本发明专利技术公开了一种抗氧化的牛冷冻精液稀释液，包括下列质量份的原料组成：三羟甲基氨基甲烷20~26，柠檬酸三钠10~15，果糖7~15，蒸馏水700~800，新鲜卵黄230~260，亚硒酸钠0.125~0.375，维生素E2~32，甘油90-95，注射用青霉素钾（规格为160万单位/g）1~2、注射用硫酸链霉素（规格为100万单位/g）1~2。制备方法包括制备基础缓冲液、制备基础稀释液、制备精液稀释液，然后将制备好的精液稀释液移至4℃条件下平衡5-20min，制得抗氧化的牛冷冻精液稀释液。本发明专利技术较现有技术的牛冷冻精液稀释液的精子活率提高了24.56个百分点，4h精子活率提高了12.39个百分点，精子顶体完整率提高了38.72个百分点，GSH－PX的活性提高了260%，精子畸形率则下降了5.49个百分点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于动物冷冻精液生产技术，具体涉及到一种添加微量元素硒和维生素E的冷冻精稀释液的制作方法。
技术介绍
牛的繁殖是养牛生产过程中的一个重要环节，牛群数量的增加、质量的提高都必须通过繁殖这一过程来实现。人工授精与胚胎移植技术是养牛业生产中两次重大技术革命，能够充分发挥优秀种公牛和母牛的繁殖潜力，显示出很好的应用前景。人工授精与胚胎移植技术应用的前提是牛精液的保存技术的应用。精液冷冻保存的成功是人工授精技术上的一项重大革新，它不但解决了精液长期保存的问题，使精液的应用不受时间、地域和种畜生命的限制，而且提高优良公畜的利用率，加快品种的育成和改良的步伐。牛作为畜牧业生产中自然繁殖率最低的主要畜种之一，应用人工授精与胚胎移植技术提高牛繁殖力的意义更加重大。 种公牛精液在冷冻保存时，精清对精子的保护能力是有限的，因此，进行精液的冷冻保存就要配合使用稀释液，来最大程度的保护精子，因而稀释液在精液冷冻保存中突显其重要性，成为保证精液品质的主要因素。人工授精已是一门成熟的技术，但使用冷冻精液进行人工授精时，其受精效果比使用新鲜精液的效果较低，其原因在于新鲜精液在制作冷冻精液时，在其冷冻和解冻时精子的质量变化，是影响人工授精成功的重要因素。现有的冷冻精液稀释液通常是加入稀释剂、营养剂、抗菌、抗冻、防休克和缓冲保护剂等，而对精液在冷冻和解冻过程中的能抗氧化损伤的物质，则局限在维生素E、维生素C和谷胱甘肽等物质上，由于抗氧化损伤能力不足，降低了解冻后的活率、生存率和顶体完整率等，降低了精液质量。
技术实现思路
本专利技术是针对现有冷冻精液稀释液的抗氧化能力不足的现状，提供一种抗氧化的牛冷冻精液稀释液，它是在冷冻精液稀释液常用的组成成分的基础上，添加了一定浓度的微量元素硒和维生素E，提高了冷冻精液稀释液的抗氧化能力，提高了精子活力与顶体完整率，延长了精子生存时间，提高了冷冻精液质量的目的。本专利技术的另一目的是提供抗氧化的牛冷冻精液稀释液的制作方法。本专利技术是通过以下技术方案实现的。本专利技术的抗氧化的牛冷冻精液稀释液，包括下列质量份的原料组成:三羟甲基氨基甲烷20~26，柠檬酸三钠10~15，果糖7~15，蒸馏水700~800，新鲜卵黄230~260，亚硒酸钠0.125~0.375，维生素E2~32，甘油90-95，注射用青霉素钾(规格为160万单位/g)1~ 2、注射用硫酸链霉素(规格为100万单位/g) 1~2. 