硬皮马勃人工栽培方法技术

本发明专利技术涉及菌类人工栽培领域，具体而言，涉及一种硬皮马勃人工栽培方法。该硬皮马勃人工栽培方法，包括下列步骤：1)获得硬皮马勃菌种；2)培养宿主树无菌苗；3)待无菌苗长出侧根时，在其根系接种硬皮马勃菌种，保持基质湿润，维持温度为25℃±3℃，培养得到硬皮马勃菌根苗；4)在大棚内培养所述菌根苗，保持棚内温度25℃±3℃，培养3-6个月直至硬皮马勃子实体发育成熟。本发明专利技术所提供的栽培方法可以有效建立硬皮马勃菌种与宿主树的共生关系，菌根感染率高达80％-90％，合成菌根苗后继续培养至子实体成熟所需时间短。按照本发明专利技术所提供的栽培方法培养出的成熟硬皮马勃肉质肥厚，产量高。

【技术实现步骤摘要】
硬皮马勃人工栽培方法
本专利技术涉及菌类人工栽培领域，具体而言，涉及一种硬皮马勃人工栽培方法。
技术介绍
硬皮马勃是一种食、药用真菌，最早载于《名医别录》，味辛性平，入肺经，有消肿、止血、解毒等功效，用于咽喉肿痛及各种出血。现代医学研究表明,硬皮马勃具有多种药理作用和临床应用，含有甾体化合物、萜类化合物、小分子含氮化合物、马勃多糖、蛋白质、肽类等化学成分有抑菌、抗炎、止咳、杀虫、抗肿瘤细胞的作用，具有很高的药用价值。崔磊2006年报道，从马勃的新鲜子实体中分离出新蛋白质，其对小鼠脾细胞显示一种抗促细胞分裂剂活性，能减少乳腺癌细胞的生存能力。从硬皮马勃中分离得一种类似泛激素的肽，此肽对乳腺癌细胞有较强的抗增殖活性。硬皮马勃含有丰富的蛋白质、矿物质、微量元素及氨基酸，幼嫩子实体肉质细腻，美味可口而深受广大消费者的喜爱，是老百姓餐桌上喜闻乐见的美味佳肴，又因其公认的药用价值而成为一种重要的食、药用菌倍受消费者青睐。但硬皮马勃自然产量有限且随大量的人为采摘，资源越来越少。人工栽培是增加资源、保护生态环境，维持可持续发展的重要方向。但硬皮马勃需与树木形成共生关系才能生长子实体，而由于人工栽培很难成功建立硬皮马勃与其宿主树的共生关系，因此，目前硬皮马勃尚不能人工栽培。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种硬皮马勃人工栽培方法，以解决上述的问题。本专利技术提供了一种硬皮马勃人工栽培方法，包括下列步骤：(1)将含有硬皮马勃子实体的组织置于母种培养基中培养，得到硬皮马勃母种，将硬皮马勃母种接种到液体菌种培养基中，培养得到硬皮马勃液体菌种；和/或，将硬皮马勃孢子粉配制成硬皮马勃孢子悬浮液；和/或，将硬皮马勃液体菌种接种到固体菌种培养基中培养得到硬皮马勃固体菌种；(2)将思茅松、云南松或高山松的种子培养至萌发出白色芽点移栽入无菌苗培养基中培养得到无菌苗；(3)待无菌苗长出侧根时，在其根系接种硬皮马勃液体菌种、硬皮马勃孢子悬浮液或硬皮马勃固体菌种，保持基质湿润，维持温度为25℃±3℃，培养得到硬皮马勃菌根苗；(4)在大棚内培养所述菌根苗，保持棚内温度25℃±3℃，培养3-6个月直至硬皮马勃子实体发育成熟。本专利技术提供了三种硬皮马勃菌种与无菌苗接种合成菌根苗，分别为：硬皮马勃孢子悬浮液、硬皮马勃液体菌种和硬皮马勃固体菌种。这样不仅丰富了硬皮马勃菌种的来源，而且硬皮马勃孢子悬浮液和硬皮马勃液体菌种的制备和培养均比硬皮马勃固体菌种简单，并且最终栽培出的成熟硬皮马勃品质相差无几。本专利技术选择思茅松、云南松或高山松为宿主树种，通过单独培养硬皮马勃菌种和单独培养宿主树的无菌苗，并通过选择在无菌苗长出侧根时接入硬皮马勃菌种，得到了硬皮马勃菌根苗，通过将硬皮马勃菌根苗在大棚内培养，并通过控制大棚内的温度使得硬皮马勃菌根苗在3-6个月即可培养为成熟的硬皮马勃。