一种尖吻蝮蛇蛇毒类凝血酶的制备方法技术

一种尖吻蝮蛇蛇毒类凝血酶的制备方法，其具体制备步骤为：蛇毒经浸泡溶解、离心；上清液经DEAE-Sephadex?A-50离子交换层析；含有效成分的洗脱液经透析；透析样品再经Q-Sepharos离子交换层析；含有效成分的洗脱液经透析；透析样品再经阴离子葡聚糖凝胶柱层析，即可得到单一成份的类凝血酶；本方法可以在常温下进行操作，并具有工艺稳定、适合规模化生产、操作简单、产率高、产品纯度高等特点。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
１．一种尖吻蝮蛇蛇毒类凝血酶的制备方法，其特征在于：在常温下，从尖吻蝮蛇蛇毒中提取类血凝酶的步骤为：（１）、尖吻蝮蛇蛇毒用缓冲液浸泡、溶解过夜，离心去除沉淀，得上清液；（２）、蛇毒上清液经ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ　Ａ－５０离子交换层析，上样结束后，用ｐＨ７．５的Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲溶液进行洗脱，紫外检测仪２８０ｎｍ检测，至读数达到基线后，再用ｐＨ７．５含０～０．１Ｍ　ＮａＣＬ的Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲溶液梯度洗脱，紫外检测仪２８０ｎｍ检测，收集活性峰，目的类凝血酶为第４峰；（３）、第４峰用ｐＨ８．０的Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲溶液透析；（４）、透析后样品经Ｑ－Ｓｅｐｈａｒｏｓ离子交换层析，上样结束后，用ｐＨ８．０的Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲溶液进行洗脱，紫外检测仪２８０ｎｍ检测，至读数达到基线后，再用ｐＨ８．０含０～０．１ＭＮａＣＬ的Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲溶液梯度洗脱，紫外检测仪２８０ｎｍ检测，收集活性峰，目的类凝血酶为第３峰；（５）、第３峰用ｐＨ７．５的Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲溶液透析；（６）、透析后样品经阴离子葡聚糖凝胶层析，上样结束后，用ｐＨ７．５的Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲溶液进行洗脱，紫外检测仪２８０ｎｍ检测，至读数达到基线后，再用ｐＨ７．５含０～０．１Ｍ　ＮａＣＬ的Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲溶液梯度洗脱，紫外检测仪２８０ｎｍ检测，收集挂柱峰，得到单一成份的尖吻蝮蛇蛇毒类凝血酶。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：薛百忠，李小军，王宏英，薛雁，李秀林，丁忠福，薄学军，
申请(专利权)人：辽宁诺康医药有限公司，
类型：发明
国别省市：89