叶酸修饰的普朗尼克P85共聚物的制备及其在5-氟尿嘧啶纳米药物中的应用制造技术

本发明专利技术涉及生物医药技术领域，首先提供了一类叶酸修饰的普朗尼克P85共聚物，还涉及5-氟尿嘧啶的抗癌纳米药物的制备。实验发现，采用叶酸修饰的普朗尼克P85共聚物制备的5-氟尿嘧啶纳米药物，可以显著抑制肿瘤细胞生长；而且在小鼠结肠癌肝转移模型中，能显著减少结肠癌肝转移瘤形成，并能显著延长小鼠生存期，表明其具有良好的抗结肠癌肝转移的作用。因此有望成为有临床应用前景的抗肿瘤药。

【技术实现步骤摘要】
叶酸修饰的普朗尼克P85共聚物的制备及其在5-氟尿嘧啶纳米药物中的应用
本专利技术涉及药物应用
，具体地说，是关于叶酸修饰的普朗尼克P85共聚物（P85-FA）的制备，本专利技术还涉及5-氟尿嘧啶抗癌纳米药物的制备，特别是在抗结直肠癌肝转移中的用途。
技术介绍
结直肠癌是常见的恶性肿瘤之一，可发生在结直肠的任何部位，其发病率在全球范围内呈逐年上升趋势，已成为导致患者死亡的三大癌症之一。结直肠癌转移多发生在肝脏，据报道30-40%的患者在疾病的早期就伴有肝转移；而在疾病晚期，95%的患者都出现肝转移，并且结直肠癌患者的死亡原因多为肝部转移灶的发展。目前虽有以手术治疗为主的多种治疗方案，可提高结直肠癌的治愈率，但对结直肠癌肝转移的患者并没有更有效的治疗方法。普朗尼克（Pluronic）是由聚氧乙烯－聚氧丙稀－聚氧乙烯（PEO-PPO-PEO）形成的两性分子纳米共聚物。具有合适组成比和相对分子质量的普朗尼克在水溶液中能自发形成胶束，其直径通常为10-100纳米。普朗尼克可以与抗肿瘤药物形成共聚物胶束，其胶束中心由疏水的PPO组成，可结合药物、DNA或蛋白等分子；亲水的PEO链组成胶束外壳，从而提高药物的靶向性和稳定性。近年来研究发现，药物-普朗尼克共聚物胶束本身具有很强的稳定性，可以显著增加肿瘤对药物的敏感性，减小药物的毒副反应，如普朗尼克P85PEO26-PPO40-PEO26)可以与化疗药物阿霉素形成共聚物胶束P85-DOX，与单独使用阿霉素药物组相比，可以显著抑制人白血病细胞株P388细胞中耐药蛋白Pgp的表达，诱导ATP衰竭，增加肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。单独使用有效剂量的普朗尼克P85对细胞没有毒副作用，具有较高的生物安全性。普朗尼克L61、F127、P123及F88对增强化疗药物敏感性方面的作用显著低于P85。5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil，5-Fu）是结直肠癌首选的化疗药物，然而5-Fu严重的骨髓抑制及胃肠道毒副反应，很大程度上限制了其在临床的广泛应用。近年，学者们开展了许多对5-Fu新剂型的研究工作，但均未解决增强靶向性及减轻毒副作用的问题。目前与5-FU联合用药的化疗方案仍然是结肠癌的一线治疗方案。临床使用时，需要提前给予叶酸(folicacid，FA)类制剂，以增强5-FU的作用，降低5-FU的毒副反应，临床使用较为不便。叶酸是人体必需的小分子维生素，其对于细胞所必须的核苷酸的生物合成以及维持一碳单位的正常代谢通路起重要作用。叶酸对叶酸受体(folatereceptor，FR)表现出极高的亲和力。FR表达水平与上皮源性肿瘤组织的恶性程度及转移侵袭力存在正相关关系。叶酸修饰的聚合胶束对叶酸受体过表达的结肠癌细胞具有强亲和力，能有效地将所载药物导入肿瘤细胞。因此，本专利技术人将叶酸与纳米载体通过化学连接方式连接，方法简单，不易引起免疫反应，能显著增加5-FU的抗肿瘤作用，降低其毒副反应，临床操作更为简便，具有非常好的抗肿瘤药物开发前景。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有治疗措施中的不足，提供一种叶酸修饰的普朗尼克P85的共聚物及其在5-氟尿嘧啶抗肿瘤纳米药物的制备方法，特别是结直肠癌肝转移中的应用。本专利技术首先提供了一类叶酸修饰的普朗尼克P85的共聚物，结构为式中，n=1-8。优选地，n=2-4。更优选地，n=2，结构见附图1。本专利技术其次提供了上述的叶酸修饰的普朗尼克P85共聚物的制备方法，合成步骤如下式：包括以下步骤：（1）氮气保护下，普朗尼克P85在乙腈中与CDI室温搅拌，反应得到P85-CDI；（2）P85-CDI溶于乙腈中，慢慢滴加到H2N(CH2)nNH2中，室温搅拌反应得到P85-NH2；（3）P85-NH2与叶酸、缩合剂溶解于DMSO中，溶液中加入三乙胺，在氮气保护下室温搅拌反应，合成含有末端叶酸修饰的普朗尼克P85共聚物。优选地，上述的共聚物的制备方法，在第（3）步使用的缩合剂为N-羟基丁二酰亚胺(NHS)和N,N’-二环己基碳二亚胺。本专利技术还提供了一种抗肿瘤组合物，包含上述的叶酸修饰的普朗尼克P85共聚物、安全有效量的临床上常用的抗肿瘤化合物和药学上接受的载体。