本发明专利技术提供一种食用菌液体菌种的液体发酵培养基，按照重量百分比包括：葡萄糖1.5％、玉米粉3％、蛋白胨0.2％、黄豆粉2％、MgSO4·7H2O0.1％、KH2PO40.1％、VB10.01％、豆油0.03％，余量为水。并提供一种食用菌液体菌种的制备方法，包括斜面菌种的活化、一级液体菌种的培养和液体发酵三个步骤。本发明专利技术的食用菌液体菌种生产方法，通过液体培养基配方优化和发酵条件优化等方案，能够使液体菌种较固体菌种袋料栽培增产32.8％，污染率降低4％，节约制种时间，减少劳动力成本。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物工程
，特别涉及一种。
技术介绍
随着国内外市场对食用菌产品需求的增加，中国的食用菌产业以年均17%的速度增涨。食用菌生产方式由传统的家庭作坊式操作、季节性生产的模式，逐渐向设施化、现代化、周年化、规模化生产发展。生产方式的变革带动了食用菌新技术、新工艺、新设备的开发。近年来，采用液体深层培养工艺制备食用菌液体菌种用于生产成为研发热点，涌现出了许多液体发酵设备生产厂家及诸多在香菇、黑木耳、金针菇、平菇、灰树花生产中采用液体菌种的报道。液体菌种在食用菌工厂化、周年化、规模化生产总推广应用，对于降低生产成本，提高产品质量具有显著效果。日本、韩国在食用菌工厂化生产中，已普遍采用液体菌种。比如，灵寿县食用菌种植面积已达500万平方米，年产量10万吨，随着食用菌种植规模的不断发展，菌种的要求也将大大增加，每年需要固体原种40万瓶，栽培种2000万瓶，而需要如此大量的食用菌菌种，给农民生产造成了许多困难，增加了大量的成本。而液体菌种具有五大优势:1、降低成本:每个栽培袋的液体菌种费只有固体菌种的五分之一，接种工效比固体接种高4-5倍；2、提高纯度:液体菌种在完全无菌的密封环境中快速萌发，因而菌种纯度高，确保出菇健壮；3、减少污染:液体菌种萌发速度超过了杂菌滋长速度，杂菌几乎没有滋生的机会，因此克服了杂菌污染的技术难题，保证了产品质量；4、快速萌发液体菌种具有流动渗透性，接种后各点萌发，生产速度快，比固体菌种可缩短1/2时间；5、效益显著:液体菌种菌丝生长旺盛，菌龄短，出菇齐，质量与产量明显高于传统的生产方式，因而赢得市场获得效益。鉴于此种情况，为了食用菌快速发展，研究开发适于食用菌生产的液体菌种，必将提高食用菌栽培的工业化水平，提高生产效率，增加农民收入，促进食用菌产业快速发展，经济社会效益明显。但是，食用菌液体菌种在生产、接种和栽培中存在菌种活力低、污染率高、生产混乱等问题。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对上述现有技术的不足，提供一种菌种活力高、污染率低的食用菌液体菌种生产方法。为实现上述目的，本专利技术所采取的技术方案如下:一种食用菌液体菌种的液体发酵培养基，按照重量百分比包括:葡萄糖1.5%、玉米粉 3%、蛋白胨 0.2%、黄豆粉 2 %、MgSO4.7Η200.I %、KH2PO40.1 %、VB10.01 %、豆油0.03%，余量为水。其中，优选地，所述食用菌为白灵菇或平菇-89。平菇-89即为平菇CCEF_(89)，是从国外品种中选育出的一个优良菌株，它抗杂性强，产量高，质优，该菌株已在河北、河南、山东、江苏、陕西、山西及北京、天津等十几个省市推广栽种。一种食用菌液体菌种的制备方法，包括以下步骤:I)斜面菌种的活化:将斜面菌种置PDA培养基上，于25°C恒温培养7天，作为一级菌种；2) 一级液体菌种的培养:将种子液体培养基置入300ml三角瓶中，每瓶的装量为70~90ml，将种子液体培养基灭菌后在无菌环境下接种步骤I得到的一级菌种，置于摇床中培养7天；3)液体发酵:将权利要求1所述的发酵液体培养基置入发酵罐中，将液体培养基灭菌后在无菌环境下接种步骤2所得的液体菌种，接种量按重量百分比计为培养基的8~12%，搅拌培养3天，制成菌丝体。其中，优选地，所述步骤2中采用的种子液培养基按重量百分比包括:玉米粉3%，麦麸 2%，葡萄糖 2%，蛋白陈 0.5%，MgSO4.7Η200.1%, KH2PO40.1%, VB11mg/!,豆油0.03%。其中，优选地，所述步骤2中的接种量按重量百比计，为培养基的8~12%。 其中，优选地，所述步骤2中起始pH值为5.5~6.5，摇床转速为200~220r/min。其中，优选地，所述步骤3中液体发酵的条件为:温度为25°C，发酵罐压力0.05MPa,搅拌桨转速 160 ~200rpm,通气量为 0.6 (V/V.min)。其中，优选地，所述食用菌为白灵菇或平菇-89。在液体发酵培养基中，碳源是构成菌体细胞的重要物质，也是食用菌生命活动所需的主要能量来源。