过滤器保持桶、过滤器保持桶组件及旋转柱组件制造技术

一种过滤器保持桶、过滤器保持桶组件及旋转柱组件。所述过滤器保持桶包括：中空主体、第一开口端和第二开口端；与所述第二开口端相比，所述第一开口端具有较小的直径；所述中空主体包括从所述第二开口端朝向所述第一开口端延伸的锥形部和从所述第一开口端朝向所述第二开口端延伸的管形部，其中所述管形部被构造用于对过滤器进行保持。所述过滤器保持桶用于按照需要减小二氧化硅过滤器的体积，这导致减小的表面面积/容量/体积，从而允许小的洗脱体积用于从酶促反应混合物、琼脂糖凝胶和低浓度样本中纯化和浓缩核酸。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】一种过滤器保持桶、过滤器保持桶组件及旋转柱组件。所述过滤器保持桶包括：中空主体、第一开口端和第二开口端；与所述第二开口端相比，所述第一开口端具有较小的直径；所述中空主体包括从所述第二开口端朝向所述第一开口端延伸的锥形部和从所述第一开口端朝向所述第二开口端延伸的管形部，其中所述管形部被构造用于对过滤器进行保持。所述过滤器保持桶用于按照需要减小二氧化硅过滤器的体积，这导致减小的表面面积/容量/体积，从而允许小的洗脱体积用于从酶促反应混合物、琼脂糖凝胶和低浓度样本中纯化和浓缩核酸。【专利说明】过滤器保持桶、过滤器保持桶组件及旋转柱组件
本技术大致涉及过滤器保持桶、过滤器保持桶组件及旋转柱组件，更具体地，涉及用于从酶促反应混合物和/或低浓度样本中纯化和浓缩DNA和/或RNA的旋转柱。
技术介绍
在本领域中，从复杂的生物起始物质中分离核酸典型地在强变性和还原条件下进行。在分离过程中，包含核酸的起始物质使用蛋白质降解酶进行部分溶解。这将释放随后被提取至苯酚和/或三氯甲烷中的核酸。然后，核酸典型地可通过使用例如透析或乙醇沉淀的技术从水相中重新获取。这种分离技术的问题在于费时、需要在设备上花费相当大的支出并且已经显现的对健康的危害。已经开发了从不同的生物起始物质中分离核酸的可替代方法，例如琼脂糖凝胶的使用。在此方法中，包含要被分离的核酸的琼脂糖溶解在离液盐溶液中，随后将核酸结合在玻璃颗粒上。然后,从玻璃颗粒清洗并洗脱核酸。为了在不同的离液盐存在的条件下基于将核酸结合至矿物载体(例如硅胶粉末或玻璃纤维粉末)的原则分离核酸的目的，已开发了许多试剂盒。使用这种试剂盒，可以采用小样本量，其特别地与病毒核酸分尚相关。为了为使用者提供更方便的方法，开发了一种“单管”方法，其中，与离液盐结合的起始物质放置在包含一稳固插入的玻璃纤维过滤器或二氧化硅层的旋转柱中，其允许核酸在单个步骤中与玻璃或二氧化硅结合。用于核酸纯化的旋转柱的使用基于一般的方法；首先从一定体积的溶解产物中分离核酸，然后通过将核酸结合在相对小体积的固相亲和树脂中而进行浓缩。例如，当使用传统标准尺寸的小型柱时，大约800 μ I的初始溶液(包括约200 μ I溶解样本，其余为结合缓冲剂)被装载至约50-100 μ I的二氧化硅过滤器或任何其他合适的固态结合树脂上。使用这种方法，结合树脂的体积决定了洗脱缓冲剂的体积。由于较小体积的洗脱缓冲剂的使用对核酸产量有消极影响，因此洗脱缓冲剂的体积应当至少与结合树脂本身的体积(在此特殊情况下约为100-200 μ I)相同。当在纯化过程中有从相对大体积的初始生物物质中浓缩核酸的需要时，更小体积的固态结合相应当与大体积容量的柱结合使用，以容纳更大体积的初始样本和结合缓冲剂。问题在于，旋转柱与一些要分离的样本体积相比非常大。但是，由于旋转柱的标准尺寸，不可能简单地制作较小的容器，因为这些容器不能装配至标准离心机中。对此问题的一个解决办法包括使用塑料漏斗结构，其覆盖过滤器的一部分，由此限制了过滤器的有效表面面积，并因此限制其对溶解样本的暴露量。但是，液体能够穿过过滤器的宽度从旁路散开，因此过滤器的有效体积没有完全减小。目前，当需要减小洗脱体积并由此减小过滤器体积时，工业中当前使用两种方法。在第一种技术中，装配至小型旋转柱中的直径约为7mm的过滤器由漏斗形环覆盖，其内径明显小于外径，从而减小上述过滤器与样本接触的有效表面面积。这种方法的另一缺点在于一部分样本材料可能扩散通过所有的过滤器，而从进一步的洗脱程序除去。在第二种技术中，玻璃纤维过滤器插入至旋转柱的适配部分，而非插入至圆柱部分，适配部分用于将旋转柱插入至真空歧管中。由于这种适配部分的直径仅为约2_，因此过滤器的有效表面面积减小了，但是由于与真空歧管的接触，样本被污染的风险增加了。