优选地，所述液体菌种培养基包括下列组分，按重量份计：马钤薯100-200份，葡萄糖10-20份，酒石酸铵1-2份，蛋白胨2-4份，MgSO41-2份，KH2PO41-2份，水500-1500份；优选地，马钤薯120-180份，葡萄糖12-18份，酒石酸铵1-2份，蛋白胨2-4份，MgSO41-2份，KH2PO41-2份，水800-1200份；所述母种培养基为在所述液体菌种培养基各组分及用量的基础上增加15-20份的琼脂。优选地，所述无菌苗培养基包括下列组分，按重量份计：蛭石15000-40000份，珍珠岩20000-50000份，草炭50000-100000份，红壤土100000-300000份，腐殖质10000-30000份，磷酸二氢铵100-200份，MgSO4100-200份，KH2PO4100-200份；优选地，蛭石20000-30000份，珍珠岩30000-40000份，草炭60000-90000份，红壤土150000-250000份，腐殖质15000-25000份，磷酸二氢铵120-180份，MgSO4130-180份，KH2PO4120-180份；优选地，腐殖质包括牛粪和鸡粪。优选地，所述固体菌种培养基包括下列组分，按重量份计：木屑100000-200000份，麦粒10000-20000份，蔗糖100-200份，酒石酸铵100-200份，蛋白胨200-400份，MgSO4100-200份，KH2PO4100-200份；优选地，在步骤(1)中，配制硬皮马勃孢子悬浮液的方法为：按重量份计，向50-500份硬皮马勃孢子粉中加入500-5000份无菌水。优选地，在步骤(3)中，每株无菌苗接种硬皮马勃孢子悬浮液5-10ml，所述硬皮马勃孢子悬浮液的菌球浓度为5×106-5×1010个/ml。优选地，在步骤(1)中，将硬皮马勃母种接入液体菌种培养基中后保持基质湿润，维持温度为27℃±2℃，在125-160r/min的转速下振荡暗光培养8-12天。优选地，在步骤(3)中，每株无菌苗接种硬皮马勃液体菌种10-20ml，所述硬皮马勃液体菌种的菌球浓度为1000-2000个/ml。优选地，在步骤(3)中，每株无菌苗接入固体菌种50-100g。优选地，所述母种培养基、所述液体菌种培养基和所述固体菌种培养基的pH分别为4.0-6.0。本专利技术通过选择合适的母种培养基和液体菌种培养基的各种组分及其用量，使得母种培养基适于将硬皮马勃子实体组织培养为硬皮马勃母种，液体菌种培养基适于将硬皮马勃母种培养为硬皮马勃液体菌种，培养所得硬皮马勃液体菌种的菌球浓度高达1000-2000个/ml。在配制硬皮马勃孢子悬浮液的过程中，专利技术人通过控制硬皮马勃孢子粉与水的用量比例，使得配制出的硬皮马勃孢子悬浮液的菌球浓度为5×106-5×1010个/ml。无菌水是将水中微生物杀死或过滤而得到的水,水中的无机盐等不会减少。专利技术人在配制硬皮马勃孢子悬浮液时选择无菌水的目的是防止水中带入的杂菌对培养的影响。实验中发现摇床的转速对菌类的生长也有一定影响。当转速低于125r/min时，菌丝生长量明显减少，菌丝分散程度明显降低；而当转速高于160r/min时，虽然菌丝分散程度高，但菌丝太短，菌丝团较小，不利于后续的接种，从而降低了菌根感染率。因此，本专利技术将摇床转速控制在125-160r/min。本专利技术中控制每株无菌苗接种硬皮马勃孢子悬浮液5-10ml、硬皮马勃液体菌种10-20ml或硬皮马勃固体菌种50-100g，使得接种量既能满足接种需要，又不至于接种量太大造成浪费，从而可以为后续接种提供菌种，减少培养硬皮马勃菌种的次数。