检体前处理方法和使用了该方法的免疫测定方法技术

本发明专利技术提供检体前处理方法和使用了该方法的免疫测定方法。所述的检体前处理方法为免疫测定方法中的检体前处理方法，其特征在于，所述检体为来自于鼻涕的检体，在实施所述免疫测定方法之前用蛋白酶对所述检体进行处理，其中，所述蛋白酶为半碱性蛋白酶(EC3.4.21.63)，所述检体中的测定对象物质为流感病毒；所述免疫测定方法为下述方法：使所述检体中的测定对象物质与负载在不溶性载体粒子上且与所述测定对象物质发生免疫反应的免疫学物质发生免疫反应，测定此时产生的所述不溶性载体粒子的凝集程度，由此测定所述测定对象物质的浓度。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术提供。所述的检体前处理方法为免疫测定方法中的检体前处理方法，其特征在于，所述检体为来自于鼻涕的检体，在实施所述免疫测定方法之前用蛋白酶对所述检体进行处理，其中，所述蛋白酶为半碱性蛋白酶(EC3.4.21.63)，所述检体中的测定对象物质为流感病毒；所述免疫测定方法为下述方法：使所述检体中的测定对象物质与负载在不溶性载体粒子上且与所述测定对象物质发生免疫反应的免疫学物质发生免疫反应，测定此时产生的所述不溶性载体粒子的凝集程度，由此测定所述测定对象物质的浓度。【专利说明】本分案申请为申请号200580042948.2 (国际申请号PCT / JP2005 / 022883)、申请日2005年12月13日的专利技术专利的分案申请，该专利技术专利申请的专利技术名称为“”。
本专利技术涉及。
技术介绍
利用了抗原抗体反应的免疫测定方法由于能够以高灵敏度检测出检体或试样中的成分或者物质，因此在临床检查领域中，以血液(血浆、血清、全血)、尿、脊髓液、粪便等各种检体等为对象而被利用。作为利用了抗原抗体反应的免疫测定方法，例如有酶免疫测定法(EIA法)、荧光免疫测定法(FIA)、化学发光免疫测定法(CLIA)、免疫层析法、免疫比浊法TIA法)、胶乳免疫比浊法(LTIA)等各种方法。其中，免疫比浊法、胶乳免疫比浊法、在载玻片上的胶乳凝集法(以下有时将这3种方法统称为“免疫凝集法”)由于其原理为不需要将抗原和未反应的抗体进行分离的B /F(结合/自由)分离的操作，因此称为均相免疫测定。而且，作为简便性和迅速性优异的方法，适用在例如CRP (C反应性蛋白)、AS0(抗链球菌溶血素O)、RF(类风湿因子)、尿中微量白蛋白、弹性蛋白酶等多个项目的临床检查中。这些免疫凝集法的测定对象检体通常为血液(血清、血浆、全血)、尿、宫颈粘液等。另一方面，对于作为鼻腔擤出液、鼻腔吸引液、鼻腔洗涤液等采集的来自于鼻涕的检体，作为其测定的项目，有时用于判定流感病毒、RS病毒等呼吸器官感染症。但是，这些项自的测定方法的原理均为利用了免疫层析法或膜过滤器的EIA法，对于来自于鼻涕的检体，利用免疫凝集法的测定方法目前还未实用化(例如参照非专利文献I?4)。另外，来自于鼻涕的检体根据个别检体的差别而有一定程度的不同，多为具有某种程度的粘性的检体，由该情况也可知，除了目标的测定对象物质之外，还非常大量地含有糖蛋白等高分子物质。在利用了免疫层析法或膜过滤器的EIA法中，虽然原因物质还未确定，但已知有时会发生检体中的共存物质发生非特异性反应、从而导致错误检查结果的情况。由于错误的检查结果导致假阳性时，会延误真正病因的确定，而且有时还会发生由于不恰当的措施而加重病症使其恶化的情况。因此，来自于鼻涕的检体例如添加表面活性剂后使粘度降低、或者预先使用滤纸或滤器等将来自于鼻涕检体中的固体物质(共存物质)除去后进行测定。但是，即便这样，由于非特异性的反应，还是产生很多假阳性。本专利技术人等对与利用了简单的免疫层析法或膜过滤器的EIA法同样地、利用简单的免疫凝集法对来自于鼻涕的检体也进行测定，对此进行了研究。但是，在仅添加表面活性齐U、或仅预先进行固体成分的除去处理的检体前处理中，仍然发生了很多的非特异性反应，本来应该为阴性的检体呈现阳性，即产生了假阳性。非专利文献1:日本小儿科学会杂志108卷3号406-411 (2004)非专利文献2:感染症学杂志第78卷9号865-871 (2004)非专利文献3:感染症学杂志第77卷12号1007-1014(2003)非专利文献4:医学检查 VOL.52N0.2141-144(2003)
技术实现思路
