本发明专利技术公开一种血清不饱和铁结合力检测试剂盒，其中试剂1、试剂2中的各组分及浓度范围为：试剂1：碱性缓冲液pH7.5～90.1-1.0mol/L过量铁离子1～5mmol/L表面活性剂0.1％-1.0％去干扰剂0～100mmol/L水溶性碳酸盐或水溶性碳酸氢盐0～200mmol/L防腐剂0～1.0％；试剂2：酸性缓冲液pH1.0～6.0 0.05-0.5mol/L抗坏血酸0～500mmol/L稳定剂0～100mmol/L表面活性剂0.1％～1.0％防腐剂0～1.0％；上述试剂盒中还包括在试剂1中或在试剂2中的色原0.1～30mmol/L。本发明专利技术具有可显著缩短显色时间并提高试剂检测血清不饱和铁结合力的准确度、精密度，显色后稳定时间长的优点。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开一种血清不饱和铁结合力检测试剂盒，其中试剂1、试剂2中的各组分及浓度范围为：试剂1：碱性缓冲液pH7.5～90.1-1.0mol/L过量铁离子1～5mmol/L表面活性剂0.1％-1.0％去干扰剂0～100mmol/L水溶性碳酸盐或水溶性碳酸氢盐0～200mmol/L防腐剂0～1.0％；试剂2：酸性缓冲液pH1.0～6.0 0.05-0.5mol/L抗坏血酸0～500mmol/L稳定剂0～100mmol/L表面活性剂0.1％～1.0％防腐剂0～1.0％；上述试剂盒中还包括在试剂1中或在试剂2中的色原0.1～30mmol/L。本专利技术具有可显著缩短显色时间并提高试剂检测血清不饱和铁结合力的准确度、精密度，显色后稳定时间长的优点。【专利说明】一种血清不饱和铁结合力检测试剂盒
本专利技术涉及医学检验
，具体涉及一种用于血清不饱和铁结合力测定的检 测试剂盒。
技术介绍
人体含铁量约4g，其中2/3存在于红细胞血红蛋白中，其余1/3则储备在肝、脾 和骨髓中，有Fe2+和Fe3+两种形式，血清中的Fe3+全部与转铁蛋白结合。转铁蛋白又称 为运铁蛋白（Transferrin，TRF)，负责运输体内由消化管吸收的铁和由红细胞降解的铁， 以TRF-Fe3+的复合物形式进入骨髓中，供成熟红细胞的生成。通常血清中只有1/3的转 铁蛋白与铁结合，其余2/3未结合，转铁蛋白这种潜在的结合铁的能力称为不饱和铁结 合力UIBC(UnsaturatedIronBindingCapacity),能结合的最大铁量称为总铁结合力 TIBC(TotalIronBindingCapacity),等于血清铁与不饱和铁结合力之和。TIBC测定可用 于辅助临床疾病诊断，如缺铁性贫血、急性肝炎等疾病会引起TIBC增高，肝硬化、肾病、尿 毒症、慢性感染、白血病及遗传性转铁蛋白缺乏症等则会引起TIBC降低。TIBC亦可间接反 映转铁蛋白的水平，有重要的临床意义。 总铁结合力（TIBC)、不饱和铁结合力（UIBC)的测定，根本上是基于血清中铁的测 定，即先将转铁蛋白用过量铁标准溶液饱和后，再通过测定体系中的铁来得到。 血清铁的测定方法有原子吸收法、电化学法、比色法等。原子吸收法与电化学法虽 样品用量少，分析时间短，但因需要专门的测试仪器，且价格昂贵，应用范围有限，目前在临 床实验室广泛使用的是比色法。临床血清铁比色法测定原理：在酸性条件下使Fe3+与转铁 蛋白解离，并加入还原剂（例如羟胺、抗坏血酸、巯基乙酸、肼等）将Fe3+还原成Fe2+，再用 一种能与亚铁离子络合的色原去络合亚铁离子，然后进行比色测定。临床广泛使用的色原 有亚铁嗪、呋喃三嗪二钠盐（ferene)、红菲绕啉（BPZ)、三吡啶基三啉（TPZ)等。 传统TIBC测定是在碱性条件（pH8. 0?8. 9)下，向血清中加入过量的Fe3+标准 溶液，使转铁蛋白饱和，剩余的未结合的铁加轻质碳酸镁（也可用其他吸附剂如铁交换树 月旨、氧化铝柱或磁珠等）吸附，然后离心沉淀除去，取上层血清，按血清铁测定铁含量，即为 总铁结合力。该法要除去多余的铁，需沉淀、离心等手工操作，样本需用量大，处理繁琐耗时 长，不适于临床大量样本检测和自动化。 Hachiro Yamanishi (Clinical Chemistry, 2002:1565-1570)报道了用3试剂法直 接测定血清总铁结合力，不用除去饱和转铁蛋白多余的铁，简化了测定步骤，具有重要的临 床意义，但因3试剂需用特殊加样功能的全自动生化仪，不能在一般生化仪上使用而限制 了发展；专利CN101226152介绍了一种直接测定血清总铁结合力的试剂方法。 目前发展比较成熟的是计算法，即由不饱和铁结合力加上血清铁计算总铁结合 力，市场上已开发有血清铁和不饱和铁结合力检测试剂盒，可以在自动生化仪上进行快速 测定。