专利技术人在实验中发现，当所述母种培养基、所述液体菌种培养基和所述固体菌种培养基的pH分别为4.0-6.0时，菌种生长速度较快，而当pH小于4.0或pH大于6.0时，菌种的生长均受到抑制，所以在培养过程中要及时调整母种培养基、液体菌种培养基和固体菌种培养基的pH为4.0-6.0。本专利技术所提供的栽培方法可以有效建立硬皮马勃菌种与宿主树的共生关系，菌根感染率高达80％-90％，合成菌根苗后继续培养至子实体成熟所需时间短。按照本专利技术所提供的栽培方法培养出的成熟硬皮马勃呈白色、乳白色、浅黄色或黄褐色，表面光滑或有少许粗糙不定形的小鳞片或有不规则裂纹，肉质肥厚，产量高。具体实施方式本专利技术中所用的蛭石密度为80kg/m3，珍珠岩密度为本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种硬皮马勃人工栽培方法，其特征在于，包括下列步骤：(1)将含有硬皮马勃子实体的组织置于母种培养基中培养，得到硬皮马勃母种，将硬皮马勃母种接种到液体菌种培养基中，培养得到硬皮马勃液体菌种；和/或，将硬皮马勃孢子粉配制成硬皮马勃孢子悬浮液；和/或，将硬皮马勃液体菌种接种到固体菌种培养基中培养得到硬皮马勃固体菌种；(2)将思茅松、云南松或高山松的种子培养至萌发出白色芽点移栽入无菌苗培养基中培养得到无菌苗；(3)待无菌苗长出侧根时，在其根系接种硬皮马勃液体菌种、硬皮马勃孢子悬浮液或硬皮马勃固体菌种，保持基质湿润，维持温度为25℃±3℃，培养得到硬皮马勃菌根苗；(4)在大棚内培养所述菌根苗，保持棚内温度25℃±3℃，培养3‑6个月直至硬皮马勃子实体发育成熟。

【技术特征摘要】
1.一种硬皮马勃人工栽培方法，其特征在于，包括下列步骤：(1)将含有硬皮马勃子实体的组织置于母种培养基中培养，得到硬皮马勃母种，将硬皮马勃母种接种到液体菌种培养基中，培养得到硬皮马勃液体菌种；和/或，将硬皮马勃孢子粉配制成硬皮马勃孢子悬浮液；和/或，将硬皮马勃液体菌种接种到固体菌种培养基中培养得到硬皮马勃固体菌种；(2)将思茅松、云南松或高山松的种子培养至萌发出白色芽点移栽入无菌苗培养基中培养得到无菌苗；(3)待无菌苗长出侧根时，在其根系接种硬皮马勃液体菌种、硬皮马勃孢子悬浮液或硬皮马勃固体菌种，保持所述无菌苗培养基基质湿润，维持温度为25℃±3℃，培养得到硬皮马勃菌根苗；(4)在大棚内培养所述菌根苗，保持棚内温度25℃±3℃，培养3-6个月直至硬皮马勃子实体发育成熟；其中，所述液体菌种培养基包括按重量份计的以下组分：马钤薯120-180份，葡萄糖12-18份，酒石酸铵1-2份，蛋白胨2-4份，MgSO41-2份，KH2PO41-2份，水800-1200份，所述母种培养基为在所述液体菌种培养基各组分及用量的基础上增加15-20份的琼脂。2.根据权利要求1所述的硬皮马勃人工栽培方法，其特征在于，所述无菌苗培养基包括下列组分，按重量份计：蛭石15000-40000份，珍珠岩20000-50000份，草炭50000-100000份，红壤土100000-300000份，腐殖质15000-45000份，磷酸二氢铵100-200份，MgSO4100-200份，KH2PO4100-200份。3.根据权利要求1所述的硬皮马勃人工栽培方法，其特征在于，所述无菌苗培养基包括下列组分，按重量份计：蛭石20000-30000份，珍珠岩30000-40000份，草炭60000-90000份，红壤土15000...

【专利技术属性】
技术研发人员：纪光燕，杨君巧，杨太茂，郭细龙，谢飞，郭雪玲，张文仙，
申请(专利权)人：景洪宏臻农业科技有限公司，
类型：发明
国别省市：云南;53