因此，本专利技术的目的在于提供在免疫测定方法中防止非特异性反应、同时能够对来自于鼻涕的检体进行测定的。为了实现上述目的，本专利技术的检体前处理方法为免疫测定方法中的检体前处理方法，上述检体为来自于鼻涕的检体，是在实施上述免疫测定方法之前利用蛋白酶对上述检体进行处理的检体前处理方法。另外，本专利技术的免疫测定方法为利用了免疫反应的免疫测定方法，检体为来自于鼻涕的检体，是对该检体通过上述本专利技术的检体前处理方法进行前处理之后，实施上述免疫反应的免疫测定方法。这样，如果利用蛋白酶预先对来自于鼻涕的检体进行处理，则即便是免疫测定方法，也能够进行防止了非特异性反应的测定。结果，通过本专利技术，可以实现简便性和迅速性优异的来自于鼻涕的检体的测定。【具体实施方式】下面，详细地说明本专利技术。本专利技术中，上述免疫测定方法没有特别限定，例如有下述方法:使上述检体中的测定对象物质与负载在不溶性载体上且与上述测定对象物质发生免疫反应的免疫学物质发生免疫反应，测定此时所产生的上述不溶性载体的凝集程度，由此对上述测定对象物质的浓度进行测定(所谓的“免疫凝集法”)。本专利技术的检体前处理方法优选用于上述免疫凝集法中。本专利技术中适用的蛋白酶没有特别限定，例如除了来自于动物、植物的蛋白酶之外，还可以列举出曲霉菌属、杆菌属、链霉菌属、根霉属、青霉属等来自于微生物的蛋白酶。作为具体的酶的名称，例如可以列举出半碱性蛋白酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶、弹性蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶(subtilisin)、蛋白酶K、链霉蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶等。蛋白酶并非仅可使用I种，还可以并用2种以上。来自于鼻涕的检体例如可以使用作为鼻腔擤出液、鼻腔吸引液、鼻腔洗涤液而获得的物质。另外，本专利技术中，当测定对象物质为流感病毒时，可以优选使用。此时,如果使用本专利技术，则通过对上述不溶性载体的凝集程度进行定量，可以定量地测定病毒量。通过对应于临床症状进行判断，当检体中的病毒量多时，则可以预想该患者的重病程度达到某种程度，另外，可以预想该患者对周围人的传染力较强。当随着发病时间的推移病毒量减少时，也可以容易地判断为感染末期，可以有助于治疗方针和对患者进行说明。利用蛋白酶进行的来自于鼻涕的检体的处理除了使用蛋白酶之外，没有特别限定，例如与测定蛋白酶的酶活性的情况相同，在酶活性有效的P H范围内，可以在一般的条件下进行。当蛋白酶为半碱性蛋白酶时，例如将酶溶解在50mM的CHES (N-环己基-2-氨基乙磺酸)缓冲液(pH为9.8、含有I重量％的正-辛酰基-N-甲基葡萄糖酰胺、0.1重量％的EDTA *2Na、0.9重量％的NaCl、0.09重量％的叠氮化钠)中，将该溶液作为检体提取液，使其与来自于鼻涕的检体发生反应。另外，上述检体提取液的缓冲液并非限定于上述CHES缓冲液，例如也可以优选使用磷酸缓冲液、Tris-盐酸(三羟甲基氨基甲烷盐酸盐)缓冲液、CAPS (N-环己基-3-氨基丙磺酸)缓冲液等。另外，缓冲液的pH例如优选为pH5?11，在该PH范围的情况下，例如缓冲剂的种类也没有特别限定。当蛋白酶为胰蛋白酶、糜蛋白酶、弹性蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶时，例如可以溶解在50mM的Tris-盐酸缓冲液(pH为8.4、含有4.1重量％的正-辛酰基-N-甲基葡萄糖酰胺、0.03重量％的0&(:12、0.9重量％的似(:1、0.09重量％的叠氮化钠)，然后与来自于鼻涕的检体发生反应。在这些优选的蛋白酶中，例如从最不易受到检体的影响、且与上述不溶性载体的相容性特别良好的观点出发，特别优选使用半碱性蛋白酶(EC3.4.21本文档来自技高网...

【技术保护点】
检体前处理方法，其为免疫测定方法中的检体前处理方法，其特征在于，所述检体为来自于鼻涕的检体，在实施所述免疫测定方法之前用蛋白酶对所述检体进行处理，其中，所述蛋白酶为半碱性蛋白酶(EC3.4.21.63)，所述检体中的测定对象物质为流感病毒；所述免疫测定方法为下述方法：使所述检体中的测定对象物质与负载在不溶性载体粒子上且与所述测定对象物质发生免疫反应的免疫学物质发生免疫反应，测定此时产生的所述不溶性载体粒子的凝集程度，由此测定所述测定对象物质的浓度。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：大代京一，大宫一紘，泉井直子，
申请(专利权)人：爱科来株式会社，
类型：发明
国别省市：日本;JP