一种基于表面等离子体共振成像生物传感器芯片的蛋白质固定方法技术

本发明专利技术提供了一种基于表面等离子共振成像生物传感器芯片的蛋白质固定方法，该方法通过建立用于蛋白质固定的模型，根据模型来优化芯片表面的化学修饰，控制活性位点之间的距离，从而能够在表面等离子共振成像生物传感器芯片上固定蛋白质。通过本发明专利技术的方法保证了蛋白质的单点固定，从而避免了因蛋白质被多点固定而导致的失活，并且通过表面等离子共振成像技术确认了通过此方法固定蛋白质能够获得优化的检测信号。

【技术实现步骤摘要】
一种基于表面等离子体共振成像生物传感器芯片的蛋白质固定方法
本专利技术属于蛋白质芯片阵列领域，涉及一种基于表面等离子体共振成像生物传感器芯片的蛋白质固定方法。
技术介绍
在免疫检测领域，包被抗体(一抗)的定向排列引起了广泛的兴趣和关注。在传统检测中，包被抗体被动地吸附在基底(通常是热塑性聚合物，例如聚苯乙烯)表面，使得仅仅20～30％的包被抗体获得了理想的取向而拥有检测活性。在典型的免疫检测中，对包被抗体的非有效固定问题一直少有关注。通常包被抗体被过量地固定在固相表面，以保证有足够多的抗体吸附在表面时具有合适的取向，用以产生可靠的检测信号。然而，当扩展到微米或纳米层面的应用时，固定在表面的抗体需要将一定浓度的Fc端暴露在外面来保证获得足够的检测信号，此时包被抗体错误的取向固定会产生更大的问题。直接取向固定包被抗体是提升检测性能的有效手段，据WilsonDS和KnockS报道，通过直接取向固定包被抗体使信号提高可达10倍，这在微纳米层面的应用中体现更为突出。将抗体固定在基底表面有多种方法，包括吸附固定、共价固定和亲和固定，对于取向固定抗体也有一些相应的技术。目前，大多数直接固定抗体的工本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于表面等离子共振成像生物传感器芯片的蛋白质固定方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)建立用于蛋白质固定的模型；(2)根据所述模型优化芯片表面的化学修饰；(3)在芯片上固定蛋白质；(4)利用表面等离子共振成像来检测固定的蛋白质的信号。

【技术特征摘要】
1.一种基于表面等离子共振成像生物传感器芯片的蛋白质固定方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)建立用于蛋白质固定的模型；(2)根据所述模型优化芯片表面的化学修饰；(3)在芯片上固定蛋白质；(4)利用表面等离子共振成像来检测固定的蛋白质的信号；步骤(1)所述用于蛋白质固定的模型为：其中l为硫醇直径，r为活性末端之间的平均距离，DF为活性末端硫醇溶液被同浓度非活性末端硫醇溶液稀释的倍数；所述用于蛋白质固定的模型的推导过程如下：A＝a*DF(I)考虑a≈l2并且代入式(I)得到：A＝l2*DF(II)考虑活性末端硫醇在有效区域的中心，有效区域假设为正方形，所以r可以如下计算：将式(II)代入式(III)得出所述模型，其中a为硫醇面积，A为平均一个活性末端硫醇分子所占的有效面积。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述优化芯片表面的化学修饰包括以下步骤：(A)根据所述模型确定活性末端硫醇溶液被同浓度非活性末端硫醇溶液稀释的倍数DF；(B)清洗芯片，氮气吹干，放入等离子体清洗仪中清洗3分钟；(C)配制混合硫醇溶液：将活性末端硫醇溶液用同浓度非活性末端硫醇溶液稀释DF倍，制成混合硫醇溶液；(D)将芯片浸入配制好的混合硫醇溶液中，4℃恒温孵育过夜，取出芯片，清洗芯片表面，氮气吹干，备用。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述活性末端硫醇为羧基末端硫醇、醛基末端硫醇、酰基末端硫醇、环氧基末端硫醇、卤代烃基末端硫醇、氰基末端硫醇或酯基末端硫醇中的任意一种。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述非活性末端硫醇为烷基末端硫醇、烷氧基末端硫醇和羟基末端硫醇中的任意一种。5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(B)和步骤(D)中在氮气吹干...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱劲松，哈维尔·巴蒂斯塔·佩雷斯，杨墨，迪彭德拉·特亚吉，埃内斯托·莫雷诺，洛尼·卡尔沃，程志强，李少鹏，周文菲，
申请(专利权)人：国家纳米科学中心，
类型：发明
国别省市：北京;11