不饱和铁结合力测定原理：向血清样本中加入含过量铁离子的碱性缓冲液，使未与铁 结合的转铁蛋白全部与铁离子结合，剩余的铁离子在还原剂、显色剂作用下生成有色物质， 在特定波长下测定吸光度，计算缓冲液中铁离子的减少量即为血清的不饱和铁结合力。 目前最广泛使用的还原剂为抗坏血酸（维生素C)，可使Fe3+还原为Fe2+，因抗 坏血酸在溶液状态下不稳定、易分解，试剂中常需加入其他具有维持VC稳定性的物质，US patent5420008中除VC外，还添加巯基乙酸、硫代苹果酸、L-半胱氨酸、N-乙酰半胱氨酸、 β-巯基乙醇、β-巯基丙酸、还原型谷胱甘肽、DTT等含巯基的还原性物质或盐酸羟胺来 保持VC的稳定性；专利文献JP49092219A、5903M68B中提到使用偏磷酸盐、N-乙酰半胱 氨酸、亚硫酸盐有利于维持抗坏血酸溶液的稳定，在室温下储存4周后保存约80% ;N-乙 酰半胱氨酸并添加亚硫酸盐，可稳定10天JP6247855A中采用焦亚硫酸钠作为稳定剂； CN201110233022中综合专利文献中添加还原性稳定物质并代替巯基类化合物得到一种无 不良气味、稳定性好的测定血清不饱和铁结合力试剂。 转铁蛋白与铁的结合是可逆的，在pH7. 5?9条件下，二者结合很稳定，在酸性 条件或pH>9时，转铁蛋白会与铁解离，因此测定血清不饱和铁结合力的测定试剂组分为： pH7. 5?9的碱性缓冲液、过量铁离子（硫酸铁、氯化铁、硫酸铁铵、硫酸亚铁铵、氯化亚铁 等）、强还原剂及色原。以往专利文献中配制PH7. 5?9的碱性缓冲液多为Tris缓冲液、 三乙醇胺缓冲液、硼酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液等，这些缓冲液与铁离子都有一定的结合能 力，加入还原剂和色原后显色时间较长，但显色后稳定时间有比较短，造成检测的准确度和 精密度不理想，不利于临床检测应用。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术的上述不足，提供一种可显著缩短显色时间并提高试剂检测 血清不饱和铁结合力的准确度、精密度，显色后稳定时间长的血清不饱和铁结合力测定试 剂盒。 为了解决上述技术问题，本专利技术的血清不饱和铁结合力测定试剂盒，由试剂1和 试剂2组成，其中试剂1包括含过量铁离子（水溶性盐）的碱性缓冲液、表面活性剂、去干 扰剂、防腐剂，试剂2包括缓冲液、抗坏血酸、稳定剂、表面活性剂。 另色原亦是试剂的重要组成成分，可与亚铁离子络合生成有色物质，呈色稳定，在 特定波长下有特定的吸光度，所述色原可包括在试剂1中，也可添加在试剂2中，择一添加。 具体的，本专利技术的血清不饱和铁结合力测定试剂盒，其中试剂1、试剂2各组分及 浓度范围为： 试剂 1 :碱性缓冲液（ρΗ7· 5 ?9) 0· 1-1.Omol/L 过量铁离子（水溶性盐）1?5mmol/L 表面活性剂0· 1% -1. 0% 去干扰剂0?100mmol/L 水溶性碳酸盐或水溶性碳酸氢盐0?200mmol/L 防腐剂0?1. 0%(质量百分比）； 试剂 2 :缓冲液（pHL0 ?6. 0) 0· 05-0. 5mol/L 抗坏血酸0?SOOmmol/T, 稳定剂0?10Ommol/T, 表面活性剂0· 1%?1. 0%(质量百分比） 防腐剂0?本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种血清不饱和铁结合力检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒由试剂1和试剂2组成，其中试剂1、试剂2中的各组分及浓度范围为：试剂1：碱性缓冲液pH7.5～9 0.1‑1.0mol/L，过量铁离子1‑5mmol/L，表面活性剂0.1％‑1.0％，去干扰剂0～100mmol/L，水溶性碳酸盐或水溶性碳酸氢盐0‑200mmol/L，防腐剂0‑1.0％；试剂2：酸性缓冲液pH1.0～6.0 0.05‑0.5mol/L，抗坏血酸0‑500mmol/L，稳定剂0‑100mmol/L，表面活性剂0.1％‑1.0％，防腐剂0‑1.0％；上述试剂盒中还包括在试剂1中或在试剂2中的色原0.1～30mmol/L。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：邹继华，古咏梅，吴立山，
申请(专利权)人：宁波美康生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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