【技术实现步骤摘要】
一种超灵敏SERS免疫传感器的制备方法及其在宫颈癌血清生物标志物检测的应用
[0001]本专利技术涉及一种超灵敏SERS免疫传感器的制备方法及其在宫颈癌血清生物标志物检测的应用,属于宫颈癌检测
技术介绍
[0002]宫颈癌是最常见的妇科癌症之一,对妇女的健康构成了严重威胁。宫颈癌的早期筛查和准确诊断与有效治疗密切相关,从而提高患者的生存率。但是,在早期阶段,没有典型临床症状的宫颈癌患者很难被诊断。因此,迫切需要具有高灵敏度和特异性的用于早期筛查的新型诊断工具。如今,检测技术已经取得了长足的进步,监测肿瘤标志物的变化可以筛查和诊断癌症。生存素(survivin)是凋亡蛋白家族的成员,它不仅抑制肿瘤细胞凋亡,而且还促进其增殖和侵袭的能力。骨桥蛋白(OPN)是一种分泌的糖蛋白,在各种生理和病理过程(包括肿瘤的发生和发展)中起着重要的作用。根据survivin和OPN的生物学特性,它们的血清水平在肿瘤发生过程中会发生变化,可以被认为是肿瘤筛查和诊断的生物标志物。
[0003]目前,已开发出酶联免疫吸附试验(ELISA)、比色法、化学发光免疫测定(CLIA)和局部表面等离振子共振(LSPR)来检测肿瘤标志物。尽管这些方法具有一些优势,但高成本,费时和复杂的反应条件限制了它们的临床应用。表面增强拉曼散射(SERS)是一种方便,快速且超灵敏的传感技术,由于其独特的光谱指纹图谱,在单分子水平上的高选择性和灵敏性,已被广泛用于生物标志物的定量分析。特别地,窄线宽的SERS光谱特征峰有利于同时采集不同被分析物的信号,提 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种超灵敏SERS免疫传感器的制备方法,其特征是,在制备Au@SiO2阵列基底的过程中,使用Langmuir
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Blodgett方法获得单层SiO2微球阵列,然后用油水界面自组装法在SiO2微球表面覆盖单层AuNPs;通过有限差分时域模拟基底的增强电磁场;SiO2微球表面上的电磁场以及相邻微球之间的间隙均得到增强,证明Au@SiO2阵列基底具有高密度“热点”;4
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氨基苯硫酚(4
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ATP)和5,5'
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二硫代双
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(2
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硝基苯甲酸)(DTNB)的拉曼峰很容易区分,选择它们来制备两个探针,它们不仅可以通过
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SH键抓住Au
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AgNS,而且还可以通过形成酰胺键与抗体结合;将抗survivin抗体和抗OPN抗体与Au@SiO2阵列基底和Au
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AgNSs连接后,制成了由免疫基底和免疫探针组成的SERS免疫传感器。2.根据权利要求1所述的一种超灵敏SERS免疫传感器的制备方法,其特征是,包括:1)血液样本的采集和处理;2)免疫基底的制备;2.1)AuNPs的合成;2.2)SiO2微球的合成;2.3)亲水硅片的制备;2.4)单层SiO2微球阵列的制备;2.5)Au@SiO2阵列基底的制备;2.6)抗survivin抗体和抗OPN抗体偶联的Au@SiO2阵列基底的制备;3)Au
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AgNS的合成;4)Au
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AgNSs免疫探针的制备。3.根据权利要求2所述的一种超灵敏SERS免疫传感器的制备方法,其特征是,步骤1)血液样本的采集和处理:血清样本分为健康人群、CIN 1、CIN 2、CIN 3和宫颈癌患者五组,在早餐前抽取5mL静脉血,在4℃下3000r/min转速离心处理10min之后,将获得的血清样本保存在
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80℃下。4.根据权利要求3所述的一种超灵敏SERS免疫传感器的制备方法,其特征是,步骤2)免疫基底的制备:2.1)AuNPs的合成首先,将25mL 1mM的HAuCl4溶液加入100mL双口烧瓶中,加热至沸腾;随后逐滴加入4mL 38mM的二水合柠檬酸三钠水溶液,在100℃下700r/min转速剧烈搅拌15min后,溶液的颜色从浅黄色变为酒红色;最后待溶液自然冷却至室温后,AuNPs溶液制备完成;2.2)SiO2微球的合成遵循溶胶
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凝胶法合成SiO2微球;将10mL氢氧化铵、50mL乙醇与6mL超纯水混合并加热至30℃;然后将10mL原硅酸乙酯滴加到该混合溶液中,溶液的颜色逐渐变成乳白色;反应12h后,制备了SiO2微球;最后,通过在4000r/min转速下离心10min除去未反应的原料,并将它们分散在甲醇溶液中以制备浓度为5wt%的SiO2微球的悬浮液;2.3)亲水硅片的制备用食人鱼溶液处理硅片以获得亲水硅片;将过氧化氢以3:7的体积比加入浓硫酸中以制备食人鱼溶液;然后,将硅片切成10
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15mm的小片,浸入食人鱼溶液中30min,然后用超纯水和无水乙醇超声清洗3次;2.4)单层SiO2微球阵列的制备
单层SiO2微球阵列是通过Langmuir
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Bloadgate气液界面组装方法制造的;将氯仿以2:3的体积比添加到微球悬浮液中,然后每次取5μL SiO2微球悬浮液滴在水面上;SiO2微球自发地在水表面扩散,直至覆盖整个水面;接下来,通过将100μL的2wt%的SDS水溶液滴到水面上,形成了紧密排列的SiO2微球单层阵列,然后将其转移到干净的亲水硅片上;最后,将单层SiO2微球阵列硅片干燥以进一步使用;2.5)Au@SiO2阵列基底的制备首先,将4mL AuNPs胶体溶液和2mL己烷依次加入到烧杯中,然后逐滴添加2mL乙醇;加入乙醇后,AuNPs在油水界面形成金属光泽的薄膜;其次,利用组装好的单层SiO2微球阵列硅片拾取Au膜,干燥后得到Au@SiO2阵列基底,其底部具有单层SiO2微球阵列结构,顶部具有紧密堆积的单层AuNPs;2.6)抗...
【专利技术属性】
技术研发人员:卢丹,曹小卫,冉梦林,刘依帆,史宏灿,
申请(专利权)人:扬州大学,
类型:发明
国别省市:
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