技术实现思路
本技术，即具有期望固相过滤器参数的可插入式塑料桶的使用解决了上述问题，并且由于其允许使用不同体积的反应物和结合剂将核酸释放至期望数量的固态亲和树脂上而从不同体积的起始物质中纯化和浓缩核酸，因此可用于全部范围的标准旋转柱(小型、中型、大型)。使用这种可插入式塑料桶在下游应用的要求范围内实现了期望的核酸浓缩，而不需要执行另外的浓缩步骤。通常，需要起始样本的体积与溶解和/或结合溶液的体积成一定比例，以确保良好的细胞溶解并提高核酸产量。因此，通常不可能在将洗脱后满足核酸浓度要求度的样本装载至柱之前减小溶解材料的体积。在这种情况下，可插入式桶用于方便地解决此问题。根据本技术的第一方面，提供一种过滤器保持桶，包括:中空主体、第一开口端和第二开口端；与所述第二开口端相比，所述第一开口端具有较小的直径；所述中空主体包括从所述第二开口端朝向所述第一开口端延伸的锥形部和从所述第一开口端朝向所述第二开口端延伸的管形部，其中该管形部被构造用于对过滤器进行保持。优选地，所述过滤器保持桶被构造为与旋转柱结合使用。所述旋转柱可以为大型旋转柱、中型旋转柱或小型旋转柱。大型旋转柱被构造为装配至50ml的收集管中，并且在装配有标准的直径约26_、深度约2-4_的过滤器时典型地具有约l_3ml的洗脱体积。各种特征(孔尺寸、厚度、过滤层的数量)的玻璃纤维过滤器可用于实现要求的有效过滤体积和液体流量。为了避免结合核酸的损耗，在这种柱中使用的洗脱缓冲剂体积必须至少与过滤器的体积相同。中型旋转柱被构造为装配至15ml的收集管中，并且在装配有标准的直径约12mm、深度约2-4_的过滤器时典型地具有约0.5-lml的洗脱体积。小型旋转柱被构造为装配至2ml的收集管中，并且在装配有标准的直径约7_、深度约2-4_的过滤器时典型地具有约50-200 μ I的洗脱体积。将不同尺寸和设计的桶与本技术中公开的标准的大型、中型和小型柱组合使用为使用者根据他们的需要改变玻璃纤维过滤器的直径提供了灵活性。优选地，所述第一开口端具有延伸越过开口的交叉杆。优选地，所述第一开口端具有延伸越过开口的两个交叉杆。优选地，在大型旋转柱过滤器保持桶的情况下，所述管形部的内径约为11.9mm，并被构造为保持直径约为12_的过滤器。优选地，在中型旋转柱过滤器保持桶的情况下，所述管形部的内径约为6.9mm,并被构造为保持直径约为7_的过滤器。优选地，在小型旋转柱过滤器保持桶的情况下，所述管形部的内径约为5.9mm,并被构造为保持直径约为6_的过滤器。优选地，在用于微型洗脱的小型旋转柱过滤器保持桶的情况下，所述管形部的内径约为2.24mm,并被构造为保持直径约为2.35mm的过滤器。优选地，所述锥形部与水平方向的夹角约为60°至90°，更优选地，所述锥形部与水平方向的夹角约为70°至80°。根据本技术的第二方面，提供一种过滤器保持桶组件，包括过滤器和如上所述的过滤器保持桶。优选地，在大型旋转柱过滤器保持桶的情况下，所述过滤器具有约为200-500 μ I的体积。优选地，在中型旋转柱过滤器保持桶的情况下，所述过滤器具有约为50-150 μ I的体积。优选地，在小型旋转柱过滤器保持桶的情况下，所述过滤器具有约为50-100 μ I的体积优选地，在用于微型洗脱的小型旋转柱过滤器保持桶的情况下，所述过滤器具有约为8-15 μ I的体积本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种过滤器保持桶，包括： 中空主体、第一开口端和第二开口端；与所述第二开口端相比，所述第一开口端具有较小的直径；所述中空主体包括从所述第二开口端朝向所述第一开口端延伸的锥形部和从所述第一开口端朝向所述第二开口端延伸的管形部，其中所述管形部被构造用于对过滤器进行保持。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：约兰塔·维库特，杰夫·库尔林，丹尼尔·希姆希，格里塔·多容泰特，
申请(专利权)人：赛默飞世尔科技波罗的海有限公司，
类型：新型
国别省市：立陶宛;LT