一种从鱼糜漂洗液中提取抗菌鱼蛋白铁肽的方法技术

一种从鱼糜漂洗液中提取抗菌鱼蛋白铁肽的方法，其特征在于步骤为：1）将鱼糜漂洗液过滤，用盐酸调节滤液pH值为5.0～6.0，静置90～120min，用NaOH调节pH值为8.0～9.0，加入碱性蛋白酶，酶解8～10h后灭酶，离心，去除沉淀得到酶解液；2）按比例加入抗坏血酸和氯化亚铁，搅拌后调节pH至6.0～8.0，抽真空震荡螯合30～60min，离心去沉淀后真空浓缩，冷冻干燥，即为抗菌鱼蛋白铁肽粗提物；对粗提物进行一下纯化，得到成品抗菌鱼蛋白铁肽。本发明专利技术的提取方法具有操作简单、分离提取率高、成本低的特点，制得的抗菌鱼蛋白铁肽天然、无毒、无污染、高效抗菌，可以使鱼糜漂洗液中可溶性蛋白得到高值化利用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种鱼蛋白铁肽的提取方法，特别是关于。
技术介绍
鱼糜制品在中国的发展前景是十分广阔的。但是在鱼糜生产中，为了得到弹性好、色泽白的优质鱼糜，采肉后的碎鱼肉需用大量的清水进行漂洗。在漂洗过程中一定量的水溶性蛋白质、色素、脂类等物质溶于水中，作为废水而废弃，十分可惜。鱼糜漂洗液中所含的必需氨基酸齐全，各种氨基酸组成合理，易被人体消化吸收利用，是一种优质蛋白质。从鱼糜漂洗水中提取的蛋白，可作为蛋白源添加到食品中供人食用，也可以添加到饲料中，供各种动物养殖用，用途广泛。我国每年远洋捕捞量至少达几万吨，漂洗液达几十万吨，数量相当可观。因此从漂洗液中提取氨基酸和蛋白质，并高效利用提取的氨基酸和蛋白质，具有重要的经济价值和社会意义。 现代生物代谢研究发现，蛋白经消化酶水解后，并不都是被水解成氨基酸形式被吸收，更多则是以短肽或寡肽形式吸收，刘洋等研究鍉鱼水解肽用于促动物生长(鍉鱼蛋白酶水解物的营养评价[J].青岛海洋大学学报，1996，26 (1):37-43.)等。水解肽_金属配合物是由可溶性金属离子同多肽按一定摩尔比结合而成的有机元素鳌合物，具有稳定性高、吸收快、适口性好、生物效价高等特点。如邓尚贵等研究低值鱼下脚料水解肽铁(II )螯合物具有抗菌作用(低值鱼蛋白多肽-铁(II )螯合物的酶解制备及其抗氧化、抗菌活性[J].湛江海洋大学学报，2006,26(4):54-58.)、Worst 等(WorstDJ, OttoBR, De GraffJ.1ron-repressible outer membrane proteins of Helicobacter pylori involved inheme uptake [J].1nfect Immunj 1995，63:4161-4165.)研究发现多妝-铁螯合物体内吸收率为无机铁络合物的49倍。α -酪蛋白特定多肽经磷酸化后，形成的酪磷肽可螯合Cu、Ca及Zn等元素，具有防治骨质疏松、调节血压等功效。此外，研究发现部分蛋白肽-Fe配合物能自由地通过成熟的胎盘而到达特定的祀点器官(Maria KK.1ron speciat1n inintestinal contents of rats fed meal composed of meat and nonmeat sources ofprotein and fat [J].Food Chemj 1995，52:47-56.)。这些研究结果说明水解肽-金属配合物是一种安全的，可食用的物质。 因此，有效利用鱼糜漂洗液中的可溶性蛋白制备有抗菌抗氧化功效的功能性食品或食品配料，可为实现鱼资源的综合利用、提高其附加值开辟新的途径。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供，具有操作简单、分离提取率高、成本低的特点，制得的抗菌鱼蛋白铁肽具有天然、无毒、无污染、闻效抗菌等优点。 本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案为:，其特征在于步骤依次为: I)将鱼糜漂洗液过滤，用盐酸调节滤液pH值为5.0~6.0，静置90~120min，用NaOH调节pH值为8.0~9.0，加入碱性蛋白酶，酶解8~1h后灭酶，离心，去除沉淀，得到酶解液； 2)按抗坏血酸与酶解液I~60mg:80mL,氯化亚铁与酶解液I~30mg:40ml的比例加入抗坏血酸和氯化亚铁，充分搅拌后调节pH至6.0~8.0,抽真空震荡螯合30~60min,离心去沉淀后真空浓缩，冷冻干燥，即为抗菌鱼蛋白铁肽粗提物； 3)对上述所得到的抗菌鱼蛋白铁肽粗提物进行一下纯化，得到成品抗菌鱼蛋白铁肽。 作为优选，所述鱼糜漂洗液的滤液与碱性蛋白酶的重量份数比为100:4~7 ;所述碱性蛋白酶酶解温度为30~50°C，所述灭酶的温度为90~100°C，灭酶时间为10~20min。 作为优选，所述步骤2)的螯合温度为30~50°C，所述真空浓缩的温度为40~60°C，浓缩时间为10~12h ;所述冷冻干燥的温度为-60~-70°C，冷冻时间为24~48h。 作为改进，所述步骤3)的纯化的具体步骤为:将所述抗菌鱼蛋白铁肽粗提物经葡聚糖凝胶层析洗脱分离，有抗菌活性的层析组分再经反向高效液相色谱洗脱，收集洗脱液；接着对所述洗脱液进行真空冷冻干燥，即为抗菌鱼蛋白铁肽。 最后，所述葡聚糖凝胶层析柱为Sephadex G50,所述洗脱液为pH6.5~7.0, 0.09~0.llmol/L的磷酸缓冲液，洗脱速度为16~20mL/h ;所述反向高效液相色谱为XBrige?Prep-C18 ;所述真空冷冻干燥温度为-60~_70°C，冷冻时间为24~36h。 与现有技术相比，本专利技术的优点在于:以鱼加工废弃物鱼糜漂洗液为原料，通过酶解、螯合、纯化进行提取，不仅原料来源广泛，而且变废为宝、成本低，可以满足大规模深加工的需要；制得的亚铁抗菌肽，属于天然提取物，具有天然、无毒、无污染、高效抗菌等特点，是一种新型的绿色抗微生物物质。本专利技术操作方便、分离提取率高，为生产抗菌肽提供了一个新的途径和方法。 【附图说明】 图1是本专利技术实施例的抗菌鱼蛋白铁肽粗提物的Sephadex G50层析曲线； 图2是本专利技术实施例的抗菌鱼蛋白铁肽的反向高效液相色谱XBrigeTMPrep-C18洗脱曲线图； 图3是本专利技术实施例的抗菌鱼蛋白铁肽抑制大肠杆菌的扫描电镜图，其中A、为对照，没有被亚铁螯合抗菌肽作用的大肠杆菌细胞、作用8h的大肠杆菌细胞；C、作用16h的大肠杆菌细胞。 【具体实施方式】 以下结合附图实施例对本专利技术作进一步详细描述。 实施例子I ，具体步骤为: 1、将鱼糜漂洗液用纱布进行过滤，去除油脂、碎鱼骨等物质，用盐酸调节滤液pH值为5.5，静置lOOmin，用NaOH调节pH值为8.5，加入碱性蛋白酶，滤液与碱性蛋白酶的重量份数比为100:5,酶解温度为40°C，酶解9h后，在95°C进行灭酶15min，然后离心，去除沉淀，得到酶解液； 2、向酶解液中加入抗坏血酸和氯化亚铁，抗坏血酸与酶解液体积份数之比为30:80 (mg:mL)，氯化亚铁与酶解液体积份数之比为20:40 (mg:mL);螯合温度为40°C，抽真空震荡螯合45min，离心，去沉淀，成为抗菌鱼蛋白铁肽的粗提物。 3、真空浓缩抗菌鱼蛋白铁肽粗提物，40°C，浓缩Ilh ;浓缩物-60°C冷冻干燥24h，得粗提物冻干粉。 4、将螯合抗菌肽粗提物冻干粉经葡聚糖凝胶S印hadex G50过柱分离，洗脱液为pH6.8,0.lmol/L的磷酸缓冲液，洗脱速度为18mL/h，收集约180mL洗脱液。 见图1所示，抗菌鱼蛋白铁肽的粗提物经葡聚糖凝胶S印hadex G50层析柱后有四个洗脱峰，将各洗脱峰取约10uL进行抗菌实验，抑菌试验显示第一个洗脱峰(F2)有抑菌活性。 5、洗脱峰F2经反向高效液相色谱为XBrigeTMPi^p-C18分离出现四个洗脱峰，将各洗脱峰取约10uL进行抗菌实验，抑菌试验显示第二个洗脱峰(见图2F2-3)有抑菌活性。 6、收集洗脱峰F2-3，_60°C真空冷冻干燥24h，成为抗菌鱼蛋白铁肽纯品，在_20°C下保存抗菌鱼蛋白铁肽。 下面对上本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从鱼糜漂洗液中提取抗菌鱼蛋白铁肽的方法，其特征在于步骤依次为：1）将鱼糜漂洗液过滤，用盐酸调节滤液pH值为5.0～6.0，静置90～120min，用NaOH调节pH值为8.0～9.0，加入碱性蛋白酶，酶解8～10h后灭酶，离心，去除沉淀，得到酶解液；2）按抗坏血酸与酶解液1～60mg：80mL，氯化亚铁与酶解液1～30mg：40ml的比例加入抗坏血酸和氯化亚铁，充分搅拌后调节pH至6.0～8.0，抽真空震荡螯合30～60min，离心去沉淀后真空浓缩，冷冻干燥，即为抗菌鱼蛋白铁肽粗提物；3）对上述所得到的抗菌鱼蛋白铁肽粗提物进行一下纯化，得到成品抗菌鱼蛋白铁肽。

