一种海洋溢油生物毒性快速检测方法技术

本发明专利技术涉及一种海洋溢油生物毒性快速检测方法，该方法通过发光细菌作为检验海洋溢油生物毒性的受试生物，同时利用人工海水配制水融合组分（ＷＡＦ，ｗａｔｅｒ　ａｃｃｏｍｍｏｄａｔｉｏｎ　ｆｒｉｃｔｉｏｎ），解决了以往发光细菌实验中由于应用纯水作为配制水融合组分的溶剂，从而降低了海洋发光细菌的盐度，改变了发光细菌的生活条件而给实验带来的误差。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种海洋溢油生物毒性快速检测方法，其特征在于，该方法步骤如下：　一、发光细菌的培养：　菌种采用明亮发光杆菌Ｔ３变种（Ｐｈｏｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｐｈｏｓｐｈｏｒｅｕｍ），制备发光菌新鲜菌悬液：　（１）斜面菌种培养：在新鲜斜面上接出第一代斜面，２５℃±０．５℃培养２４ｈ后立即转接第二代斜面，２５℃±０．５℃培养２４ｈ后再转接第三代斜面，２５℃±０．５℃培养２４ｈ后备用；　（２）摇瓶菌液培养：取第三代斜面菌种近一环，接种于装有３０ｍｌ细菌培养液的１００ｍｌ三角烧瓶中，２５℃±０．５℃，１６０ｒ／ｍｉｎ下培养２４ｈ备用；　（３）将培养后的发光细菌菌悬液稀释至每毫升１０↑［８］个～１０↑［９］个细胞，初始发光度不低于８００ｍＶ，备用；　斜面和菌液的营养基为：　胰蛋白胨０．５ｇ　ＮａＣｌ　３ｇ　Ｎａ↓［２］ＨＰＯ４　０．５ｇ　ＫＨ↓［２］ＰＯ４　０．５ｇ　酵母０．５ｇ　甘油　０．３ｇ　蒸馏水　１００ｍｌ　固体培养基加琼脂１．６９ｇ　二、水融合组分的制备：　配置人工海水作为ＷＡＦ中的水溶液和稀释水溶液，人工海水的配方为：　ＮａＣｌ　２０ｇ　ＭｇＳＯ↓［４］　３．６ｇ　ＭｇＣｌ　７．２ｇ　无水ＣａＣｌ↓［２］　０．７ｇ　蒸馏水　１０００ｍｌ　将润滑油设置１０ｇ／Ｌ、８ｇ／Ｌ、６ｇ／Ｌ、４ｇ／Ｌ、２ｇ／Ｌ、１ｇ／Ｌ、０．５ｇ／Ｌ　７个载荷率梯度；　制备ＷＡＦ溶液，如果试验材料比水密度小，应采用从容器底部搅拌试验材料的搅拌器，而对于那些密度比水大的试验材料，则应采用从容器顶部搅拌试验溶液的搅拌器，搅拌器的搅拌速度应该适当、匀速，为１２００－１５００ｒｐｍ／ｍｉｎ，一般液面漩涡的深度为ＷＡＦ溶液制备容器中试验液高度的１０％－３５％，搅拌时间为２４ｈ，搅拌后，静置４ｈ；　三、发光细菌相对发光度的测定　测定时的室温要控制在２０～２５℃，同一批样品在测定过程中要求温度波动不超过±１℃。取若干试管，给每支作为对照管的试管加１．９８ｍｌ的人工海水，给每支作为样品管的试管加１．９８ｍｌ的ＷＡＦ溶液。向每管中加入步骤一制备的备用的发光细菌菌液０．０２ｍｌ，放入发光光度计中检测；　相对放光度（％）＝样品管发光度（ｍＶ）／对照管发光度（ｍＶ）　四、半数效应载荷率ＥＬ↓［５０］的确定：　（１）绘制试验材料载荷率（ｍｇ／Ｌ）与其相对发光度（％）的相关曲线或相关方程；　（２）在相关曲线坐标图上，相对发光度５０％处画一水平线，与相关曲线有一交点，该点的载...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘长安，张世宇，
申请(专利权)人：国家海洋环境监测中心，
类型：发明
国别省市：91[中国|大连]