本专利技术的抗氧化的牛冷冻精液稀释液制备方法，包括如下步骤:(I)制备基础缓冲液称取20-26份三羟甲基氨基甲烷、10-15份柠檬酸三钠、7~15份果糖混合均匀后，加入700^800份蒸馏水中搅拌均匀，备用: (2)制备基础稀释液称取230-260份新鲜卵黄与(I)制备的基础缓冲液均匀混合，再加入1-2份的注射用青霉素钾(规格为160万单位/g)和2份注射用硫酸链霉素(规格为100万单位/g)，搅拌均匀，备用； (3)制备精液稀释液称取0.125、.375份的亚硒酸钠、2~32份的维生素E加入(2)制备好的基础稀释液中，搅拌均匀后再称取90-95份甘油加入基础稀释液，混合均匀，备用； (4)将(3)制备好的精液稀释液移至4°C条件下平衡5-20min，制得抗氧化的牛冷冻精液稀释液。本专利技术的抗氧化的牛冷冻精液稀释液，优选下列质量份的原料组成:三羟甲基氨基甲烷22-24份，柠檬酸三钠12-13份，果糖10-12份，蒸馏水750-780份，新鲜卵黄240-250份，亚硒酸钠0.25-0.3份，维生素E20-25份，甘油92-94份，注射用青霉素钾(规格为160万单位/g) 1.5-2份、注射用硫酸链霉素(规格为100万单位/g) 1-1.5份。本专利技术的抗氧化的牛冷冻精液稀释液制备方法，包括如下步骤: (1)制备基础缓冲液取22~24份三羟甲基氨基甲烷、12~13份柠檬酸三钠、10-12份果糖混合均匀后，加入750^780份蒸馏水中搅拌均匀，备用: (2)制备基础稀释液取240-250份新鲜卵黄与(I)制备的基础缓冲液均匀混合，再加入1.5^2份的注射用青霉素钾(规格为160万单位/g)和f 1.5份注射用硫酸链霉素(规格为100万单位/g)，搅拌均匀，备用； (3)制备精液稀释液取0.25、.3份的亚硒酸钠、20-25份的维生素E加入(2)制备好的基础稀释液中，搅拌均匀后再取92-94份甘油加入基础稀释液，混合均匀，备用； (4)将(3)制备好的精液稀释液移至4°C条件下平衡5-20min，制得抗氧化的牛冷冻精液稀释液。牛的精子是一个高度分化、具有活动性并含有遗传物质的细胞，精子质膜表面有脂蛋白性质的薄膜。头部主要由细胞核组成，其中主要含核蛋白与DNA、RNA等组成。核的前面被顶体覆盖。顶体是一个双层的薄膜囊，内含有精子中性蛋白酶、透明质酸酶等，这些酶都与受精有关。顶体相当不稳定，容易变性和从头部脱落，会使精子的受精能力降低或完全散失。在制取冷冻精液时必须要对精液进行冷冻，而在使用冷冻精液时则必须要解冻冷冻精液。精子在冷冻和解冻过程中产生大量活性氧(R0S)，活性氧可以氧化不饱和脂肪酸。精子膜和精子中的线粒体膜上富含不饱和脂肪酸，对脂质过氧化非常敏感，过量的活性氧和膜磷脂过氧化可导致冻存精子活力降低。具体表现为精子尾部中段和主段胞膜破裂，轴丝外露，线粒体异常。线粒体为能源物质氧化代谢释放三磷酸腺苷(ATP)的场所，其结构出现异常势必导致功能异常，从而引起稀释液中的能源物质的代谢受阻，ATP产生不足，这样精子的运动受到影响，最终精子游向卵子冲破卵膜的能力降低，无法完成正常的受精过程。所以冷冻精液品质下降，用冻精配种，受胎率不高且很不稳定。活性氧属于自由基，自由基是在体内代谢过程中产生的。精子内适宜数量的自由基对精子是无害的，它们参与着信号传递等过程。一旦自由基超出本身的清除能力，会造成机体氧化损伤。自由基对精子的损害主要使脂质过氧化而破坏细胞膜和内膜系统，精子质膜遭受自由基的攻击就会失去弹性，对蛋白质巯基、甲硫基或色氨酸残基反应，导致蛋白质分子聚合或交联，导致蛋白质功能或酶活性的丧失；破坏核酸结构，攻击嘌呤与嘧啶碱基，导致碱基的改变和丢失，使基因表达异常，出现突变，从而引起精子发生系统性紊乱，出现衰老。精子本生具有平衡自由基和清除多余自由基的能力，精子内自由基清除系统包括酶类组成的第一道防线:如超氧化物歧化酶(SOD)，谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),第二道防线由低分子清除剂组成:如辅酶Qltl、谷胱甘肽、维生素E、胡萝卜素、半胱氨酸，第三道防线是利用DNA和蛋白质的修复、蛋白质疏基的还原、粘I旲ATP的恢复及细胞内钙尚子的减少来拮抗自由基。