苯丙酮尿症PAH基因检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种苯丙酮尿症PAH基因检测试剂盒，包括：（1）一个基因芯片，其上带有PAH基因的13个突变位点及其正常对照互补的核苷酸序列探针，其中探针为SEQ ID Nos：1-26或与SEQ ID Nos：1-26互补的序列；（2）各种引物，用于扩增临床样本中的DNA序列，引物的DNA序列为SEQ ID Nos：27-40。本发明专利技术的PAH基因检测试剂盒提供了检测PAH基因的13个常见突变位点联合检测平台，可实现同步联合检测、提高检测特异性、降低成本、缩短检测时间，对开展苯丙酮尿症人群筛查，遗传咨询和产前诊断具有重大的意义。

【技术实现步骤摘要】
苯丙酮尿症P AH基因检测试剂盒
本专利技术涉及基因领域,具体是用于诊断苯丙酮尿症(phenylketonuria, PKU) PAH基因的检测试剂盒。
技术介绍
苯丙酮尿症是由于苯丙氨酸(phenylalanine, Phe)代谢途径中酶缺陷所致的常见的常染色体隐性遗传病。98—99%的PKU是由于苯丙氨酸轻化酶(phenylalaninehydroxylase, PAH)活性下降或显著缺乏所致，PAH活性下降使Phe不能转化为酪氨酸(tyrosine, Tyr)，导致血液组织中Phe及其旁路代谢产物的堆积及Tyr合成减少。PKU的发病率有种族和地区差异，我国为I / 10000至I / 16000，推算人群中PAH基因突变的携带率(即杂合子)约为1/53。 PAH基因定位于染色体12q24.1，大约由1.5Mb碱基组成。PAH基因是割裂基因，编码区包含13个外显子和12个内含子。转录1353bp的mRNA，翻译成含451个氨基酸的酶单体，单体聚合成有功能的PAH。PAH通常以具有催化活性的四聚体形式存在，在一定的条件下可以分解成没有活性的二聚体。PAH基因数据库登记的突变已经有500余种，国内发现的有40余种。PKU是单基因突变疾病，大部分是复合杂合子，主要位于编码区的小的遗传学变化。在PAH基因中只影响一个或几个氨基酸，其对酶活性的影响主要依赖于突变的形式和位置。PAH基因突变类型多样，可分为致病突变和沉默突变。其中有300余种是错义突变占61.93%，其余依次为缺失突变13.45 %、剪接位点突变10.89%，沉默突变6.06%，无义突变4.92%等。致病突变影响PAH基因转录和翻译及蛋白质的异常折叠、聚合，以及加速降解，从而影响PAH的活性。沉默突变对PAH的活性无影响。PAH基因突变位置多变，所有的外显子、内含子、上下游的非翻译区均发现突变，致病突变大多位于外显子或内外显子的交接区。发生突变的基因的区域频率亦不同，其中E7占16.10%, E6占13.61%，余依次为E10、E11、E12等。PKU的突变呈现明显的异质性，不同种族和地区人群之间PKU突变部位及分布具有较大的差异。欧洲人PKU患者的常见突变位于外显子12和内含子12，分别为R408Q(31% )和IVS12nt+lG>A(ll% );东方PKU患者PAH基因突变数较多，涉及13个外显子。常见的突变位于外显子 7、12、6、3 和 11 等，主要位点为 R413、R243Q、Y240C、R252Q、R111X、Y356X、IVS4nt-lG > A 等。目前，关于苯丙酮尿症常规的临床诊断方法主要有血苯丙氨酸测定、尿液蝶呤谱分析、血红细胞二氢生物喋啶还原酶活性测定、头颅核磁共振检查等，这些传统方法不仅不能对患者进行早期诊断，而且对于明确鉴别杂合子和正常个体有一定困难。目前针对引起苯丙酮尿症发病的根本原因一PAH基因的临床检测方法还未建立，在科研研究方面关于检测PAH基因突变的方法主要有变性梯度凝胶电泳、单链构象多态性(SSCP )分析变性高效液相色谱分析(DHPLC)、DNA测序等。DGGE、SSCP、DHPLC操作均较为费时费力。DNA测序虽然是检测基因突变的金标准，但由于成本较高，不适合PAH基因突变的常规临床检测。因此研制和开发一种特异性强、敏感性高同时又快速、经济，能同时检验多个位点突变的PAH基因检测方法显得尤为重要，对苯丙酮尿症(PKU)的诊断和治疗起着重要的作用。
技术实现思路
本专利技术目的是为了弥补现有化学试验方法对苯丙酮尿症检测的局限性，提供一种苯丙酮尿症P AH基因检测试剂盒。本专利技术的苯丙酮尿症P A H基因检测试剂盒，包括: (I) 一个基因芯片，其上带有PAH基因的13个突变位点及其正常对照互补的核苷酸序列探针(共26条探针)，其中探针为SEQ ID Nos:1_26或与SEQ ID Nos:1_26互补的序列，具体序列如下:本文档来自技高网...

【技术保护点】
苯丙酮尿症ＰＡＨ基因检测试剂盒，包括：（1）一个基因芯片，其上带有PAH基因的13个突变位点及其正常对照互补的核苷酸序列探针，其中探针为SEQ ID Nos：1‑26或与SEQ ID Nos：1‑26互补的序列；（2）各种引物，用于扩增临床样本中的DNA序列，引物的DNA序列为SEQ ID Nos：27‑40。

【技术特征摘要】
1.苯丙酮尿症PA H基因检测试剂盒，包括: (I)一个基因芯片，其上带有PAH基因的13个突变位点及其正常对照互补的核苷酸序列探针，其中探针为SEQ ID Nos:1-26或与SEQ ID Nos:1_26互补的序列； (2 )各种引物，用于扩增临床样本中的DNA序列...

【专利技术属性】
技术研发人员：李云，朱娟娟，谢龙旭，
申请(专利权)人：潮州凯普生物化学有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44