本发明专利技术提供抗体，所述抗体结合人CC趋化因子受体4(CCR4)的胞外域的表位并能够抑制巨噬细胞来源的趋化因子(MDC)和/或胸腺和激活调节的趋化因子(TARC)与CCR4的结合。本发明专利技术还提供特别是在医药和诊断领域中，包含这样抗体的免疫交联物和组合物以及包括这样抗体的方法和应用。
【技术实现步骤摘要】
抗体 本申请是申请日为2010年6月9日、中国专利申请号201080035456. 1、专利技术名称 为抗体的专利技术专利申请的分案申请。
本专利技术一般涉及抗体、CCR4生物学和相关的治疗领域。更具体地，本专利技术提供了 与CCR4结合的抗体。这样的抗CCR4抗体具有诊断和治疗与CCR4相关的疾病和状况的应 用，如肿瘤血管成像、治疗癌症及治疗病毒和其它感染、和炎症及免疫疾病。本专利技术的基于 抗体的组合物和方法同样延伸至免疫交联物和其它治疗组合物、试剂盒和方法的应用。
技术介绍
G蛋白偶联受体（GPCR)有800多个成员，代表了涉及信号传输的细胞表面分子的 最大家族，占>2%的人类基因组编码的全部基因。GPCR超家族的成员具有一种共同的膜拓 扑结构：细胞外的N末端、细胞内的C末端和七次跨膜（TM)螺旋，其通过三个细胞内的环和 三个细胞外的环连接。基于它们共同的拓扑结构，GPCR也被认为是七次跨膜（7TM)受体。 这些受体控制关键的生理机能，包括神经传递、从内分泌腺和外分泌腺释放激素和酶、免疫 反应、心肌和平滑肌收缩及血压调节。它们的功能紊乱与一些最流行的人类疾病有关。呈 现的实验数据和临床数据显示：GPCR在癌症的进程和转移中具有至关重要的作用。因此， 有一种可能：一些GPCR可能是抗癌药物的合适目标。 趋化因子在多种疾病和失调的免疫和炎症应答中起重要作用，所述疾病和失调包 括癌症、病毒感染、哮喘和过敏性疾病以及自身免疫病状如风湿性关节炎和动脉硬化。这些 小的、分泌的分子是逐渐增长的8-14kDa蛋白超家族，其特征是保守的四个半胱氨酸基序。 研究已经证明：趋化因子的作用通过G蛋白偶联受体的亚家族介导，其中的受体 是被指定为趋化因子（C-C基序）受体4或CC趋化因子受体4(CCR4)的受体。CCR4的具 体配体包括趋化因子胸腺和激活调节的趋化因子（TARC)(也被认为是CCL17)和源于巨噬 细胞的趋化因子（MDC)(也被认为是CCL22)。CCR4也可以与RANTES、MCP-I和MIP-I α结 合，且已经报导了响应这些配体的CCR4信号转导。 已经认为CCR4在T细胞趋化作用和吞噬细胞迁移至炎症位点中是重要的。优选 地，CCR4在辅助性T细胞2型（Th2)细胞和调节性T(Treg)细胞上表达；然而在其它健康 细胞或组织上仅发生有限量的表达。 肿瘤细胞，特别是成人T细胞白血病/淋巴瘤细胞，可能为CCR4阳性。肿瘤细胞表 达CCR4与皮肤相关联。一些T细胞恶性肿瘤典型地定位在皮肤上。例如，在皮肤T细胞淋巴 瘤病变中发现高水平的〇^4。最近，已经发现一些实体瘤同样表达0^4(102009/037454)。 CCR4的表达被认为是实体瘤，特别是宫颈癌、食道癌、肾癌、脑癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、 胃癌和胰腺癌癌变的早期事件。因此，血液癌细胞和非血液癌细胞都可以表达CCR4。因此， 可以使用抗CCR4抗体诊断、监测和治疗这些癌症。 此外，CCR4在常规免疫和肿瘤免疫中具有重要作用。重要部分的⑶4+⑶25+调节 性T细胞（Treg)为CCR4阳性（Baatar等，2007b)。这些Treg通过多种机制抑制免疫反 应，并且已经显示它们可以抑制肿瘤特异的免疫性。在多种癌症中，浸润基质、肿瘤本身或 引流淋巴结的Treg的数量增加与恶化的结果相关。在小鼠模型中的研究表明：降低Treg 活性导致内源抗肿瘤免疫性增加以及通过免疫系统的抗肿瘤专利技术的功效增强。因此，抑制 Treg功能在肿瘤的免疫疗法中是有前景的方案。所述抑制可以通过杀死Treg (耗尽）、干 扰它们的抑制剂作用、改变它们的通讯模式或改变它们的分化而实现。 在一组患有CCR4+T细胞白血病/淋巴瘤的患者中，所述肿瘤细胞本身作为Treg 细胞，使肿瘤在面对宿主抗肿瘤免疫反应时能够存活。在其它类型的癌症中，MDC和TARC 由肿瘤细胞和肿瘤微环境产生，并将CCR4+Treg细胞吸引至肿瘤，在这里它们创造了使肿 瘤从宿主免疫反应中逃脱的有利环境。