ACE2多肽制造技术

本发明专利技术涉及重组ACE2多肽，其中所述ACE2多肽以二聚体存在。所述二聚体特别地由糖基化的单体形成并且被用于制备具有延长的半衰期的药学产品。

【技术实现步骤摘要】
本分案申请是基于申请号为200880100650.6(国际申请号为PCT/AT2008/000211)，申请日为2008年6月12日，专利技术名称为“ACE2多肽”的原始中国专利申请的分案申请。本专利技术涉及重组蛋白质生产的领域。血管紧张素转化酶(ACE2)是肾素-血管紧张素系统的关键酶。它作为羧肽酶锚固于膜上，作为受体主要在肺细胞、肾细胞和心脏细胞以及内皮细胞上表达并裂解各种肽底物。知名的代表底物是血管紧张素-II(Ang II)，其被裂解为血管紧张素1-7(Ang1-7)；血管紧张素-I，其被裂解为血管紧张素1-9；同样地，还有apelin和缓激肽。Ang II和Ang1-7是肾素-血管紧张素系统的拮抗剂。ACE2通过控制肽比例而决定性地负责血管厚度的调整以及内皮细胞的通透性并因此影响有机体的内环境稳定。ACE2的表达尤其受细胞因子调节并且在各种炎症中降低，这继而导致Ang II(ACE2最重要的底物之一)的病理性增加。ACE2用于治疗急性肺病的两种形式ARDS或ALI，本文档来自技高网...

【技术保护点】
重组ACE2多肽，其以二聚体存在。

【技术特征摘要】
2007.06.12 AT A913/2007;2008.04.08 EP 08450052.91.重组ACE2多肽，其以二聚体存在。
2.根据权利要求1的重组ACE2多肽，其特征在于，它被糖基化，
其中ACE2多肽单体的糖基基团具有总共至少14个唾液酸残基。
3.根据权利要求2的重组ACE2多肽，其特征在于，可能的N-
糖基化位点的至少80％被糖基化并且具有大于10％(质量％，相对于
整个ACE2分子)，优选大于15％，特别地大于20％的糖部分。
4.根据权利要求1、2或3的重组ACE2多肽，其特征在于，糖
基化的N-糖基化位点的至少70％相互独立地选自式1-8的结构：
其中，
5.根据权利要求1至4之一的重组ACE2多肽，其特征在于，所
有可能的N-糖基化位点是都被糖基化的。
6.根据权利要求1至5之一的重组ACE2多肽，其特征在于，至
少80％，优选至少90％，特别地100％的糖基化的N-糖基化位点具有
式1-8的结构。
7.根据权利要求1至6之一的重组ACE2多肽，其特征在于，所
述二聚体的ACE2单体单位具有至少90kDa，优选至少92kDa，尤其
优选至少94kDa,特别是至少96kDa，特别优选至少98kDa，最优
选至少101kDa的分子量。
8.根据权利要求1至7之一的重组ACE2多肽，其特征在于，所
述ACE2多肽不具有跨膜结构域，优选ACE2多肽链由SEQ ID NO:1
的氨基酸18-740或其酶活性片段组成。
9.根据权利要求1至8之一的重组ACE2多肽，其特征在于，与
SEQ ID NO:1的Ser740相应的丝氨酸是O-糖基化的。
10.根据权利要求1至9之一的重组ACE2多肽，其特征在于，至
少70％，优选地至少80％，特别是至少90％，最优选100％的糖基化
的N-糖基化位点具有唾液酸，优选与SEQ ID NO:1的Asn53、Asn90、
Asnl03、Asn322、Asn432、Asn546、Asn690对应的N-糖基化位点被
唾液酸化。
11.根据权利要求1至10之一的重组ACE2多肽，其特征在于，
至少30％，优选至少40％，特别是至少55％，最优选至少70％的糖
基化的N-糖基化位点具有两个唾液酸。
12.根据权利要求1至11之一的重组ACE2多肽，其特征在于，
与SEQ ID NO:1的Asn53相应的天门冬酰胺被N-糖基化，优选地具
有如在权利要求4中定义的根据式1、2、3、4、5、6、7或8的结构
的聚糖。
13.根据权利要求1至12之一的重组ACE2多肽，其特征在于，
与SEQ ID NO:1的Asn90相应的天门冬酰胺被N-糖基化，优选地具
有如在权利要求4中定义的根据式1、2、3、4、5、6、7或8的结构
的聚糖。
14.根据权利要求1至13之一的重组ACE2多肽，其特征在于，

\t与SEQ ID NO:1的Asn103相应的天门冬酰胺被N-糖基化，优选地具
有如在权利要求4中定义的根据式1、2、3、4、5、6、7或8的结构
的聚糖。
15.根据权利要求1至14之一的重组ACE2多肽，其特征在于，
与SEQ ID NO:1的Asn322相应的天门冬酰胺被N-糖基化，优选地具
有如在权利要求4中定义的根据式1、2、3、4、5、6、7或8的结构
的聚糖。
16.根据权利要求1至15之一的重组ACE2多肽，其特征在于，
与SEQ ID NO:1的Asn432相应的天门冬酰胺被N-糖基化，优选地具
有如在权利要求4中定义的根据式1、2、3、4、5、6、7或8的结构
的聚糖。
17.根据权利要求1至16之一的重组ACE2多肽，其特征在于，
与SEQ ID NO:1的Asn546相应的天门冬酰胺被N-糖基化，优选地具
有如在权利要求4中定义的根据式1、2、3、4、5、6、7或8的结构
的聚糖。
18.根据权利要求1至17之一的重组ACE2多肽，其特征在于，
与SEQ ID NO:1的Asn690相应的天门冬酰胺被N-糖基化，优选地具
有如在权利要求4中定义的根据式1、2、3、4、5、6、7或8的结构
的聚糖。
19.重组ACE2多肽的制剂，其包含至少根据权利要求1至18之
一的多肽，其特征在于，具有通过凝胶电泳所测得的低于100kDa，
优选低于104kDa，特别优选低于108kDa，特别是低于112kDa，尤
其优选低于117kDa，最优选低于119kDa的分子量的所述ACE2多肽
部分以低于20％，优选低于10％，尤其优选低于5％，最优选低于1％，
特别是0％存在。
20.根据权利要求19的制剂，其特征在于，具有跨膜结构域的
ACE2多肽部分以低于20％，优选低于10％，尤其优选低于5％，最优
选低于1％，特别是0％存在。
21.根据权利要求19或20的制剂，其特征在于，ACE2的多聚体

\t部分以低于20％，优选低于10％，尤其优选低于5％，最优选低于1％，
特别是0％存在。
22.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：M·舒斯特，H·洛博内，E·扬奇克哈瓦拉特，B·佩巴尔，S·斯兰内，B·瓦格内，R·维克，
申请(专利权)人：阿派隆生物制剂股份公司，
类型：发明
国别省市：奥地利;AT