一种分离和测定粉防己碱和防己诺林碱的方法技术

本发明专利技术涉及一种分离和测定粉防己碱和防己诺林碱的方法，包括：(1)将防己生药或含防己的中药制剂用甲醇溶解，超声后过滤；(2)采用步骤(1)得到的滤液进行高效液相色谱检测；其中流动相为体积比为65:35的甲醇-水混合液，添加1g/L辛烷磺酸钠并用冰醋酸调节pH值为3，流速1mL/min，进样量10μL。本发明专利技术中采用甲醇溶解进行样品预处理，操作简便，成本低，整个色谱分析过程时间为14min，粉防己碱和防己诺林碱的最低检出量分别为0.28mg/L和0.13mg/L，线性范围分别为125-4000mg/L和47-1500mg/L，线性相关系数良好，方法回收率大于90％，RSD小于10％。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术生物碱的分离和测定领域，特别涉及一种分离和测定粉防己碱和防己诺林 碱的方法。
技术介绍
防己,其主要起效单体为粉防己碱和防己诺林碱，它们属于生物碱类，有着相似的 化学结构，且极性较大，因此在普通的HPLC条件下无法达到有效分离。在防己生药和含防 己的中药制剂中，粉防己碱和防己诺林碱目前测定的分析方法有毛细管电泳、流动注射胶 束电动毛细管色谱系统、紫外的高效液相色谱法、电化学检测和质谱。 以上方法都采用了特殊试剂、昂贵和复杂的设备，且分析时间也较长，因此种种弊 端使以上方法不适合药物常规制剂的质量控制方法。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种分离和测定粉防己碱和防己诺林碱的方 法，该方法无需特殊设备、试剂，且具有操作简单、灵敏、快速的特点，适合中药生药和常规 制剂的检测、质量控制。 本专利技术的，包括： (1)将防己生药或含防己的中药制剂用甲醇溶解，超声后过滤； (2)采用步骤（1)得到的滤液进行高效液相色谱检测；其中流动相为体积比为 65:35的甲醇-水混合液，添加 lg/L辛烷磺酸钠并用冰醋酸调节pH值为3,流速1 mL/min, 进样量10 μ L。 步骤（1)中所述的防己生药或含防己的中药制剂为含丸剂、颗粒剂、片剂、糖浆 齐[J、合剂、口服液、滴丸剂、胶囊剂或注射液。 步骤（1)中所述的防己生药或含防己的中药制剂为固体，先研磨粉碎，然后再用 甲醇溶解。 步骤（1)中所述的防己生药或含防己的中药制剂为液体，先过滤、蒸干，然后再用 甲醇溶解。 步骤（1)中所述的过滤为采用〇· 45 μ m的滤膜过滤。 步骤（2)中所述的高效液相色谱检测中紫外检测器设置在280nm处。 步骤（2)中所述的高效液相色谱检测中粉防己碱和防己诺林碱的最低检出量分 别为 0. 28mg/L 和 0. 13mg/L，线性范围分别为 l25-4000mg/L 和 47-1500mg/L。 本专利技术对待测样品进行预处理后，利用粉防己碱和防己诺林碱在酸性条件下，与 离子对试剂结合成中性成分的特性，从而实现有效的分离和测定。采用流动相为甲醇-水 (65:35, V/V，冰醋酸调pH至3)，添加1克/L辛烷磺酸钠，紫外检测。本专利技术采用通用型的 液相色谱柱，其填料为C18,高效液相系统采用通用型的荧光检测器以及高压泵，流动相采 用酸性流动相。 本专利技术可用于进行防己生药和含防己中药制剂（包含丸剂、颗粒剂、片剂、糖浆 剂、合剂、口服液、滴丸剂、胶囊剂、注射液）的定量测定。 其中，防己生药测定如下： 固体类防己制剂测定如下：定量称取防己制剂，研磨粉碎。用定量甲醇溶解生药， 称重，超声30分钟，用甲醇补足重量，过滤，取定量的溶液在上述流动相条件下进样，用紫 外检测器检测。 液体类防己制剂测定如下：定量取防己液体制剂，过滤，蒸干，用定量甲醇溶解生 药，超声30min，过滤，取定量的溶液在上述流动相条件下进样，用紫外检测器检测。 有益效果： 本专利技术方法快速准确，灵敏度高，操作简便，成本低，适合于常规检测和药物质控。 具体优点如下： ⑴测定粉防己碱和防己诺林碱的整个色谱分析过程时间分别为14 tnin。 (2)采用甲醇溶解进行样品预处理，操作简便，成本低。 (3)采用最佳PH值得酸性流动相大大提高了粉防己碱和防己诺林碱的分离度， 粉防己碱和防己诺林碱的最低检出量分别为〇· 28mg/L和0· 13mg/L ;线性范围分别为 125-4000mg/L和47-1500mg/L，线性相关系数良好，方法回收率大于90%，RSD小于10%。 【附图说明】 图1中A:芪防膝痹颗粒剂中的粉防己碱和防己诺林碱色谱图； B:芪防膝痹颗粒剂的阴性对照品中的色谱图； C:防己生药中的粉防己碱和防己诺林碱色谱图； 其中1 :防己诺林碱，2 :粉防己碱。 【具体实施方式】 下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术 而不用于限制本专利技术的范围。此外应理解，在阅读了本专利技术讲授的内容之后，本领域技术人 员可以对本专利技术作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定 的范围。 实施例1 : 粉防己碱和防己诺林碱在芪防膝痹方颗粒剂中的测定 1、样品预处理：精密称取〇.8g芪防膝痹方颗粒剂，置于锥形瓶中，加入25ml甲醇， 塞紧瓶塞，称重，超声30min后，称重，用甲醇补足重量，用〇· 45 μ m的滤膜滤过，1〇 μ L进样。 2、色谱条件： HPLC 系统： 安捷伦1200高效液相色谱系统：包括G1：B11A四元进气泵，G1329A自动注射器， G1322A在线脱气机和goub紫外检测器。数据收集和分析了安捷伦工作站软件（版本 B.02.01，德国）。色谱柱：ATENA C18柱（250mmX6mm内径，5μΜ，安谱公司，中国），采用 〇二5 μ Μ柱前过滤器。添加丨克/L辛烷磺酸钠，使用前用〇.45 μπι滤膜过滤。流动相：甲 醇-水（65:35，V/V，冰醋酸调pH至3)，添加1 g/L辛烷磺酸钠。紫外检测器设置在280nm。 柱温：室温。流速：lmL/min。进样量：10uL。 3、色谱图：标准品、空白对照、芪防膝痹方颗粒剂的色谱图见图1。典型的保留时 间为防己诺林碱10. 7min。粉防己碱12. 2min。杂质对样品的测定无干扰。峰形对称，分离 完全。整个色谱分析过程时间为14min。 4、线性范围 防己诺林碱： 使其浓度分别为47, 94, 188, 375, 750, 1500mg · Γ1标准样品，直接进样进行测定。 以峰面积和浓度作线性回归，得标准曲线回归方程为：y = 0. 1384X+4. 1724,相关系数r = 0. 9995。方法的线性范围为47?1500mg吨―1。血浆中MPA的最低定量浓度为0. 35mg ?I/1 粉防己碱： 使其浓度分别为125, 250, 500, 1000, 2000, 4000 μ g · L1标准样品，直接进样进行 测定。以峰面积和浓度作线性回归，得标准曲线回归方程为：y = 〇· 1481X+14. 744,相关 系数r = 0· 9997。方法的线性范围为125?4000mg · L-^血浆中MPA的最低定量浓度为 0· 76mg · L、表 1 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离和测定粉防己碱和防己诺林碱的方法，包括：(1)将防己生药或含防己的中药制剂用甲醇溶解，超声后过滤；(2)采用步骤(1)得到的滤液进行高效液相色谱检测；其中流动相为体积比为65:35的甲醇‑水混合液，添加1g/L辛烷磺酸钠并用冰醋酸调节pH值为3，流速1mL/min，进样量10μL。