已经报导了在患有以下癌症的病患的外周血中具 有更高频率的Treg :乳癌、结肠直肠癌、食管癌、胃癌、肝细胞癌、肺癌、黑色素瘤、卵巢癌和 胰腺癌。已经报导Treg细胞为肿瘤创造了一种有利的环境。因此，阻止CCR4和它的配体 (如MDC)之间交互作用对治疗或预防癌症、特别是上面列出的癌症是有用的。已经报导：在 SCID小鼠模型中，抗人MDC/CCL22抗体能够阻止人Treg细胞渗透至移植的人卵巢肿瘤中。 据认为，存在于人实体瘤中的Treg细胞防止免疫效应物反应发展，其可能对减慢肿瘤生长 和转移有作用。因此，通过使用抗CCR4的中和MAb (单克隆抗体）杀死肿瘤块中的Treg细 胞和/或防止Treg细胞转移至肿瘤位点可以导致针对实体瘤的增强的免疫反应，并作为惯 例的细胞毒素疗法或抗激素疗法的辅助。 癌症引起大约13%的人类死亡。根据美国癌症协会的资料，在2007年，全世界有 七百六十万人死于癌症，因此仍然强烈和迫切地需要更多的抗肿瘤疗法。 CCR4已经显示在炎症和免疫失调中起作用。Th2细胞和嗜碱细胞是在肺和皮肤的 过敏性反应中的关键细胞。已经有许多报导描述了表达CCR4的T细胞的存在以及伴随着 CCR4配体（MDC、TARC)在过敏原激发的哮喘的支气管活组织切片中的气道上皮细胞上的表 达（Panina-Bordignon等，2001)。同样在患有遗传过敏性皮炎的病患中发现数量增加的 CCR4+T细胞，当疾病转好时，发现CCR4+T细胞显著减少。使用人源化的哮喘SCID小鼠模型， 结果显示：在过敏原刺激之前用抗体封闭CCR4减少了过敏性气道炎症以及肺中的Th2细胞 因子水平。对于哮喘病患，通过肺递送封闭抗体耗尽CCR4+T细胞可能是合适的治疗选择。 对于遗传过敏性皮炎，将CCR4封闭抗体靶定递送至皮肤可能也是一种有吸引力的治疗。 在过敏性哮喘中，高水平的过敏原特异的IgE的存在反映了对普通吸入的环境过 敏原的异常的Th2细胞免疫反应。哮喘的特点是Th2淋巴细胞和嗜酸性粒细胞的浸润以及 Th2趋化因子的产生。过敏原通过树突细胞（DC)出现在T细胞上，所述树突细胞持续地采取 进入的外来抗原。基于通过DC的合适的活化作用，存在于患病气道中的过敏原特异的淋巴 细胞生产1112细胞因子白介素（11^)-4、11^-5和11^-13，它们进一步地控制白细胞溢出、杯状 细胞增生和支气管过度反应性（BHR)。由DC产生的TARC和MDC通过引发CCR4诱导了 Th2 细胞而非Thl细胞的选择性转移（Perros等，2009)。在哮喘的鼠科动物模型中已经显示： 在过敏原刺激之后，使用抗TARC抗体的治疗减少了支气管肺泡灌洗（BAL)流体中CD4+T细 胞和嗜酸性粒细胞的数量、Th2细胞因子的产生和气道过度反应（Kawasaki等，2001)。相 反，缺乏CCR4的小鼠显示了对气道炎症和BHR没有保护作用（Chvatchko等，2000)。使用 哮喘的人源化SCID小鼠模型显示：在过敏原刺激之前用抗体封闭CCR4减少了过敏性气道 炎症并肺中降低了 Th2细胞因子水平（Perros本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种抗体在制备用于治疗由CCR4介导的疾病或特征是CCR4+细胞的异常增殖的疾病的药物中的应用，其中，所述疾病选自癌症、炎症疾病、免疫疾病或传染病；其中，所述抗体是一种分离的人抗体，所述抗体结合人CC趋化因子受体4(CCR4)的胞外域中的表位并能够抑制巨噬细胞来源的趋化因子(MDC)和/或胸腺和激活调节的趋化因子(TARC)与CCR4的结合，其中，所述抗体(a)包括至少一个包含三个CDR的重链可变区和至少一个包含三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包括：(i)氨基酸序列为SEQ ID NO:7的可变重链(VH)CDR1；(ii)氨基酸序列为SEQ ID NO:8的VH CDR2；和(iii)氨基酸序列为SEQ ID NO:9的VH CDR3；和其中所述轻链可变区包括：(iv)氨基酸序列为SEQ ID NO:10的可变轻链(VL)CDR1；(v)氨基酸序列为SEQ ID NO:11的VL CDR2；和(vi)氨基酸序列为SEQ ID