白灵菇或平菇-89对碳源的利用相当广泛，既可以利用成分复杂的复合碳源，(玉米粉、淀粉等)，也可以利用单糖和双糖等小分子碳源，如(葡萄糖、蔗糖等)，甚至可以吸收利用醇类，如(山梨醇)。液体培养若用单一的碳源，从菌丝干重考虑，单糖是葡萄糖最佳，而复合碳源中，玉米粉是最好的。从应用生产实际出发，玉米粉的价格远远低于葡萄糖的价格，从而玉米粉的经济效益远远高于葡萄糖的经济效益。在白灵菇或平菇-89液体培养中，不同的碳源对菌丝体的形态有重要影响。其中，复合碳源的培养基能够培养出大量的菌球，且菌球直径较均匀一致，其中菌球直径最小的是玉米粉培养基，菌球直径平均为2.1mm,其次可溶性淀粉、葡萄糖、蔗糖。相比之下，小分子碳源培养基培养出的以菌丝为多，菌球较少。究其原因，是因为复合碳源的成分较复杂，营养成分较丰富，且里面含有较多的固形物质，从而使培养基的黏度增加。由于在一定的范围内，黏度增大有利于菌球的形成，过高或过低的黏度都不利于菌球的生长和繁殖。而小分子碳源，由于其能直接被菌丝吸收利用，在短期内即使菌丝分枝、延伸，菌丝生长以变粗变大为特征，从而在后期出现营养不足，并引起菌丝内部缺氧，形成较大的菌丝片段以致影响了菌球的形成。但观察发现，用葡萄糖等小分子做碳源，在前期菌丝生长较旺盛，后期可能由于营养不足导致生物量有所下降。所以，将复合碳源与小分子碳源结合起来，效果最佳。碳源是发酵培养基的基础，它既是细胞结构的重要组成成分，又是菌体产生各种代谢产物和细胞内贮藏物质的主要原料。在碳源选择上，还要考虑碳源对菌球数的影响。复合碳源的菌球数明显多于小分子碳源，最多的是玉米粉培养基的菌球数，最差的是山梨醇；产生此结果的原因，主要是复合碳源营养更丰富，不仅为白灵菇液体培养提供了碳源，其中还含有某些生长因子，从而更有利于白灵菇的生长。因为菌球数多，可以达到单位体积内有更多的发菌点，更有利于下一级的培养。复合碳源中，玉米粉在生物量、菌球直径以及菌球数方面都是最佳的碳源，而小分子则以葡萄糖最佳。考虑到生产中的成本，本试验确定以玉米粉为复合碳源，小分子以葡萄糖为碳源。由于复合碳源是缓慢利用的营养物质，而小分子碳源有快速被菌丝体吸收的特点，为了相互弥补不足，通过在复合碳源中添加小分子碳源来达到最佳碳源的效果。氮源是食用菌细胞合成蛋白质和核酸必不可少的主要原料，在深层发酵过程中起着非常重要的作用。从白灵菇和平菇-89在黄豆粉、蛋白胨、麦麸中均能很好的生长，而在尿素、硫酸铵、硝酸钾中生长不良，说明白灵菇对无机氮的利用不佳，其中以黄豆粉作为氮源时，菌丝生长量最高，蛋白胨次之。从经济方面考虑，黄豆粉作为农产品来源方便，成本低廉等特点，同时蛋白胨作为生长因了有利于菌丝的生长。在一级液体菌种培养条件中，起始pH值在5.5-6.5之间菌丝都能较好的生长，其中在pH值6.5时菌妊生长量最高。接种量小于10%时，随着接种量的增加，生物量也增加，但超过10%时，由于菌丝体产量基本不受接种量的影响，因此确定10%的接种量为最佳。以SOmL装液量所得的菌丝生物量为最高，高于SOmL的装液量菌丝生物量有所下降，原因是装液量多，则通气量就少，培养基本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种食用菌液体菌种的液体发酵培养基，其特征在于，按照重量百分比含有：葡萄糖1.5％、玉米粉3％、蛋白胨0.2％、黄豆粉2％、MgSO4·7H2O0.1％、KH2PO40.1％、VB10.01％、豆油0.03％，余量为水。
【技术特征摘要】
1.一种食用菌液体菌种的液体发酵培养基，其特征在于，按照重量百分比含有:葡萄糖 1.5%、玉米粉3%、蛋白胨0.2%、黄豆粉2%、]\%504.7Η200.IKH2PO40.HVB10.01%,豆油0.03%，余量为水。2.根据权利要求1所述的一种食用菌液体菌种的液体发酵培养基，其特征在于:所述食用菌为白灵菇或平菇-89。3.一种食用菌液体菌种的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: 1)斜面菌种的活化:将斜面菌种置PDA培养基上,于25°C恒温培养7天，作为一级菌种； 2)一级液体菌种的 培养:将种子液体培养基置入300ml三角瓶中，每瓶的装量为70~90ml，将种子液体培养基灭菌后在无菌环境下接种步骤I得到的一级菌种，置于摇床中培养7天； 3)液体发酵:将权利要求1所述的液体发酵培养基置入发酵罐中，将液体培养基灭菌后在无菌环境下接种步骤2所得的液体菌种，接种量按重量百分比计为培养基的8~12%，搅拌培养3~7天，制成菌丝体...
【专利技术属性】
技术研发人员：李俊九，
申请(专利权)人：河北绿地久乐生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：河北;13
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