【技术特征摘要】
1. 一种分离和测定粉防己碱和防己诺林碱的方法，包括： (1) 将防己生药或含防己的中药制剂用甲醇溶解，超声后过滤； (2) 采用步骤（1)得到的滤液进行高效液相色谱检测；其中流动相为体积比为65:35 的甲醇-水混合液，添加 lg/L辛烷磺酸钠并用冰醋酸调节pH值为3,流速lmL/min，进样量 10 μ L〇2. 根据权利要求1所述的一种分离和测定粉防己碱和防己诺林碱的方法，其特征在 于：步骤（1)中所述的防己生药或含防己的中药制剂为含丸剂、颗粒剂、片剂、糖浆剂、合 齐U、口服液、滴丸剂、胶囊剂或注射液。3. 根据权利要求1所述的一种分离和测定粉防己碱和防己诺林碱的方法，其特征在 于：步骤（1)中所述的防己生药或含防己的中药制剂为固体，先研磨粉碎，然后再用甲醇溶 解。4. 根据权利要求1所...

【专利技术属性】
技术研发人员：卢新刚，吴弢，沈杰，高翔，杨涛，傅峰，苟海辛，瞿佶，李蠡，王文昊，朱斌，
申请(专利权)人：复旦大学附属华东医院，
类型：发明
国别省市：上海;31