NO:12的VL CDR3；或(b)是可以与抗体(a)竞争结合人CCR4的抗体，并且包括至少一个包含三个CDR的重链可变区和至少一个包含三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包括：(i)氨基酸序列为SEQ ID NO:101的可变重链(VH)CDR1；(ii)氨基酸序列为SEQ ID NO:8的VH CDR2；和(iii)氨基酸序列为SEQ ID NO:9的VH CDR3；以及其中所述轻链可变区包括：(iv)氨基酸序列为SEQ ID NO:10的可变轻链(VL)CDR1；(v)氨基酸序列为SEQ ID NO:11的VL CDR2；和(vi)氨基酸序列为SEQ ID NO:12的VL CDR3；或(c)是可以与抗体(a)竞争结合人CCR4的抗体，并且包括至少一个包含三个CDR的重链可变区和至少一个包含三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包括：(i)氨基酸序列为SEQ ID NO:1的可变重链(VH)CDR1；(ii)氨基酸序列为SEQ ID NO:2的VH CDR2；和(iii)氨基酸序列为SEQ ID NO:3的VH CDR3；以及其中所述轻链可变区包括：(iv)氨基酸序列为SEQ ID NO:4的可变轻链(VL)CDR1；(v)氨基酸序列为SEQ ID NO:5的VL CDR2；和(vi)氨基酸序列为SEQ ID NO:6的VL CDR3。...
【技术特征摘要】
2009.06.09 GB 0909906.0;2009.06.09 US 61/185,448;21. 一种抗体在制备用于治疗由CCR4介导的疾病或特征是CCR4+细胞的异常增殖的疾 病的药物中的应用，其中，所述疾病选自癌症、炎症疾病、免疫疾病或传染病；其中，所述抗 体是一种分离的人抗体，所述抗体结合人CC趋化因子受体4 (CCR4)的胞外域中的表位并能 够抑制巨噬细胞来源的趋化因子（MDC)和/或胸腺和激活调节的趋化因子（TARC)与CCR4 的结合，其中，所述抗体 (a) 包括至少一个包含三个⑶R的重链可变区和至少一个包含三个⑶R的轻链可变区， 其中所述重链可变区包括： (i) 氨基酸序列为SEQ ID N0:7的可变重链（VH)⑶R1 ; (ii) 氨基酸序列为SEQ ID N0:8的VH CDR2 ;和 (iii) 氨基酸序列为SEQ ID N0:9的VH CDR3 ;和 其中所述轻链可变区包括： (iv) 氨基酸序列为SEQ ID N0:10的可变轻链（VL)CDRl ; (v) 氨基酸序列为SEQ ID N0:11的VL CDR2 ;和 (vi) 氨基酸序列为SEQ ID NO: 12的VL CDR3 ; 或 (b) 是可以与抗体（a)竞争结合人CCR4的抗体，并且包括至少一个包含三个CDR的重 链可变区和至少一个包含三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包括： (i) 氨基酸序列为SEQ ID N0:101的可变重链（VH)⑶R1 ; (ii) 氨基酸序列为SEQ ID N0:8的VH CDR2 ;和 (iii) 氨基酸序列为SEQ ID N0:9的VH CDR3 ; 以及其中所述轻链可变区包括： (iv) 氨基酸序列为SEQ ID N0:10的可变轻链（VL)CDRl ; (v) 氨基酸序列为SEQ ID N0:11的VL CDR2 ;和 (vi) 氨基酸序列为SEQ ID NO: 12的VL CDR3 ; 或 (c) 是可以与抗体（a)竞争结合人CCR4的抗体，并且包括至少一个包含三个CDR的重 链可变区和至少一个包含三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包括： (i) 氨基酸序列为SEQ ID N0:1的可变重链（VH)⑶R1 ; (ii) 氨基酸序列为SEQ ID N0:2的VH...
【专利技术属性】
技术研发人员：拉维尼娅·黛安娜·奇科尔塔什·贡纳松，迪德里克·派于斯，
申请(专利权)人：奥菲技术科学研究院，
类型：发明
国别省市：挪威;NO
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