出鳞茎； 进一步地，本专利技术在所述步骤4)中，所述鳞茎分割成单株后转接到壮苗生根培养基上培养20?40天后可直接成为具有Icm幼根的壮苗。 本专利技术的有益效果为:利用植物组织培养技术对宽叶弹簧草的花蕾进行了鳞茎的直接诱导和植株再生，并同时进行壮苗和生根培养，简化了组培操作程序，能够在较短时间内获得大量遗传性状一致的优质壮苗，克服了母本稀缺及常规繁殖方法慢的缺点，对保护种质资源和工厂化的种苗生产都具有积极意义。 【具体实施方式】 下面通过【具体实施方式】对本专利技术作进一步阐述，实施例将帮助更好地理解本专利技术，但本专利技术并不仅仅局限于下述实施例。 本专利技术提供了，其步骤为: I)、培养基的配制 (I)基本培养基:MS培养基，其中蔗糖20?30g/L，琼脂5?9g/L，pH = 5.8 ； (2)诱导培养基:MS+6-BA 4 ?8mg/L+NAA0.05 ?0.5mg/L ； (3)分化培养基:MS+6-BA 0.05 ?0.5mg/L+NAA 0.05 ?0.5mg/L ； (4)增殖培养基:MS+6-BA 0.5 ?1.0mg/L+NAA 0.05 ?0.2mg/L ； (5)壮苗培养基:MS+6-BA 0.05 ?0.lmg/L+NAA 0.05 ?0.lmg/L ； 2)、外植体的选取与灭菌 取宽叶弹簧草的幼嫩花序，去除花序上闭合花蕾的外包片，再将花蕾连同部分花葶逐个切下，先用饱和洗衣粉溶液浸泡30?60min后，再用自来水冲洗干净，然后依次在体积比为70%的酒精和有效氯浓度为I %的次氯酸钠溶液中分别浸泡0.5?Imin和4?7min，最后用无菌水冲洗3?5次； 3)、鳞茎的诱导及增殖培养 将消毒处理后的花蕾在无菌条件下先用解剖刀将其基部切伤后接种于诱导培养基上，并使伤口接触到培养基。经I?2个月后培养I?2个月可从花蕾伤口处直接诱导处鳞茎，将鳞茎转接到增殖培养基上进行增殖培养；培养温度为23±2°C、光照强度为30?60 μ mo I.m 2.s \光照时间为8?10小时/天； 4)、壮苗生根培养 将鳞茎分割成单株后转接到壮苗生根培养基上培养20?40天后可形成具有Icm幼根的壮苗；培养温度为23±2°C、光照强度为30?80 ymol.πΓ2.s—1、光照时间为8?10小时/天； 5)、移栽 将生根后的壮苗从培养瓶中取出并清洗后移栽至基质中栽培，移栽成活率90%左右。 实施例 本专利技术提供了，其步骤为: I)、培养基的配制 (I)基本培养基:MS培养基，其中蔗糖30g/L，琼脂7.5g/L，pH = 5.8 ； (2)诱导培养基:MS+6-BA 4.0mg/L+NAA 0.5mg/L ； (3)增殖培养基:MS+6_BA 0.5mg/L+NAA 0.05mg/L ； (4)壮苗生根培养基:MS+6-BA 0.0 lmg/L+NAA 0.lmg/L。 2)、外植体的选取与灭菌 取宽叶弹簧草的幼嫩花序，去除花序上闭合花蕾的外包片，再将花蕾连同部分花葶逐个切下，先用饱和洗衣粉溶液浸泡60min后，再用自来水冲洗干净，然后依次在体积比为70%的酒精和有效氯浓度为I %的次氯酸钠溶液中分别浸泡Imin和6min，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种通过花蕾进行宽叶弹簧草鳞茎诱导和植株再生的方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：1)、培养基的配制：(1)基本培养基：MS培养基，其中蔗糖20～30g/L，琼脂5～9g/L，pH＝5.8；(2)诱导培养基：MS+6‑BA 3～6mg/L+NAA0.2～1.0mg/L；(3)增殖培养基：MS+6‑BA 0.5～1.0mg/L+NAA0.05～0.2mg/L；(4)壮苗生根培养基：MS+6‑BA 0.01～0.05mg/L+NAA0.05～0.2mg/L；2)外植体的选取与消毒：取宽叶弹簧草的幼嫩花序，将花蕾清洗消毒后备用；3)鳞茎的诱导及增殖：将步骤2)消毒处理后的花蕾在无菌条件下接种于诱导培养基上，经1～2个月后直接诱导出鳞茎，将鳞茎转接到增殖培养基上进行增殖培养；4)壮苗生根培养：将步骤3)鳞茎在无菌条件下分割成单株后转接到壮苗生根培养基上，培养20～40天后可成为具有1cm幼根的壮苗；5)移栽：将步骤4)生根后的壮苗从培养瓶中取出并清洗后移栽至基质中栽培。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王燕，汪一婷，牟豪杰，吕永平，陈志，陈剑平，
申请(专利权)人：浙江省农业科学院，
类型：发明
国别省市：浙江;33