本专利技术在牛冷冻精液稀释液，除常规应用的组分外，添加了一定浓度的微量元素硒。硒是谷胱甘肽过氧化物酶等若干抗氧化酶的必需成分，它通过消除精子质膜和线粒体膜上已经产生的脂质过氧化物，阻断活性氧和自由基的致病作用。本专利技术在牛冷冻精液稀释液中还添加了维生素E。维生素E是体内重要的脂溶性阻断型抗氧化剂，精子质膜中脂类的过氧化反应是自由基的连锁反应，其后果是使自由基不断增多，过氧化反应不断加快，最终使脂肪酸链断裂而破坏精子质膜、内膜结构。维生素E能捕捉自由基使其苯本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种抗氧化的牛冷冻精液稀释液，其特征在于，抗氧化的牛冷冻精液稀释液包括下列质量份的原料组成： 三羟甲基氨基甲烷20~26，柠檬酸三钠10~15，果糖7~15，蒸馏水700~800，新鲜卵黄230~260，亚硒酸钠0.125~0.375，维生素E2~32，甘油90‑95，注射用青霉素钾（规格为160万单位/g）1~2、注射用硫酸链霉素（规格为100万单位/g）1~2；抗氧化的牛冷冻精液稀释液制备方法，包括如下步骤：（1）制备基础缓冲液 取20~26份三羟甲基氨基甲烷、10~15份柠檬酸三钠、7~15份果糖混合均匀后，加入700~800份蒸馏水中搅拌均匀，备用：（2）制备基础稀释液 取230~260份新鲜卵黄与 (1)制备的基础缓冲液均匀混合，再加入1~2份的注射用青霉素钾（规格为160万单位/g）和1~2份注射用硫酸链霉素（规格为100万单位/g），搅拌均匀，备用；（3）制备精液稀释液 取0.125~0.375份的亚硒酸钠、2~32份的维生素E加入(2)制备好的基础稀释液中，搅拌均匀后再取90‑95份甘油加入基础稀释液，混合均匀，备用；（4）将(3)制备好的精液稀释液移至4℃条件下平衡5‑20min，制得抗氧化的牛冷冻精液稀释液。...
【技术特征摘要】
1.一种抗氧化的牛冷冻精液稀释液，其特征在于，抗氧化的牛冷冻精液稀释液包括下列质量份的原料组成:三羟甲基氨基甲烷20~26，柠檬酸三钠10-15，果糖疒15，蒸馏水700~800，新鲜卵黄230~260，亚硒酸钠0.125~0.375，维生素Ε2~32，甘油90-95，注射用青霉素钾(规格为160万单位/g) f 2、注射用硫酸链霉素(规格为100万单位/g) 1-2 ； 抗氧化的牛冷冻精液稀释液制备方法，包括如下步骤: (1)制备基础缓冲液取20-26份三羟甲基氨基甲烷、10-15份柠檬酸三钠、7~15份果糖混合均匀后，加入700^800份蒸馏水中搅拌均匀，备用: (2)制备基础稀释液取230-260份新鲜卵黄与(I)制备的基础缓冲液均匀混合，再加入1-2份的注射用青霉素钾(规格为160万单位/g)和2份注射用硫酸链霉素(规格为100万单位/g)，搅拌均匀，备用； (3)制备精液稀释液取0.125、.375份的亚硒酸钠、2~32份的维生素E加入(2)制备好的基础稀释液中，搅拌均匀后再取90-95份甘油加入基础稀释液，混合均匀，备用； (4)将(3)制备好的精液稀释液移至4°C条件下平衡5-20min，制得抗氧化的牛冷冻精液稀释液。2.一种抗氧化的牛...
【专利技术属性】
技术研发人员：白元生，张拴林，杨子森，刘晓妮，师周戈，赵宇琼，
申请(专利权)人：山西省生态畜牧产业管理站，
类型：发明
国别省市：山西;14
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