【技术特征摘要】
1.一种从鱼糜漂洗液中提取抗菌鱼蛋白铁肽的方法，其特征在于步骤依次为: 1)将鱼糜漂洗液过滤，用盐酸调节滤液PH值为5.0~6.0，静置90~120min，用NaOH调节PH值为8.0~9.0，加入碱性蛋白酶，酶解8~1h后灭酶，离心，去除沉淀，得到酶解液； 2)按抗坏血酸与酶解液I~60mg:80mL,氯化亚铁与酶解液I~30mg:40ml的比例加入抗坏血酸和氯化亚铁,充分搅拌后调节pH至6.0~8.0,抽真空震荡螯合30~60min,离心去沉淀后真空浓缩，冷冻干燥，即为抗菌鱼蛋白铁肽粗提物； 3)对上述所得到的抗菌鱼蛋白铁肽粗提物进行一下纯化，得到成品抗菌鱼蛋白铁肽。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述鱼糜漂洗液的滤液与碱性蛋白酶的重量份数比为100:4~7 ;所述碱性蛋白酶酶解温度为30~50°C，所述灭酶的温度为90~100 °C，灭酶时间...

【专利技术属性】
技术研发人员：林慧敏，邓尚贵，张宾，
申请(专利权)人：浙江海洋学院，
类型：发明
国别省市：浙江;33