优选地，所述的临床上常用的抗肿瘤化合物为5-氟尿嘧啶。本专利技术涉及的药用组合物，可以是固体形式或是液体形式，所述的药物剂型可以是片剂、胶囊、粉末剂、颗粒剂、混悬剂或注射剂。当本专利技术化合物用于上述用途时，可与一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂混合，如溶剂、稀释剂等，而且可以用如下形式口服给药：片剂、丸剂、胶囊、可分散的粉末、颗粒或悬浮液(含有如约0.05-5%悬浮剂)、糖浆(含有如约10-50%糖)、和酏剂(含有约20-50%乙醇)，或以外用方式给药：软膏剂、凝胶、含药胶布等，或者以无菌可注射溶液或悬浮液形式(在等渗介质中含有约0.05-5%悬浮剂)进行非肠胃给药。例如，这些药物制剂可含有与载体混合的约0.01-99%，更佳地约为0.1%-90%(重量)的活性成分。“安全有效量”指的是：化合物的量足以改善病情，而不至于产生严重的副作用。安全有效量根据治疗对象的年龄、病情、疗程等来确定。“药学上接受的载体”指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，它们适合人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相容性”在此指代是组合物中各组份能和本专利技术的化合物以及它们之间相互掺和，而不明显降低化合物的疗效。药学上可接受的载体部分例子有糖（如葡萄糖、蔗糖、乳糖等），淀粉（如玉米淀粉、马铃薯淀粉等），纤维素及其衍生物（如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等），明胶，滑石粉，固体润滑剂（如硬脂酸钠、硬脂酸镁），硫酸钙，植物油（如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等），多元醇（如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等），乳化剂（如吐温类），润湿剂（如十二烷基磺酸钠），着色剂，调味剂，稳定剂，抗氧化剂，防腐剂，无热原水等。“临床上常用的抗肿瘤化合物”包括但不限于下列临床常用抗肿瘤化合物：（1）烷基化试剂，如烷基磺酸酯（白消安）、氮烯咪胺、甲基苄肼、氮芥类化合物（氯甲川、苯丙氨酸氮芥、瘤可宁）、环磷酰胺或异环磷酰胺；（2）亚硝基脲类，如卡莫司汀、洛莫司汀、司莫司汀或链脲菌素；（3）抗肿瘤生物碱，如长春新碱或长春碱；（4）紫杉烷类，如紫杉醇或泰素帝(taxotere)；（5）抗肿瘤抗生素类，如放线菌素；（6）叶酸拮抗剂，如甲氨蝶呤；（7）嘌呤合成抑制剂；嘌呤类似物，如6-巯鸟嘌呤；（8）嘧啶合成抑制剂、卡培它滨或嘧啶类似物，如氟尿嘧啶、吉西他滨、阿糖胞苷和胞嘧啶阿拉伯糖苷；（9）拓扑异构酶抑制剂，如喜树碱或依托泊甙；（10）抗癌激素激动剂和拮抗剂，包括它莫西芬；（11）激酶抑制剂，如甲磺酸伊马替尼等。本专利技术还提供了一种如上所述的抗肿瘤组合物在用于制备抗结直肠癌药物中的应用。本专利技术还提供了一种如上所述的抗肿瘤组合物在用于制备抗结直肠癌肝转移药物中的应用。本专利技术最后提供了一种荷载5-氟尿嘧啶的纳米药物的制备方法，其特征在于，取叶酸修饰的普朗尼克P85共聚物和5-氟尿嘧啶于圆底烧瓶中，用适量乙腈溶解后，除去有机溶剂，得干燥药膜，水浴加热，溶解固体骨架，加入等温度纯化水搅拌，用0.22μm滤膜过滤，得到荷载5-氟尿嘧啶的纳米药物的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种叶酸修饰的普朗尼克P85共聚物，其结构如下式：式中，n=1‑8。

【技术特征摘要】
1.一种叶酸修饰的普朗尼克P85共聚物，其结构如下式：式中，n＝1-8。2.根据权利要求1所述的共聚物，其特征在于，n＝2-4。3.根据权利要求1所述的共聚物，其特征在于，n＝2。4.根据权利要求1所述的共聚物的制备方法，包括以下步骤：(1)氮气保护下，普朗尼克P85在乙腈中与CDI室温搅拌，反应得到P85-CDI；(2)P85-CDI溶于乙腈中，慢慢滴加到H2N(CH2)nNH2中，室温搅拌反应得到P85-NH2；(3)P85-NH2与叶酸、缩合剂溶解于DMSO中，溶液中加入三乙胺，在氮气保护下室温搅拌反应，合成含有末端叶酸修饰的普朗尼克P85共聚物。5.根据权利要求4所述的共聚物的制备方法，其特征在于，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：张黎，侯静，范婷婷，朱鹏熹，盛丹丹，马建丽，赵娜萍，宋云龙，张姗姗，韩志鹏，卫立辛，芮耀诚，辛海量，刘厚佳，
申请(专利权)人：中国人民解放军第二军医大学，
类型：发明
国别省市：上海;31